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DIAGNOSTICO DE ANEMIA
INFECCIOSA EQUINA
MEDIANTE EL
LABORATORIO
Mic. Cristina Montalvo
Directora Livexlab
[email protected]
QUIENES ÉRAMOS…..
QUIENES SOMOS…..
DESIGNACION 2010
LIVEXLAB obtiene una designación como
Organismo de la Evaluación de la
Conformidad para realizar los ensayos
de AIE y BRUCELOSIS otorgado por el
� CONCAL (Consejo Nacional de la
Calidad) luego de una Evaluación de la
� OAE (Organismo de Acreditación
Ecuatoriano)
�
ANEMIA INFECCIOSA EQUINA
(Coggins)
BRUCELOSIS
(Rosa de bengala)
(Elisa competitivo)
�
TECNICAS DE DIAGNOSTICO
PARA AIE
Pruebas serologicas
1.
Prueba de inmunodifusión en gel de
agar (AGID) (prueba prescrita para el
comercio internacional) Coggins
2. ENZIMA INMUNO ENSAYO (ELISA)
Prueba de inmunodifusión en gel
de agar (AGID) COGGINS
�
Los anticuerpos precipitantes se producen
como resultado de la infección por la AIE y se
pueden detectar mediante la prueba AGID.
�
Las técnicas AGID disponibles en el mercado
utilizan como antígeno la proteína p 26 del
core del virus altamente purificada para evitar
cualquier reacción con antígenos proteicos no
relevantes y evitar reacciones inespecíficas.
�
�
�
VIRUS DE LA ANEMIA INFECCIOSSA EQUINA
FAMILIA RETROVIRIDAE
SUBFAMILIA LENTIVIRIDAE
REACCION OBTENIDA EN
COGGINS
Las reacciones específicas se
indican por las líneas de
precipitación entre el antígeno
de la AIE y el suero problema en
Un gel de agar a base de una
Solucion de agar noble en un
Buffer borato Ph 8.6
�
CONTROL POSITIVO
MUESTRA
ANTIGENO
REACCION OBTENIDA EN
COGGINS
�
y se confirman por ser idénticas a la reacción
que se da entre el antígeno y el suero control
positivo.
�
La lectura se debe realizar de 48 a 72 hrs.
CLASES DE REACCIONES
REPORTADAS EN LA PRUEBA
DE COGGINS (AGID)
NEGATIVO
Cuando las líneas de precipitación del control positivo
o suero de referencia continuan hacia el pocillo de la
muestra sin evidenciar ningún tipo de curvatura
CONTROL
POSITIVO
MUESTRAS
POSITIVA
�
Las líneas del control positivo o suero de
referencia se unen con la línea de la
prueba formando una línea continua.
POSITIVO
NEGATIVO
POSITIVO
DEBIL POSITIVA
�
Las líneas de referencia del control
positivo se dobla ligeramente hacia el
pocillo de la muestra, pero no forman una
línea continua. Estas reacciones requieren
de una observación cuidadosa y
fácilmente pueden ser pasadas por alto.
DEBIL
POSITIVO
CONDICIONES PARA REACCIONES
DEBILES POSITIVAS
Los potros que se alimentan de
yeguas infectadas pueden ser
persistentes hasta los 6 meses de
edad debido a anticuerpos del
calostro.
�
CONDICIONES PARA REACCIONES
DEBILES POSITIVAS
Durante el período
de incubación de EIA.
Si la muestra es obtenida
de dos a tres semanas
más tarde, la reacción
debería ser más fuerte.
�
CONDICIONES PARA REACCIONES
DEBILES POSITIVAS
� Portadores inaparentes que no tienen ningún signo
clínico de EIA pueden tener reacciones débiles en la
prueba durante períodos largos. En estos casos,
muestreando de nuevo raras veces causa un cambio
en la reacción.
a) PRUEBA DE EZIMA INUMO ENSAYO
(ELISA)
FUNDAMENTO DE LA PRUEBA DE ELISA
� La prueba detecta anticuerpos específicos contra la proteína p 26 del
�
�
virus de la AIE en suero de caballo .
