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FISIOLOGÍA DE LAS CÉLULAS SECRETORAS Las proteínas secretoras y de membrana se sintetizan en el RE y tienen secuencias de localización o péptidos señal Estas proteínas sufren modificaciones post-traduccionales en la luz del RE y una vez que se ensamblan y adquieren su estructura cuaternaria se envían al Golgi La vía secretora desde el el Golgi al exterior de la célula puede ser constitutiva (presente en todas las células) o regulada (sólo en células secretoras) 1 LA VÍA SECRETORA EL TRANSPORTE VESICULAR La vía secretora implica la translocación de proteínas entre compartimentos DE FORMA SALTATORIA, COMPARTIMENTO “DONANTE” CITOSOL FUSIÓN DE VESÍCULAS BROTE DE VESÍCULAS COMPARTIMENTO “DIANA” CARACTERÍSTICAS DEL TRANSPORTE VESICULAR: •A lo largo de la formación, tránsito y fusión de las vesículas, no existe mezcla entre el contenido de la vesícula y el citosol (ni de sus membranas) • El flujo vesicular ha de ser bidireccional (el tamaño de los compartimentos se mantiene constante) •Las proteinas de membrana residentes son retenidas o devueltas de forma activa a sus organelas (la composición de los compartimentos se mantiene constante) 2 TIPOS DE EXOCITOSIS Exocitosis secretora Exocitosis no secretora exocitosis de exposición de proteínas exocitosis expansiva VESÍCULAS TRANSPORTADORAS Las formación de vesículas requiere la presencia de proteínas de andamiaje como la clatrina. Las vesículas recubiertas de clatrina son vesículas inmaduras El recubrimiento de clatrina sirve también para el flujo retrógrado de las membranas La maduración de las vesículas concentra su contenido pH citosol = 7,2 NT V-ATPasa H+ NT, hormona H+ pH vesicular = 5 Transportador especifico 3 PROCESAMIENTO DEL CONTENIDO VESICULAR 1) SÍNTESIS DE PRE-PRO-PRECURSORES QUE GENERAN LA MOLECULA ACTIVA EN EL MOMENTO DE LA SECRECCIÓN 2) OBTENCIÓN DE DIFERENTES MOLÉCULAS ACTIVAS EN LA MISMA VESÍCULA 3) OBTENCIÓN DE VESÍCULAS CON DISTINTOS PÉPTIDOS DESDE UN PRECURSOR COMÚN 4) OBTENCIÓN DE DISTINTOS PRODUCTOS DE UN PREURSOR COMÚN DE FORMA ESPECÍFICA DE TEJIDO MECANISMOS DEL TRÁFICO Y LA SECRECCIÓN VESICULAR 1. Tráfico de vesículas a regiones específicas de la membrana (Target) donde se anclan (Docking) 2. Formación del complejo SNARE y aproximación de la sinaptotagmina (priming) (v-SNARE) t-SNARE 3. Entrada de Ca2+ que se une a sinaptotagmina y desencadena la fusión 4. Formación de un poro y secrección del contenido vesicular 4 Las proteínas SNARE son la diana de toxinas que interfieren con la secreción BoTX B,D, F, G TeTX BoTX C BoTX A, E VÍAS DE RECICLADO DE LAS VESÍCULAS Exocitosis “kiss and run” Exocitosis y endocitosis mediada por clatrina 5 TÉCNICAS PARA EL ESTUDIO DE LA SECRECIÓN Técnicas ópticas Técnicas con trazadores marcados 6 Capacitancia (pF) Técnicas electrofisiológicas 1 2 3 Tiempo (s) Técnicas amperométricas 20 pA 20 fF 100 s Exocitosis “kiss and run” 7