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CTK OnSite - Prueba Rápida de Dengue Ag (Cassette/Suero o Plasma)
Número de Catálogo R00630C
4. Introduzca todos los reactivos a temperatura de interior (15º - 30ºC) antes de usar.
5. No utilice componentes de cualquier otra prueba como substituto a los componentes de
este kit.
6. No utilice muestras de sangre bemolizada para esta prueba.
7. Utilice ropa protectora y guantes desechables mientras utilice los reactivos del kit y los
especímenes clínicos. Lávese las manos con cuidado después de desempeñar la prueba.8.
8. Usuarios de esta prueba deberán seguir las precauciones universales US CDC para la
prevención de transmisión de HIV, HBV y otros patógenos.
9. No fume, beba, o coma en áreas en las que los especímenes están siendo manejados.
10. Deseche todos los especímenes y materiales como desechos biológicos.
11.
Maneje los controles de la misma forma que los especímenes de pacientes.
12.
Los resultados del examen deberán leerse dentro de 25 minutos después de que el
espécimen es aplicado a la ranura de muestra o a la almohadilla del dispositivo. Leer
después de 25 minutos puede dar resultados erróneos.
13.
No realice la prueba en un cuarto con mucho flujo de aire, por ejemplo, con ventiladores
eléctricos o un fuerte aire acondicionado
Diagnostico In Vitro
INTENCION DE USO
La prueba rápida OnSite Dengue Ag es un inmunoensayo cromatográfico de flujo lateral para la
detección cualitativa del antígeno del virus del dengue (Dengue Ag) en suero humano, plasma.
Su intención de uso es diagnosticar la infección por virus del dengue . Cualquier muestra
positiva confirmada con la prueba rápida OnSite Dengue Ag debe de ser confirmada con un
método alternativo y hallazgos clínicos.
RESUMEN Y EXPLICACION DE LA PRUEBA
PREPARACION DE LOS REACTIVOS E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO
Todos los reactivos están listos para utilizar como fueron provistos. Almacene los dispositivos
sin utilizar a temperaturas de 2º - 30º C. Los controles positivos y negativos deben guardarse a
2ºC - 8ºC, asegúrese que el dispositivo de prueba se encuentra en temperatura de interior antes
de abrir. El dispositivo de prueba es estable hasta la fecha de expiración impresa en el sobre
laminado. No congele el kit ni lo exponga a temperaturas mayores a 30ºC.
Los virus del dengue, una familia de 4 serotipos distintos de virus de dengue (Den 1,2,3,4), de
cadena simple, envueltos, virus de RNA positivo . El virus es transmitido por mosquitos diurnos
de la familia Stegemyia, principalmente Aedes aegypti, y Aedes albopictus. Hoy, más de 2.5
billones de personas que viven en áreas tropicales Asia, África, Australia, y América que están
en riesgo de infección por dengue. Un estimado de 100 millones de casos de fiebre de dengue y
250,000 casos de fiebre que amenazan la vida con dengue hemorrágico que ocurren alrededor
del mundo1-3.
La detección del anticuerpo Serológico IgM es el método más común para el diagnostico del
virus del dengue. Últimamente, la detección de antígenos liberados durante la replicación del
virus en pacientes infectados muestra resultados prometedores .
Permite el diagnostico desde el primer día o al día siguiente de que comienza la fiebre hasta el
9no día, una vez que se acabe la fase clínica de enfermedad, permute el tratamiento temprano
luego que se acabe la enfermedad, por lo tanto permite el tratamiento precoz en en lugar
adecuadoy4-.
La prueba rápida OnSite Dengue Ag esta desarrollada para detectar el antígeno de dengue
circular en suero o plasma. La prueba puede ser realizada por personal sin capacitación ni
equipo de laboratorio.
COLECCIÓN DEL ESPECÍMEN Y MANEJO
Considere cualquier material de origen humano como infeccioso y manéjelo utilizando
procedimientos de bio-seguridad estándar.
Plasma
1
Recolecte el espécimen de sangre en un tubo de colección de tapa lila, azul o
verde (conteniendo EDTA, citrato o heparina, respectivamente en Vacutainer®)
por punción.
Separe el plasma por centrífuga.
Cuidadosamente retire el suero en un nuevo tubo previamente etiquetado.