Este antígeno esta adherido a los pocillos de prueba.
Los anticuerpos se unen al antígeno y añadiendo un conjugado
marcado con una enzima son fácilmente revelados mediante la adición
de un substrato especifico que al actuar la enzima producirá un color
observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un
espectrofotómetro o un colorímetro.
A mayor cantidad de Ac más color en la prueba (Positiva)
ELISA PARA AIE
ELISA PARA AIE
�
Un resultado positivo obtenido mediante ELISA
debe comprobarse de nuevo utilizando la
prueba AGID para confirmar el diagnóstico,
debido a que se han detectado algunos
resultados positivos falsos mediante ELISA.
COMPARACION ENTRE ELISA Y
COGGINS
�
Sensibilidad, es la proporción de verdaderos
positivos identificados por la prueba del total de
enfermos. La sensibilidad es, por lo tanto, la
capacidad del test para detectar la
enfermedad.
�
Especificidad, es la proporción de verdaderos
negativos identificados por la prueba del total de
sanos. En otras palabras, se puede definir la
especificidad como la capacidad para detectar
a los sanos.
DATOS DE LA CASA COMERCIAL VMRD
Especie
Muestra
Prueba
Sensibilidad Especificidad
Equina
Suero
Elisa
100 %
100%
Equina
Suero
Coggins
99 %
100%
PRUEBA DE COGGINS
(Octubre 2010-Enero 2011)
TOTAL
%
RESULTADO
1963
100
77
3.92
POSITIVAS
1886
96.07
NEGATIVAS
LAS 77 MUESTRAS POSITIVAS POR COGGINS O
INMUNODIFUSIÓN EN GEL AGAR (IDGA) FUERON
VERIFICADAS CON OTRA MARCA COMERCIAL (IDEXX) Y
ADICIONALMENTE POR ELISA.
261
100 %
TOTAL
261
100 %
TOTAL
79
30.27
%Positivos
76
29.11
%Positivos
182
69.73
% Negativos
185
70.88
%Negativos
3
1.15
% Positivos sin Coggins
Positivo (NEGATIVOS)
66.7 %
Positivos
2
EN ESTE CUADRO COMPARATIVO LA PRUEBA DE ELISA NOS INDICA QUE ES UNA PRUEBA
MAS SENSIBLE QUE COGGINS AYUDANDONOS A DETECTAR AQUELLOS CASOS QUE SE
ENCUENTRAN EN FASES INICIALES, NUESTRA RECOMENDACIÓN INICIAL FUE UTILIZAR EL
ELISA COMO UNA PRUEBA DE SCRENNING O TAMIZAJE, Y AQUELLAS QUE RESULTEN
POSITIVAS AL ELISA, CONFIRMARLAS CON COGGINS.
EN NUESTRO LABORATORIO LA USAMOS COMO PRUEBA DE RESPALDO INTERNO PARA
LOS CASOS DE RESULTADOS POSITIVOS POR LA PRUEBA COGGINS O IDGA.(ya que no se
puede dar el caso de Un Coggins Positivo con un Elisa Negativo)
ADICIONALMENTE LAS PRUEBAS POSITIVAS A VMRD FUERON CORRIDAS CON IDEXX
OBTENIENDO RESULTADOS EQUIPARABLES.
REQUISITOS PARA ENVIO DE
MUESTRAS
•Muestreos de más de 10 animales deben ser custodiados a cargo de
Agrocalidad.
•Llenar la solicitud del exámen y su hoja de filiación con:
Nombre equino con letra clara
Edad
Identificación individual (chip)
Sexo
Raza o Tipo
Pelo
Nombre y apellido del propietario
Predio
Provincia, Cantón y Parroquia
Firma del Propietario y del Médico veterinario Responsable
•Deben tener conocimiento que todos los resultados tanto Negativos como
positivos son reportados a Agrocalidad
MUESTRAS
• Suero
Equino en tubo vacutainner® de tapa Roja
• NO se aceptan tubos con anticoagulante (tapa
lila)
• Los resultados se entregarán con lectura 72 horas
(3 días laborables)
Cayambe, Pichincha – Ecuador
[email protected]
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