Download ANTIAMARÍLICA ATENUADA Y LIOFILIZADA, VACUNA

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Con fundamento en el numeral 4.11.1 de la Norma Oficial
Mexicana NOM-001-SSA1-2010, se publica el presente
proyecto a efecto que los interesados, a partir del 1º de
noviembre y hasta el 31 de diciembre de 2015, lo analicen,
evalúen y envíen sus observaciones o comentarios en idioma
español y con el sustento técnico suficiente ante la CPFEUM,
sito en Río Rhin número 57, colonia Cuauhtémoc, código
postal 06500, México, DF Fax: 5207 6890
Correo electrónico: [email protected].
ANTIAMARÍLICA
ATENUADA
LIOFILIZADA, VACUNA
Y
La vacuna es una preparación liofilizada de la cepa atenuada
17D del virus de la fiebre amarilla propagada en embriones de
pollo.
CARACTERIZACIÓN GENOTÍPICA. Cuando se utilicen
nuevas semillas maestra o de trabajo, los tres primeros lotes
consecutivos serán analizados para cambios en las secuencias
consenso de la semilla viral. Los resultados demostrarán la
consistencia del proceso de producción.
AGENTES EXTRAÑOS. MPB 1300. Cumple los requisitos del
lote semilla, estarán libres de agentes extraños.
MICOBACTERIAS. MPB 0720. Cumple los requisitos.
Demostrar que las semillas virales están libres de
Mycobacterium avium. Se podrán utilizar métodos
moleculares, cultivo u otro método validado.
ESTERILIDAD. MGA 0381. Cumple los requisitos.
MICOPLASMA. MPB 0740. Cumple los requisitos.
VIRUS DE LA LEUCOSIS AVIAR. Los lotes semilla
maestra y de trabajo estarán libres de los virus de la leucosis
aviar.
FABRICACIÓN
La producción de la vacuna se basa en el sistema de lote
semilla. El método de producción demostrará que se obtienen
de modo consistente vacunas inmunogénicas y seguras.
LOTE SEMILLA DEL VIRUS DE LA FIEBRE
AMARILLA
El lote semilla de la cepa del virus de la fiebre amarilla 17D
estará identificado por registros históricos que incluyen
información sobre el origen de la cepa, el método de atenuación
y el nivel de pase en el cual se demostró la atenuación e
inmunogenicidad por evaluación clínica.
Las semillas maestra y de trabajo utilizadas en la producción
de la vacuna, demostrarán que son seguras e inmunogénicas
por ensayos.
La propagación de las semillas se hace en embriones de pollo
obtenidos de aves saludables y libres de patógenos específicos.
Todas las semillas se almacenan a temperaturas inferiores a
60 °C bajo cero. Las semillas maestra y de trabajo no
contendrán ninguna proteína humana, suero o antibióticos.
La semilla de trabajo representa un pase solamente de la
semilla maestra y la vacuna final representa un pase solamente
de la semilla de trabajo.
Cada lote de semilla maestra y de semilla de trabajo cumplirán
con los siguientes requisitos:
IDENTIDAD. Los lotes semilla maestra y de trabajo, se
identifican como virus de la fiebre amarilla por pruebas
inmunológicas o métodos moleculares y comparadas con el
virus vacunal 17D. La prueba de identidad se realiza en por lo
menos un contenedor de cada lote de semilla maestra y de
semilla de trabajo.
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TITULACIÓN VIRAL. MPB 1020. Determinar el contenido
de virus en cultivos celulares incluyendo una preparación de
referencia para validar el ensayo. El título se expresa en
Unidades Internacionales por mililitro.
PRUEBA DE SEGURIDAD EN MONO. Cada lote
de semilla maestra y de trabajo cumplirá con las pruebas de
viremia (viscerotropismo), inmunogenicidad y neurotropismo
en un grupo de por lo menos 10 monos de prueba.
