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kPCR (Parte I)
U n a n u e v a h e rr a m i e n t a d e l a b o ra t o ri o a l t a m e n t e
sensible para la cuantificación de carga viral en pacientes con VIH-1
Las pruebas de carga viral son de utilidad en la evaluación inicial y el seguimiento de los pacientes infectados con
VIH-1, no sólo porque permiten medir la replicación activa del virus sino también porque su concentración se
correlaciona tanto con la progresión como con la respuesta a la terapia antirretroviral. Además, en casos
especiales, contribuyen al diagnóstico inicial de infección aguda antes de sero-conversión.(1-7)
Figura 1. bDNA VERSANT 440 Siemens
Para la cuantificación de la carga viral de VIH-1 existen diferentes
métodos automatizados disponibles, que incluyen: RT-PCR,
amplificación de ácidos nucleicos y amplificación de señal, avalados
por el CDC y FDA de Estados Unidos.(6-8)
En nuestro laboratorio, contamos con la más alta tecnología para el
seguimiento de pacientes con VIH/SIDA, incluyendo Amplificación
de señal: bDNA VERSANT™ 440 HIV-1RNA 3.0 ASSAY Siemens®
(Fig. 1) y PCR en Tiempo Real: AmpliPrep/TaqMan HIV-1 Roche
Diagnostics® (Fig. 2) y recientemente, el nuevo VERSANT® HIV-1
RNA 1.0 Assay (kPCR) Siemens®6,7)
Figura 2. AmpliPrep/TaqMan HIV-1
Roche Diagnostics 440 Siemens
En el caso de bDNA, se reconocen algunos factores
que explican su menor variabilidad en comparación
frente a otros métodos: el reconocimiento de la
región POL del genoma del virus, caracterizada por
ser altamente conservada; la utilización de una
metodología de amplificación de señal en lugar de
amplificación del blanco, método basado en un
procedimiento de hibridación tipo sándwich el cual
utiliza sondas de captura (17 extensores de captura
individuales) y sondas diana (81 extensores diana
individuales); y lectura directa del RNA viral,
minimizando reacciones inespecíficas o
contaminación cruzada.(9)
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Por otra parte, los métodos de Real Time PCR se caracterizan por tener mayor sensibilidad y más
ventajas de automatización en todas las etapas del proceso.(10)
El límite inferior de detección de los métodos de cuantificación representa el menor número de copias
medible con niveles de precisión y exactitud aceptables, mas no significan la ausencia del virus e incluso
se ha demostrado que pacientes con niveles indetectables, en forma sostenida, desarrollan resistencia
en el mediano y largo plazo(5,6,7). En los últimos años se han publicado diferentes estudios sobre el
desarrollo de técnicas de PCR en tiempo real, PCR cinética y otras variantes cada vez más sensibles para
la cuantificación de carga viral, con límites de detección desde 35 copias/mL(11, 12) e incluso capaces de
cuantificar niveles menores de 1 virión.(11)
REFERENCIAS
1. Gleaves CA, Welle J, Campbell M, Elbiek T, Ng V, Taylor PE, et al. Multicenter evaluation of the Bayer® VERSANT™ 440 HIV-1 RNA 3.0 assay: analytical and clinical
performance. J Clin Virology 25 (2002): 205-216.
2. Oliver AR, Pereira SF, and Clark DA. Comparative Evaluation of the Automated Roche® TaqMan® Real-Time Quantitative Human Immnodeficiency Virus Type 1
RNA PCR Assay and the Roche AMPLICOR® Versión 1.5 Conventional PCR Assay. J Clin Microbiol. 2007;45:3616-3619
3. Fundación para la investigación y desarrollo de la salud y la seguridad social (FEDESALUD) y Asociación Colombiana de Infectología (ACIN). Guía y Modelo de
Atención del VIH/SIDA. Editorial Scripto Ltda., Bogotá D.C. Colombia.
4. Sterling TR and Chaisson RE Manifestaciones generales de la infección por el VIH. En: Mandell GL, Bennett JE y Dolin R. Enfermedades Infecciosas Principios y
Práctica. 6ª. Edición 2006 Elsevier España, S.A. p.1547-1566.
5. Nolte FS and Hill CE. Polymerase Chain Reaction and Other Nucleic Acid Amplification Technology. In: McPherson RA and Pincus MR. Henry´s Clinical Disgnosis
and Management by Laboratory Methods. 21Ed. 2007 Saunders Elsevier. p. 1239-1249.
6. Guidelines for the use of Antiretroviral Agents in Pediatric HIV Infection, Feb 28 2008. Working Group on Antiretroviral Therapy and Medical Management of HIVInfected Children.
7. Guidelines for the use of Antiretroviral Agents HIV.1 Infected Adults and adolescents, Jan 29 2008. Department of Health and Human Services.
8. U.S. Food and Drug Administration FDA. Complete list of donor Screening Assays for infectious Agent and HIV Diagnostics Assays. Consumer Affais Branch
(CBER). 2010.
9. Siemens Healthcare Diagnostics. VERSANT® HIV-1 RNA 3.0 Assay (bDNA). Protocol Assay bDNA 440. 2009.
10. Braun P, Ehret R, Wiesmann F, Frauke Z, Knickmann M, Ku R, Thamm S, Warnat G and Knechten H.
quantitative HIV-1 assays for viral load monitoring in clinical daily routine Clin Chem Lab Med 2007;45(1):93–99
Comparison of four commercial
11. Barletta J, Bartolome A, Constantine N Immunomagnetic quantitative immuno-PCR for detection of less than one HIV-1 virion Journal of Virological Methods
157 (2009) 122–132
12. Ruelle J, Jnaoui K, Lefèvre I, Lamarti N, Goubau P. Comparative evaluation of the VERSANT™ 440® HIV-1 RNA 1.0 kinetic PCR molecular system (kPCR) for the
quantification of HIV-1 plasma viral load Journal of Clinical Virology 44 (2009) 297–301
Autores: María Isabel Múnera - Randy Rojas
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