Download Aplicación del muestreo con fluidos orales y interpretación de los

Aplicación del muestreo con fluidos orales y
interpretación de los resultados diagnósticos
Jeff Zimmerman, DVM PhD
Iowa State University
Ames, Iowa
•  La meta es describir los puntos clave sobre
vigilancia basada en muestras de fluidos
orales en 20 minutos.
•  Es una charla muy breve sobre un tema muy
grande.
•  Mandame un correo eletronico - estaría
encantado de responder a sus preguntas
([email protected])
Fluidos orales para el diagnóstico?
Fluido oral … alternativa diagnóstico?
•  Que es “fluido oral”?
–  Saliva + transudado
•  Porque el fluido oral
es buen especimen
diagnóstico?
–  Contiene patógenos
y anticuerpos locales
y derivados del
suero
Cameron and Carmen, 2005
Patógeno
Ejemplos del uso
de fluidos orales
para detectar
infecciones en
seres humanos
Prickett & Zimmerman, 2010.
Bordetella pertussis
Coronavirus
Cryptosporidium parvum
Cytomegalovirus
Dengue virus
Diptheria toxoid
Ebola virus
Epstein-bar virus
Hantaan virus
Helicobacter pylori
Hepatitis A, B, C
Human herpes virus type 1
Human herpes virus type 6
Human leptospirosis
Influenza virus
Japanese encephalitis
Sarampión
Paperas
Paperas
Norwalk virus
Polio virus
Rotavirus
Rubella
Salmonella tyhpi
Treponema pallidum
Trypanosoma cruzi
Varicella-zoster virus
Yersinia entercolitica
Blanco
diagnostico
Fuente
IgG
virus (PCR)
IgG
IgG, IgA
IgG, IgM
IgG, IgA
IgG, PCR
IgG, IgA
IgG, IgM
IgG
IgM
virus (PCR)
virus (PCR)
IgM
IgA
IgG, IgM, IgA
IgM
Anticuerpos neutralizantes
IgM
IgG, IgA
IgA
IgA
IgG
IgA
IgG
IgG
virus (PCR)
IgG
Litt et al., 2006
Wang et al., 2004
Moss et al., 2004
Hochman et al., 1998
Cuzzubbo et al., 1998
Newcomb et al., 1969
Formenty et el., 2006
Hochman et al., 1998
Petraityte et al., 2007
Luzza et al., 1995
Amado et al., 2006
Scott et al., 1997
Collot et al., 2002
da Silva et al., 1992
Waldman, 1968
Prasad et al., 1994
Brown et al., 1994
Chiba and Nakao, 1972
Frankova and Sixtova, 1987
Moe et al., 2004
Berger, et a., 1967
Ward et al., 1992
Ben Salah et al., 2003
Herath, 2003
Baguley et al., 2005
Pinho et al., 1999
Furuta et al., 2004
Grönblad and Mäkelä,1986
Uso diagnóstico - nada nuevo
•  1986 Anticuerpos de fluidos orales utilizados
para detectar la infección por el VIH.
Microbiol 24(5):873
J Clin
Fluidos orales para el diagnóstico
… en cerdos?
Laboratorio de Diagnóstico Veterinario
Universidad Estatal de Iowa
2010: 11,000 pruebas de fluidos orales
2011: 32,500
2012: 60,100 en 2012
2013: >80,000 previsto
Tomar muestras de fluido oral se ha
hecho rutinario en muchas granjas
Cómo recoger muestras de fluido
orales de cerdos?