Se utilizan monos Macaca sp, que cumplen con los siguientes
requisitos: sanos, susceptibles y no inmunes a virus de la fiebre
amarilla antes de la prueba, que no hayan sido previamente
inoculados vía intracerebral o intraespinal con algún virus
neurotrópico por cualquier vía de administración o antígenos
relacionados con fiebre amarilla.
La dosis de prueba deberá consistir de 0,25 ml que contengan
no menos de 5,000 UI (3,7 log10) y no más de 50 000 UI
(4.7 log10) por titulación en cultivo celular. Cada mono es
inoculado bajo anestesia en el lóbulo frontal; y observados
durante un periodo de 30 días.
Viremia (viscerotropismo)
El criterio de viscerotropismo está indicado por la cantidad de
virus circulante presente en suero. Tomar muestras de sangre
al 2°, 4° y 6° día después de la inoculación de la dosis de prueba.
Separar el suero y preparar diluciones 1:10, 1:100 y 1:1 000 de
cada una de las muestras; e inocular por cuadruplicado los
cultivos celulares. El lote semilla cumple si en ningún caso
0.03 mL de suero contienen más de 500 UI y no más de un
suero contiene más del equivalente de 100 UI en 0.03 mL.
Inmunogenicidad. Determinar la actividad de anticuerpos
neutralizantes de la siguiente manera: Tomar muestras de
sangre de cada mono a los 30 días después de administrar la
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dosis de prueba y separar el suero. Preparar diluciones 1:10,
1:40 y 1:160 de los sueros de cada mono. Mezclar con un
volumen igual de virus vacunal cepa 17D a una dilución que
ha mostrado generar un número de placas óptimo, cuando se
titula en cultivo celular. Incubar las muestras virus-suero en
baño de agua a 37 °C durante 1 h y enfriar en baño de hielo.
Adicionar 0.2 mL de cada una de estas mezclas a cuatro
unidades (botellas, placas, etc.) con cultivos celulares y determinar la concentración viral. Inocular de la misma manera diez
unidades con la misma cantidad de virus más un volumen
equivalente de una dilución 1:10 de suero de mono que se
conozca que no contiene anticuerpos neutralizantes para el
virus de fiebre amarilla. Al final del periodo de observación,
comparar el número promedio de placas líticas obtenidas en las
unidades que reciben las mezclas de virus-suero no inmune y
aquellas que reciben virus y suero de los monos en estudio.
La prueba es válida si:
Por lo menos el 90 % de los sueros de los monos en la dilución
1:10 reducen el número de placas líticas al 50 % en los cultivos
inoculados, comparando con los resultados obtenidos en los
cultivos que contienen suero no inmune.
Los lotes semilla cumplen con la prueba si por lo menos el
90 % de los monos de prueba muestran ser inmunes.
Neurotropismo. Los monos en el grupo de prueba se comparan
con 10 monos inoculados con la vacuna de referencia, con
respecto a evidencia clínica de encefalitis y severidad de las
lesiones histológicas del sistema nervioso central.
El inicio y duración de las reacciones febriles no diferirán entre
los monos de prueba y los de referencia. El lote semilla no
cumple si esto sucede, adicionalmente si los signos clínicos de
encefalitis y hallazgos patológicos indican cambios en las
propiedades del virus.
Evaluación clínica. Cada mono será examinado diariamente
durante 30 días por personal capacitado en el conocimiento de los
síntomas clínicos de la encefalitis en primates, de acuerdo al
método de calificación que a continuación se explica:
En la evaluación se asignarán valores numéricos a la severidad de
los signos de encefalitis en los monos, tales como: paresia,
pérdida de la coordinación, letargo, temblor, o espasticidad. El
valor se asignará basándose en la siguiente escala:
1. Pelo erizado, suspensión de la ingestión de alimentos por
parte del animal.
2. Voz aguda (chillona), inactividad, movimientos lentos.
3. Movimientos vacilantes, temblores, incoordinación, debilidad de extremidades.
4. Incapacidad para levantarse, parálisis de las extremidades o
muerte.