A
S
2
3
PRINCIPIO DE LA PRUEBA
La prueba rápida OnSite Dengue Ag es un inmunoensayo cromatográfico prueba de cassette
consiste en: 1) una almohadilla de conjugado con colorante tinto que contiene ratón
anti-dengue NS1 conjugado con oro coloidal de conjugado de dengue Ab, 2( una tira de
membrana nitrocelulosa que contiene una línea de prueba (Línea C) y una línea de control
(línea C). La línea T esta previamente rociada anticuerpo ratón anti-dengue NS1IgG y la línea
C esta previamente rociada con anticuerpos de los 4 serotipos del virus del dengue.
Suero
A
M
A
G
1
2
3
4
Coleccione el espécimen de sangre en un tubo de colección de tapa roja
(conteniendo ningún anticoagulante en Vacutainer®) por punción.
Permita que la sangre se coagule.
Separe el suero mediante centrífuga.
Cuidadosamente retire el suero en un tubo nuevo previamente etiquetado.
Los especímenes de prueba tan pronto y sea posible después de colectarse. En caso de no
hacer la prueba inmediatamente, almacene los especímenes entre 2° y 8°C.
Almacene los especímenes entre 2° y 8°C por hasta 5 días. Los especímenes deberán
congelarse a -20°C para un mayor almacenaje.
Cuando hay cantidad de muestra suficiente en el cassette, os extractos migran por acción
capilar a lo largo del cassette de prueba. Si están presentes Los anticuerpos ratón anti-dengue
NS1 en los extractos, se empatarían a los conjugados de proteína A. El inmunocomplejo es
entonces capturado por la membrana por el ratón anti-dengue NS1 formando una línea T color
tinto, indicando un resultado positivo de Dengue Ag.
Evite ciclos múltiples de congelamiento-descongelamiento. Antes de realizar la prueba, lleve los
especímenes a temperatura de interior lentamente y mezcle gentilmente. Los especímenes que
contengan materia de partículas visibles deberán ser aclarados por centrífuga antes de realizar
la prueba.
La ausencia de la línea T sugiere un resultado negativo. La prueba contiene un control interno
(Línea C) el cual debe exhibir una línea color tinto del inmunocomplejo de los conjugados de
proteína A anticuerpo de proteína A conjugado-de-oro, independientemente del desarrollo de la
línea T. De lo contrario, el resultado de prueba es inválido y el espécimen debe someterse a
prueba de Nuevo con otro dispositivo.
Paso 1:
REACTIVOS Y MATERIALES PROVISTOS
1.
2
3.
Cada kit incluye de 25 a 30 dispositivos de prueba, cada uno sellado en un sobre
laminado y con tres artículos en su interior:
a. Un cassette
b. un desecante
c. gotero de plástico
PROCEDIMIENTO DE ENSAYO
Paso 2:
Paso 3:
Paso 4:
µl
Nota: Practique un par de veces antes de la prueba para familiarizarse con el mini
gotero. Para transferir la muestra de5 µl de volumen.
Mantenga el gotero verticalmente y dispense el espécimen en la ranura de
muestra, asegurando que no hay burbujas de aire. Después añada (alrededor de
70-100 µL) de diluyente inmediatamente.
Diluyente de muestra (1 bote de 5 mL)
Un inserto (instrucciones de uso)
MATERIALES QUE PUEDEN SER PERO NO SE PROVEEN
1
2
Control Positivo
Control Negativo
3
4
MATERIALES REQUERIDOS NO PROVISTOS
REACTIVOS Y MATERIALES PROVISTOS
Cronómetro o Timer
Lancetero para sangre entera
Lleve el espécimen y los componentes de prueba a temperatura de interior si se
encuentran refrigerados o congelados. Mezcle el espécimen bien una vez
descongelado antes de llevar a cabo el ensayo.
Estando listo para llevar la prueba, abra el sobre y retire el dispositivo. Coloque la
prueba en una superficie limpia y plana.
Asegúrese de etiquetar el dispositivo con el número de identificación del
espécimen.
Llene el gotero plástico con el espécimen. El volumen de muestra es de alrededor 5
Resultado 1 gota de espécimen 1 gota de diluyente 15 minutos ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
1.
2.
3.
Para uso de Diagnostico y In Vitro
Este inserto deberá ser leído por completo antes de desempeñar el examen. No
leer las instrucciones puede llevar a tomar resultados imprecisos.
No abra el sobre laminado, hasta estar listo para llevar a cabo la prueba.
No utilice dispositivos caducos.
Paso 5:
Paso 6:
Inicie el Cronómetro
Los resultados pueden leerse en 10 minutos. Resultados positivos pueden ser
visibles tan pronto como en un minuto.
No lea los resultados después de 25 minutos. Para evitar confusión, deseche el
dispositivo luego de interpretar el resultado.