Colecta de fluidos orales de cerdos
1 2 3 4
La Receta
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Tomar muestras por la mañana temprano
Usar una cuerda de algodón
Ajustar la longitud al tamaño de los cerdos
Extraer el fluido de la cuerda
Poner el fluido en el tuboà refrigerar o congelar
Enviar al laboratorio
La Receta
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Tomar muestras por la mañana temprano
Usar una cuerda de algodón
Ajustar la longitud al tamaño de los cerdos
Extraer el fluido de la cuerda
Poner el fluido en el tuboà refrigerar o congelar
Enviar al laboratorio
± 70% de los cerdos
de un corral de 25-30
animales interactuará
con la cuerda en un
plazo de 20 minutos
Hay que usar cuerda de algodon
Material
ELISA de PRRS
(S/P y %+)
RT- PCR
para PRRSV
Algodon (n = 104)
0.47 (45%)
34 (33%)
Cáñamo (n = 104)
0.47 (46%)
5 (5%)
Nylón (n = 104)
0.47 (45%)
2
2%)
Hay que usar cuerda de algodon
Material
ELISA de PRRS
(S/P y %+)
Algodon (n = 104)
0.47 (45%)
34 (33%)
Cáñamo (n = 104)
0.47 (46%)
5 (5%)
Nylón (n = 104)
0.47 (45%)
2
En Parisina se puede encontrar la
cuerda de 100% algodón e incluso
rollos completos a precio de
mayoreo.
RT- PCR
para PRRSV
2%)
Mensage - Muestreo
•  La clave para el éxito es conocer el
comportamiento del cerdo
–  Capacitarse en el uso de la cuerda
–  Poner la cuerda en la parte más limpia del corral
–  Tomar las muestras de fluido oral en la mañana,
cuando los cerdos están más activos
Respuesta a la infección de virus
de PRRS en fluidos orales
de animales individuales (verracos)
Ingelvac® MLV
PRRSV en muestras
de suero y fluido oral
a lo largo del tiempo
Virus de
campo Tipo 1
Virus de
campo Tipo 2
Kittawornrat et al., 2010. Virus Res 154:170-176
Detección de el virus de PRRSV
en suero y fluido oral (PCR)
Kittawornrat et al., 2010. Virus Res 154:170-176
Detección de anticuerpos contra el virus de PRRS en
SUERO (izquerda) y FLUIDO ORAL (derecha).
Detección de anticuerpos (ELISA)
contra el virus de PRRSV en suero y fluido oral
22
Detección de anticuerpos (ELISA)
contra el virus de PRRSV en suero y fluido oral
Recuerdan los resultados
anteriores del PCR?
23
Respuesta a la infección de virus
de PRRS en fluidos orales
de poblaciones animales (corrales)
Olsen et al. 2013. J Vet Diagn Invest 25:328-335
Puede detectar la infección de PRRSV
si sólo unos pocos animales están infectados?
Diseño experimental
•  25 corrales, 25 cerdos en cada corral
•  5 “tratamientos”, 5 corrales por tratamiento
–  “cerdos infectados” = vacunados con vacuna viva
(PRRSV MLV)
Tratamiento
# de cerdos
PRRSV (+)
# de cerdos
PRRSV (-)
Prevalencia (%)
1
0
25
0%
2
1
24
4%
3
3
22
12%
4
5
20
20%
5
9
16
36%
Implementación del estudio
n = 90
Granja 1
• Vacunar
con vacuna
viva
Día 0
Día 13
(mañana)
Día 13
(tarde)
Día 14
(mañana)
Día 14
(tarde)
Implementación del estudio
n = 90
Granja 1
• Vacunar
con vacuna
viva
Día 0
n = 535
Granja 2
Muestreo
• FO (n = 25)
• Sangre (n = 535)
Día 13
(mañana)
Día 13
(tarde)
Día 14
(mañana)
Día 14
(tarde)
Implementación del estudio
n = 90
Granja 1
• Vacunar
con vacuna
viva
Día 0
n = 535