A un mono que fallece se le asignará una calificación de “4” desde
el día de la muerte hasta el día 30 de observación clínica.
La calificación clínica de cada mono será el promedio de todas
sus calificaciones diarias; la calificación clínica para un grupo
de monos será la suma aritmética de las calificaciones
individuales asignadas a cada mono de ese grupo. Para
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satisfacer el criterio clínico de la prueba de neurotropismo, la
calificación clínica del grupo de monos a los que se inyectó el
virus que se esté probando, no excederá la calificación del
grupo de monos a los que se inyectó el virus de referencia.
En cada mono se examinará el ensanchamiento cervical y
lumbar de la médula espinal, así como la estructura específica
a cinco niveles del encéfalo.
Los ensanchamientos lumbar y cervical, se dividen cada uno
en seis fragmentos de tejido iguales (mediante corte transversal).
Esos fragmentos se deshidratan e incluyen en parafina, de los
bloques de parafina obtener cortes histológicos de 15 m de
espesor, y estos cortes se tiñen con galocianina. Cada uno de los
cortes histológicos consta de dos hemisecciones.
Del encéfalo obtener fragmentos de tejido entre 3 y 4 mm de
grosor mediante cortes transversales al nivel de las estructuras
que se indican a continuación:
Fragmento de tejido I. Corte a través del cuerpo estriado al
nivel del quiasma óptico.
Fragmento de tejido II. Corte a través del tálamo al nivel de
los cuerpos mamilares.
Fragmento de tejido III. Corte a través del mesencéfalo al nivel
de los folículos superiores.
Fragmento de tejido IV. Corte a través del puente y el cerebelo
al nivel de las olivas superiores.
Fragmento de tejido V. Corte de la medula oblonga a nivel de
la parte media de las olivas inferiores.
Los fragmentos de tejido así obtenidos también se deshidratan
e incluyen en parafina, de ellos obtener cortes histológicos de
15 m de espesor y teñir con galocianina. Cada corte
histológico consta de dos hemisecciones.
Evaluar al microscopio y dar un valor numérico a cada
hemisección de los ensanchamientos cervical y lumbar y a las
hemisecciones de cada estructura del cerebro, dependiendo del
grado de lesión que desarrollen:
Grado 1 (mínimo). De 1 a 3 infiltrados inflamatorios focales,
pequeños. Pueden acompañarse de cambios neuronales o
pérdida de unas pocas neuronas.
Grado 2 (moderado). Infiltrados inflamatorios focales más
extensos. Degeneración o pérdida de neuronas que afectan a
no más de un tercio de la población celular.
Grado 3 (severo). Degeneración o pérdida entre 33 y 90 % de las
neuronas, con infiltrado inflamatorio difuso o focal moderado.
Grado 4 (muy severo). Degeneración o pérdida de más del
90 % de las neuronas, con infiltración inflamatoria variable
pero con frecuencia severa.
Cada corte histológico del encéfalo abarca varias estructuras
anatómicas que contribuyen de diferente manera a la evaluación de las muestras de la prueba. Estás áreas se denominan
“áreas discriminadoras”, mientras que las estructuras que son
más susceptibles de sufrir replicación del virus en ellas,
son llamadas “áreas blanco”. Aunque tanto los monos rhesus
como cynomolgus son aceptables, las áreas discriminadoras y
el blanco son diferentes para las dos especies. La principal
diferencia es que en los monos cynomolgus, las regiones
lumbar y cervical de la médula son áreas blanco para el virus,
mientras que en los monos rhesus son áreas discriminadoras.
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Se obtienen tres calificaciones independientes por cada mono:
áreas discriminatorias, áreas blanco y áreas discriminatorias
más blanco en conjunto. Las calificaciones promedio globales
de las áreas discriminadoras solas y del conjunto de áreas
discriminadoras más áreas blanco, también se calcularán para
cada grupo de monos, y corresponden a la media aritmética de
las calificaciones individuales de los monos de ese grupo. Estas
dos calificaciones promedio globales se considerarán en la
determinación de la aceptabilidad del lote de semilla viral.
