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Lectina de unión a manosa
(MBL)
Bioq. Marcela S. Maratea
Inmunologí
Inmunología
Htal. de Niñ
Niños Dr. R. Gutié
Gutiérrez
Inmunidad Innata
•
Primera línea de defensa contra los microorganismos.
•
Reconoce motivos conservados asociados a patógenos.
•
Posee la capacidad de resolver el proceso infeccioso y
de orientar el desarrollo de la inmunidad adaptativa.
Inmunidad Innata
Comprende: las barreras físicas, mecanismos celulares y humorales.
MECANISMOS CELULARES
- Granulocitos
- Macrófagos
MECANISMOS HUMORALES
- Sistema de complemento
- Células NK
- Proteínas de fase aguda
- Células dendríticas
- Interferones α y β
- Mastocitos
Sistema complemento
Conjunto de proteínas plasmáticas que circulan como zimógenos, que al ser activadas
por un mecanismo en cascada da origen a las moléculas con actividad biológica.
Funciones
•
Producción de inflamación (C3a,C5a)
•
Opsonización de microorganismos (C3b)
•
Mediación de efecto citotóxico directo (C5-C9)
•
Potenciación de la respuesta de linfocitos B (productos de
degradación del C3b)
Vías de activación
•
Vía clásica
•
Vía alterna
•
Vía de las lectinas
Vías de activación del complemento
Vía clásica
Vía de las lectinas
Vía alterna
Walport J. et al. N Engl J Med,2001; 344 (14):1054-1066
Homología entre MBL y C1q
Manosa
N-acetil-glucosamina
Inmunocomplejos
Fucosa
Medzhitov R. et al. N Engl J Med,2000, 343 (5):338-344
Estructura de la MBL
Polipéptido
N- terminal
Trímero
R. tipo colágeno
R. cuello R. unión a HC
Oligómero
Funciones de la MBL
1 - Actividad antimicrobiana a través de:
•
Activación de complemento por la vía de las lectinas.
•
Neutralización de virus.
•
Opsonofagocitosis independiente de complemento: se une
receptores expresados sobre la superficie de macrófagos
neutrófilos.
a
y
2 - Reconocimiento de células apoptóticas: promueve el
clearence de restos celulares.
3 - Modulación de la inflamación: se une al receptor de C1q en
neutrófilos, monocitos y macrófagos y estimula la producción de
citoquinas proinflamatorias.
Gen MBL2
•
El gen que codifica para la MBL (MBL-2) está localizado en
el brazo largo del cromosoma 10
•
El gen MBL-2 consta de 4 exones:
Polimorfismos en el gen MBL-2
•
Altera la oligomerización
Facilita la degradación
enzimática
•
Flemming L. et al. J. Biol. Chem.(2004) 279 :21302–21311
La frecuencia de las variantes alélicas difiere en los distintos
grupos étnicos:
Alelo B: Frecuencia 12% en población caucásica
22 % en asiáticos
3% en africanos
Alelo C: Frecuencia 2% en caucásicos
23% en africanos
Ausente en asiáticos
Alelo D: Frecuencia 3% en caucásicos
5% en africanos
Ausente en asiáticos
En Argentina sólo se encuentra el alelo B, como única
variante, con una frecuencia de 37%.
Polimorfismo del promotor MBL
Los niveles de MBL varían, incluso dentro de un mismo
genotipo, por polimorfismos adicionales en el promotor, los
cuales afectan la expresión de la proteína.
Posición -550 ( G-C )
Posición -221 (G-C)
Posición +4 (C-T)
alelo H / L
alelo X / Y
alelo P / Q
Haplotipo
HY
LY
LX
concentración
alta
media
baja
Diferencias en la distribución de estos haplotipos son la principal
causa de variaciones de los niveles de MBL en la población.
Madsen HO. et al. J Immunol 1998; 161: 3169–3175.
Casanova, et al. J. Exp. Med.2004;199 (10),1295-1299
La concentración plasmática de MBL varía con la edad:
Es menor al nacer, alcanza un máximo en las primeras
semanas de vida y disminuye hasta alcanzar los valores
del adulto.
La concentración plasmática es extremadamente variable:
0,1 µg/ml a 5µg/ml con una media de 1,7 µg/ml
(determinada por polimorfismos en el exón 1 y en la región
promotora)
Deficiencia de MBL
La deficiencia de MBL se define por
concentraciones séricas menores a 0,1 µg/ml,
asociadas a la presencia de variantes alélicas
estructurales y de la región del promotor.
Relevancia clínica de la deficiencia de MBL
La deficiencia de MBL se asocia con una susceptibilidad
aumentada a infecciones :
otitis media
neumonía
meningitis
osteomielitis
sepsis
Pacientes inmunocomprometidos
fibrosis quística
post transplante
posterior a quimioterapia
Pacientes pediátricos
Deficiencia de MBL en pacientes pediátricos
La función de la MBL es importante en el período en el cual
los anticuerpos maternos decaen, y la respuesta inmune
adaptativa es aún inmadura.