n = 535 + n = 90
Granja 2
Granja 2
Muestreo
• Colocar los
• FO (n = 25)
animales en
• Sangre (n = 535) los corrales
Día 13
(mañana)
Día 13
(tarde)
Granja 2
Muestreo
• FO - 5 de cada
corral (n =
125)
Día 14
(mañana)
Día 14
(tarde)
Implementación del estudio
n = 90
Granja 1
• Vacunar
con vacuna
viva
Día 0
n = 535
n = 535 + n = 90
Granja 2
Granja 2
Muestreo
• Colocar los
• FO (n = 25)
animales en
• Sangre (n = 535) los corrales
Día 13
(mañana)
Día 13
(tarde)
n = 90
Granja 2
Granja 2
Muestreo
Muestreo
• FO - 5 de cada • Sangre de los
corral (n =
vacunados (n
125)
= 90)
Día 14
(mañana)
Día 14
(tarde)
Resumen
•  Suero (n = 625)
–  535 de cerdos negativos a PRRSV
–  90 de cerdos positivos a PRRSV
•  Fluidos orales (n = 150)
–  25 muestras antes de introducir los
cerdos positivos a PRRSV
–  125 muestras despues de
introducir los cerdos positivos a
PRRSV
Las muestras fueron
analizadas en 6 laboratorios
Prevalencia
(num de cerdos
positivos)
Muestra probados por RT-PCR and ELISA
Lab 1
Lab 2
Lab 3
Lab 4
Lab 5
Lab 6
0% (0)
0%
0%
0%
2%
2%
2%
4% (1)
12%
16%
12%
8%
20%
20%
12% (3)
85%
95%
55%
55%
100%
90%
20% (5)
72%
88%
40%
32%
80%
72%
36% (9)
96%
96%
76%
76%
100%
96%
Probabilidad de detectar infección con el
virus de PRRS según en los resultados
Prevalencia
(cerdos +)
Probabilidad
numérica
0 en 25 (0%)
0% (0+)
4% (1+) 1 en 25 (4%)
12% (3+) 3 en 25 (12%)
20% (5+) 5 en 25 (20%)
36% (9+) 9 en 25 (36%)
Positivos a RT-PCR
(promedio entre 6
laboratorios)
Positivos a ELISA
(promedio entre 6
laboratorios)
0.7%
15%
80%
64%
90%
0.3%
15%
63%
85%
90%
Probabilidad de detectar infección con el
virus de PRRS según en los resultados
Prevalencia
(cerdos +)
Probabilidad
numérica
0 en 25 (0%)
0% (0+)
4% (1+) 1 en 25 (4%)
12% (3+) 3 en 25 (12%)
20% (5+) 5 en 25 (20%)
36% (9+) 9 en 25 (36%)
Positivos a RT-PCR
(promedio entre 6
laboratorios)
Positivos a ELISA
(promedio entre 6
laboratorios)
0.7%
15%
80%
64%
90%
0.3%
15%
63%
85%
90%
Probabilidad de detectar infección con el
virus de PRRS según en los resultados
Prevalencia
(cerdos +)
Probabilidad
numérica
0 en 25 (0%)
0% (0+)
4% (1+) 1 en 25 (4%)
12% (3+) 3 en 25 (12%)
20% (5+) 5 en 25 (20%)
36% (9+) 9 en 25 (36%)
Positivos a RT-PCR
(promedio entre 6
laboratorios)
Positivos a ELISA
(promedio entre 6
laboratorios)
0.7%
15%
80%
64%
90%
0.3%
15%
63%
85%
90%
Probabilidad de detección
basada en análisis de
regresión logística
Una muestra de fluido oral
Una muestra de suero
X
x
x
Prevalencia intra-corral
Aumento de la probabilidad de
la detección PRRSV con un
muestra de fluido oral frente a
una muestra de suero
X
x
x
Prevalencia intra-corral
Cómo implementar el monitoreo con
muestras de fluidos orales en su granja?
Sugerencias
•  Establecer una meta clara para el monitoreo
•  Escoge la prueba y la frecuencia de
muestreo que cumple con el objetivo
•  Recomendaciones - monitoreo de PRRSV
–  En WTF: 5 muestras (corrales) por nave
–  Cada dos semanas
–  ELISA es buena y barata y proporciona una
detección a largo plazo. PCR cuando es
necesario detectar la excreción del virus.
Cuál de los dos?
Gracias!
[email protected]