CTK OnSite - Prueba Rápida de Dengue Ag (Cassette/Suero o Plasma)
CONTROL DE CALIDAD
REFERENCIAS
El uso de los cassettes individuales de La prueba rápida OnSite Dengue Ag se describe en el
procedimiento de ensayo, haga un control positivo y un control negativo (provistos bajo
requerimiento si los controles de calidad no están disponibles en laboratorio) bajo las siguientes
circunstancias para monitorear el desempeño del cassette.
1
2
3
4
5
Un operador usa el kit por primera vez, antes de probar con especímenes.
Un nuevo kit se va a utilizar.
Un nuevo embarque se kits de va a utilizar.
La temperatura utilizada durante el almacenaje esta fuera de 2 – 30 C.
La temperatura del cuarto de pruebas esta fuera de 15 – 30 C.
1.
Gubler DJ, Clark GG.
Dengue/dengue hemorrhagic fever. The
emergence of a global health problem. Emerg Infect Dis
1995;1(2):55–57.
2.
Gubler DJ, Trent DW. Emergence of epidemic dengue/dengue hemorrhagic fever
as a public health problem in the Americas. Infect Agents Dis 1994;2:383–393
3.
Monath TP. Dengue: The risk to developed and developing countries. Proc Natl
Acad Sci U S A 1994;91:2395–2400.
European Authorized
Representative:
Index of CE Symbol
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS DE ENSAYO
The Netherlands. Tel.: +31 (0)6.516.536.26
Desempeño Clínico
CEpartner4U , Esdoornlaan 13, 3951DB Maarn.
1.
RESULTADO NEGATIVO: Si solo la línea C se desarrolla, la prueba indica
que no hubo la detección de c. trachomatis en el espécimen. El resultado es negativo.
Fabricado para: CTK Biotech, Inc.
6748 Nancy Ridge Drive, San Diego, CA 92121,
USA Tel: 858-457-8698, Fax: 858-535-1739,
E-mail: [email protected]
2.
RESULTADO POSITIVO: Si tanto las líneas C y T se presentan, la prueba
indica la presecia del Dengue Ag en el espécimen. El resultado es positivo.
PI-R0030C Rev. C Effective date: June-01-2006
Spanish Version
A
S
Muestras con resultados positivos deberán confirmarse con método(s) alternativo(s) y
averiguaciones clínicas antes de determinarse como positivas.
3.
INVÁLIDO: Si no se presenta una línea C, el ensayo es invalido
independientemente de la línea T, como se indica. Repita el ensayo con un nuevo dispositivo.
A
G
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPEÑO
Desempeño Clínico
Un total de 114 muestras de sujetos susceptibles fueron examinados con la prueba rápida
OnSite Dengue Ag y por una prueba comercial de EIA. La comparativa para todos los
sujetos se muestra en la siguiente tabla:
OnSite Dengue Ag – Prueba Rápida
1
2
3
4
5
6
7
M
A
Prueba de Latex
Positivo
Negativo
Total
Positivo
66
3
69
Negativo
2
43
45
Total
68
46
114
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS DE ENSAYO
El procedimiento de ensayo y la interpretación de los resultados del ensayo deben
seguirse de cerca al realizar pruebas de anticuerpo al virus del dengue en suero o
plasma de individuos.
La prueba rápida OnSite Dengue Ag esta limitada a la detección cualitativa de Dengue
Ag en suero humano o plasma. La intensidad de la línea de prueba no tiene una
correlación con la cantidad de anticuerpo presente en el espécimen.
Un resultado negativo para un individuo indica la ausencia de dengue Ag detectable.
Sin embargo, un resultado negativo no excluye la posibilidad de exposición a dengue
Ag.
Un resultado negativo puede ocurrir si la cantidad de dengue Ag presente en el
espécimen esta por debajo de los límites de detección del ensayo, o los anticuerpos
que se detectan no están presentes durante la etapa de la enfermedad en la que se
colecto la muestra.
Algunos especímenes que contienen inusualmente altas concentraciones de
anticuerpos heterofilos o factor reumatoide pueden afectar los resultados esperados.
Si persisten los síntomas, mientras no esta activo el resultado con la prueba rápida
OnSite Dengue Ag . Se recomienda volver a tomar la muestra al paciente días
después con un método de prueba alternativo tal como PCR, ELISA
os resultados obtenidos con esta prueba deben solo ser interpretados con otros
procedimientos de diagnóstico y averiguaciones clínicas.
In Vitro
Diagnostics