Los pacientes heterocigotas presentan elevado riesgo de
contraer infecciones agudas del tracto respiratorio; siendo
más severas en individuos homocigotas.
Koch A, et al. J Am Med Assoc, 2001; 10:1316–21.
Asociación entre MBL y HIV
La proteína gp120 es rica en manosa y es crítica para la
interacción del virus con el CD4 de los linfocitos T
(células blanco del virus).
LT CD4+
La MBL inhibe, in vitro, la infección por HIV por unirse
a gp 120.
Portadores homocigotas de variantes alélicas del gen
MBL2 poseen susceptibilidad aumentada a la infección
por HIV.
MBL
gp120
HIV
Individuos homocigotas y heterocigotas para los
polimorfismos en el gen MBL2 presentan sobrevida más
corta luego del diagnóstico de SIDA.
Garret P. et al. Lancet,1997; 349 :236-240.
Vallinoto AC. et al. Mol Immunol. 2006, 43(9):1358-62.
Asociación entre Deficiencia de MBL y Autoinmunidad
LES
La presencia de variantes alélicas de MBL confiere mayor
riesgo de desarrollo de la enfermedad.
•
En los lúpicos deficientes en MBL se ha asociado mayor
frecuencia de compromiso renal, aumento de riesgo a
infecciones y trombosis arterial.
•
Tsutsumi et al. Autoimmunity Reviews, 2005;4: 364–372
Ogden CA. et al. J Exp Med ,2001;194 :781– 95.
Seelen MA. et al. Rheumatol, 2005;44 : 111– 9.
Asociación entre Deficiencia de MBL y Autoinmunidad
LES
Tsutsumi et al. Autoimmunity Reviews, 2005;4: 364–372
Asociación entre Deficiencia de MBL y Autoinmunidad
Artritis Reumatoidea
Las bajas concentraciones de MBL se han asociado a comienzo
más temprano de la enfermedad y mayor severidad.
La MBL podría estar involucrada en la remoción de los
complejos inmunes depositados en las articulaciones, por
unirse a IgG con glicosilación alterada.
Garred P, et al. J Rheumatol. 2000; 27(1):26-34
Asociación entre Deficiencia de MBL y Autoinmunidad
Enfermedad celí
celíaca:
Los genotipos con bajos niveles de MBL fueron fuertemente
asociados con el desarrollo de síntomas de enfermedad y
aumento de la frecuencia de enfermedad autoinmune
asociada.
Boniotto, M.,et al. Mol Med ,2005; 83 : 308–315.
Cuantificación de MBL
Ensayos Cuantitativos
ELISA Sandwich: Utiliza un anticuerpo
monoclonal anti MBL como captura y el mismo
anticuerpo biotinilado para el revelado.
•
Determina la presencia de la proteína
independientemente de su actividad biológica.
•
Detecta preferentemente las formas
oligoméricas de alto peso molecular. El
reconocimiento de la proteína depende de las
estructuras repetidas.
•
MBL
Cuantificación de MBL
Ensayos Funcionales
1. MBL como lectina:
•
ELISA basado en la capacidad de la MBL de
unirse a manosa.
La MBL unida se determina con un anticuerpo
anti MBL biotinilado.
•
Este método detecta preferentemente MBL
de alto peso molecular (forma biológicamente
activa)
•
MBL
MANOSA
Cuantificación de MBL
Ensayos Funcionales
2. Actividad MBL/MASP
•ELISA
que evalúa la capacidad del complejo
MBL/MASP para clivar C4 luego de la unión a
manosa
•El
C4b formado se determina con un anticuerpo
anti C4b biotinilado.
Este método detecta preferentemente MBL de
alto peso molecular (forma biológicamente
activa)
•
MBL
C4b
MANOSA
Conclusiones
La función de la MBL es importante:
En los recién nacidos, donde aporta protección no específica
contra microorganismos durante la ventana de vulnerabilidad,
después del decaimiento de los anticuerpos maternos.
•
•
En el contacto primario con patógenos, a cualquier edad,
antes de la producción de anticuerpos específicos.
Deficiencia de MBL:
La principal manifestación clínica es aumento a la
susceptibilidad a infecciones sobre todo en los
primeros años de vida, o en condiciones de defecto
secundario del sistema inmune.
Conclusiones
Se justifica el dosaje de MBL en pacientes con infecciones
frecuentes o severas, no asociadas a otras deficiencias
del sistema inmune, en particular durante la infancia y en
individuos inmunocomprometidos.
Muchas gracias por su atención!!