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5. ANALISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA INTRODUCCIÓN El crecimiento de la población a nivel mundial y el aumento del uso del agua para diferentes actividades, ha incrementado los niveles de contaminación. Esta contaminación está relacionada con los vertidos de origen doméstico e industrial a los cuerpos de agua. En el caso de los residuos de origen doméstico, la carga contaminante está representada por altos porcentajes de materia orgánica y microorganismos de origen fecal. Estos microorganismos son causantes de enfermedades de origen hídrico, que generan altos porcentajes de morbi-mortalidad en la población. El control de la calidad microbiológica del agua de consumo y de vertido, requiere una serie de análisis dirigidos a determinar la presencia de microorganismos patógenos. Dentro de los microorganismos patógenos se encuentran el grupo de bacterias coliformes el cual está conformado por dos subgrupos: los coliformes totales y los termotolerantes. A estos últimos antes se los denominaba coliformes fecales. El cambio de nombre se debe a que se demostró que en el grupo de coliformes que se detectaban en siembras incubadas a temperaturas de 44,5 °C y en medios de cultivo específicos, sólo una parte del grupo eran bacterias de origen fecal; el resto eran bacterias ambientales. Se les puso entonces el nombre de bacterias coliformes termotolerantes debido a la alta temperatura de incubación (44,5 °C) en la cual se obtenía un óptimo desarrollo. En el grupo de bacterias termotolerantes está incluida la Escherichia coli, considerada como un organismo indicador de contaminación fecal. Se ha demostrado que esta bacteria siempre está presente en un número elevado en las heces de humanos y animales de sangre caliente y comprende casi 95% de los coliformes en las heces. Por esta razón, la contaminación de origen fecal puede ser evaluada mediante la determinación de coliformes termotolerantes o mediante la presencia de E. coli. En los valores guía para la calidad bacteriológica del agua de bebida (OMS, 1995), ambas determinaciones se consideran como alternativas aceptables y su presencia indica contaminación de origen fecal. Por esta razón, en los métodos descritos en el presente manual se encontrará que algunos están dirigidos a la investigación de coliformes OBJETIVOS Determinar la presencia de coliformes totales y fecales en una muestra de agua potable mediante el método de filtro de membrana MATERIALES Y REACTIVOS - Sistema de filtración Pinzas Mechero Cajas de petri con medio membrana de 0,45 micrómetros de diámetro PROCEDIMIENTO Método de filtro de membrana. La técnica de filtro de membrana se fundamenta en la filtración de un volumen determinado de muestra (100 mililitros o volúmenes menores según la densidad bacteriana esperada) a través de un filtro de membrana de 0,45 micrómetros de diámetro de poro, el cual es colocado sobre un medio de cultivo específico y luego incubado a la temperatura adecuada. El método de filtración con membrana para la determinación de coliformes totales y termotolerantes está aceptado por el Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater (American Public Health Association-American Water Works Association, 1999), que lo propone como una alternativa para la determinación de los coliformes totales y termotolerantes. Este método se recomienda para la determinación de bacterias en muestras de agua potable y agua de origen subterráneo. En una rampa de filtración estéril conectada a vacio. Desenvolver el filtro de la envoltura con la que se ha esterilizado. Separar el embudo de la base del filtro. Colocar la membrana filtrante sobre el portafiltros de la base del mismo. El manejo de las membranas se debe realizar con pinzas de punta plana o guantes de goma para no lesionarlas. Colocar el embudo sobre la base, teniendo cuidado de no lesionar la membrana y que esta quede bien centrada. La membrana filtrante queda ahora situada entre el embudo y la base-soporte del filtro. Filtrar 100ml de muestra de agua a través del filtro. Poner en marcha el sistema de vacío. Una vez filtrada toda la muestra, parar el sistema de vacío y separar el embudo de la base del filtro. Retirar con pinzas estériles o flameadas la membrana filtrante. Colocar la membrana sobre una placa petri e incubar en estufa a 37ºC durante 24 horas. Comprobar resultados a las 24 horas. CUESTIONARIO 1. De acuerdo a los resultados obtenidos que se puede decir de los sistemas de potabilización de agua de los puntos donde fueron tomadas las muestras 2. ¿Qué tipo de microorganismos patógenos se pueden encontrar en el agua y que enfermedades causan? 3. Explique la importancia de realizar análisis microbiológicos al agua 4. Mencione las técnicas más usadas para la determinación de coliformes totales y fecales en el agua potable BIBLIOGRAFIA American Public Health Association-American Water Works Association (1999). Standard Methods for the Examination of Water and Wastewate