Para que se satisfaga el criterio histológico de la prueba de
neurotropismo, ninguna de las dos calificaciones promedio
globales para los monos de prueba son significativamente
mayores (a un nivel de significancia de 5 %) que las
calificaciones correspondientes para los monos de referencia.
Tanto el criterio clínico, como el histológico de la prueba de
neurotropismo, son satisfactorios para que un lote semilla viral
cumpla con los requerimientos de neurotropismo.
SUBSTRATO PARA LA PROPAGACIÓN DEL VIRUS
El virus se propaga en huevos fértiles procedentes parvadas
libres de patógenos específicos. Los microorganismos de interés
en las parvadas pueden variar de acuerdo a la región geográfica,
pero deben incluirse como mínimo los siguientes: adenovirus
aviares, virus de la encefalomielitis aviar, virus de la bronquitis
infecciosa aviar, el virus de la laringotraqueítis infecciosa aviar,
virus de la leucosis aviares, virus de la nefritis aviar, ortorreovirus
aviar, virus de la reticuloendoteliosis aviar, virus de la anemia del
pollo, virus del síndrome del huevo de cáscara blanda y sin
caparazón, virus de la viruela aviar, virus de la bursitis infecciosa,
virus A de la influenza, el virus de la enfermedad de Marek, virus
de la enfermedad de Newcastle, Mycobacterium avium,
Mycoplasma gallisepticum, Mycoplasma synoviae, Salmonella
gallinarum, Salmonella
pullorum, especies de Salmonella, Haemophilus paragallinarum.
La parvada no debe haber sido vacunada con la vacuna de virus
vivos de Newcastle además de que no deberán recibir ningún
agente quimioterapéutico como agentes antimicrobianos y
coccidiostáticos.
HUEVOS EMBRIONADOS CONTROL. Al menos 2 %,
pero no menos de 20 ni más de 50 huevos embrionados, se
mantienen sin inocular con el virus, como embriones control,
bajo las mismas condiciones que los embriones inoculados hasta
el momento de la cosecha viral. Al momento de la cosecha se
prepara con los embriones control un extracto de pulpa
embrionaria, el cual, después de la homogenización y
clarificación se somete a pruebas para investigar agentes
extraños por inoculación en cultivos celulares, en embriones
de pollo y por hemaglutinación.
embriones no será mayor de 12 días, contados a partir del
inicio de la incubación del embrión. Después de la homogenización y clarificación por centrifugación, el extracto
embrionario se somete a las pruebas siguientes o bien se puede
congelar a temperaturas de 60 °C bajo cero o menor, para su
examen posterior. Las cosechas no deben someterse a más de
un ciclo de congelación-descongelación.
IDENTIDAD. El virus de la cosecha individual se identifica
como virus de la fiebre amarilla, por pruebas de neutralización en
cultivos celulares, usando anticuerpos específicos, por ensayos
inmunológicos, por pruebas moleculares u otra prueba
validada.
ESTERILIDAD. MGA 0381. Cumple los requisitos. Probar
10 mL para cada medio.
MICOPLASMA. MPB 0740. Cumple los requisitos. Pueden
utilizarse métodos microbiológicos o detección de ácido
nucleico.
MICOBACTERIAS. MPB 0720. Probar 5 mL de la cosecha
individual. Demostrar la ausencia de Mycobacterium avium.
TITULACIÓN VIRAL. MPB 1020. Determinar el contenido de
virus en cultivos, incluir en el ensayo una preparación de
referencia. El título se expresa en Unidades Internacionales
por mililitro.
GRANEL FINAL
El granel final puede estar constituido por una sola cosecha
individual o por la mezcla de varias cosechas individuales.
Puede adicionarse un estabilizador.
Sólo un granel final que cumpla con las siguientes pruebas,
puede usarse para preparar el lote final.
ESTERILIDAD. MGA 0381. Cumple los requisitos.
CONTENIDO DE NITRÓGENO PROTÉICO. MPB 0860.
Determinar antes de la adición del estabilizador. No debe de
contener más de 0.25 mg por dosis humana.
TITULACIÓN VIRAL. MPB 1020. Determinar el contenido
de virus en cultivos celulares incluyendo una preparación de
referencia para validar el ensayo. El título se expresa en
Unidades Internacionales por mililitro.
PRODUCTO TERMINADO
La vacuna se envasa en recipientes unidosis o multidosis y se
somete a liofilización. El producto cumple con los siguientes
requisitos:
COSECHAS INDIVIDUALES
Después de la inoculación e incubación a temperatura controlada, se cosechan los embriones vivos, la edad de estos
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DESCRIPCIÓN. El liofilizado puede tener una apariencia
pulverulenta o de un sólido poroso.
El diluyente es agua de calidad inyectable.
El producto reconstituido corresponde a una preparación
transparente de color ligeramente amarillo, libre de partículas
extrañas.
ENDOTOXINAS BACTERIANAS. MGA 0316. Menos de
5 UI de endotoxina por dosis humana.
CONSERVACIÓN. Entre 2 y 8 °C. Proteger de la luz.
PRODUCTO TERMINADO
IDENTIDAD. Identificar al virus de la fiebre amarilla por
pruebas de neutralización en cultivos celulares.
Se debe realizar la prueba de identidad en cultivos celulares
(ensayo de reducción de placas, UFP) o pruebas moleculares.
La prueba de identidad por UFP se realiza en al menos un
frasco del lote final. Preparar con la vacuna de prueba dos
series de diluciones, una con suero no inmune y otra con suero
inmunoespecífico de título alto o con un anticuerpo
monoclonal conocido libre de agentes neutralizantes que
reaccionen con otros flavivirus.
La vacuna se rechaza si no hay una reducción del 50 % en el
número de placas en la dilución 1:10 de la vacuna mezclada
con suero inmune en comparación con la vacuna mezclada con
suero no inmune.
ESTERILIDAD. MGA 0381. Cumple los requisitos.
INOCUIDAD. MPB 0680. Cumple los requisitos.
TITULACIÓN. MPB 1020. Determinar la concentración de
virus en cultivos celulares.
Seleccionar al azar tres frascos de cada lote final para ser
analizados de manera individual el mismo día contra una
preparación de referencia de vacuna contra la fiebre amarilla
que sea calibrada en Unidades Internacionales contra el
Estándar Internacional para la vacuna de fiebre amarilla.
El título de la vacuna no es menor de 3.0 log10 de Unidades
Internacionales por dosis humana. El límite superior será
establecido por el fabricante, justificado por los estudios
clínicos y aprobado por la Autoridad Regulatoria Nacional.
ESTABILIDAD TÉRMICA. La prueba de termoestabilidad
se utiliza para demostrar consistencia de producción. Incubar
tres frascos de la vacuna liofilizada de prueba durante dos
semanas a 37 °C y mantener tres frascos a temperatura de 2 a 8°C.
Titular conforme a lo descrito en el MPB 1020, de manera
individual y simultánea la vacuna conservada de 2 a 8 °C, la
mantenida a 37 °C y la vacuna de referencia calibrada en
Unidades Internacionales. La vacuna pasa la prueba si no pierde
más de 1.0 log10 y si el título no es menor de 3.0 log10 de
Unidades Internacionales por dosis humana.
HUMEDAD RESIDUAL. MGA 0671. No más de 2 % (m/v),
MGA 0041. No más de 3 % (m/v).
OVOALBÚMINA RESIDUAL. Máximo 5 g de ovoalbúmina por dosis humana, determinada por un método
inmunoquímico adecuado.
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