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TA200113
PROGRAMA DE APOYO A PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN E INNOVACIÓN TECNOLÓGICA
PRIMERA RENOVACIÓN
DATOS GENERALES
Título
Evaluación del efecto inmomodulador sistémico y local en el aparato respiratorio de las
microvésiculas (MVs) de Mannheimia haemolytica A2 en ovinos
Área principal Área de las Ciencias Biológicas, Químicas y de la Salud
Área(s) secundaria(s)
Disciplina
Biología celular y microbiología
Especialidad Inmunología
Entidad académica de adscripción del proyecto
F.E.S. Cuautitlán
Duración
2 Años
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DATOS GENERALES DEL RESPONSABLE
Nombre
CYNTHIA GONZALEZ RUIZ
RFC
GORC7207021X8
Nacionalidad
Mexicana
Teléfono particular
58739209
Teléfono de oficina
56231854
Teléfono celular
0445551070307
Correo electrónico
[email protected]
Nivel máximo de
estudios
Doctorado
Nivel de PRIDE
Nivel de PAIPA
B
SNI
NO TIENE
Área
Área de las Ciencias Biológicas, Químicas y de la Salud
Disciplina
Biología celular y microbiología
Especialidad
Patología
Categoría y nivel
PROF ASO C T C
Entidad académica de adscripción
F.E.S. Cuautitlán
Domicilio dentro de la universidad donde recibir correspondencia
Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán, UNAM. Carretera Cuautitlán-Teoloyucan, Km 2.5, Col. San
Sebastian Xhala, Estado de México 54780, México.
Edificio L4., Lab. de Patología, Aula L411.
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DATOS GENERALES DEL CORRESPONSABLE
Nombre
JUAN CARLOS DEL RIO GARCIA
RFC
RIGJ630716JH2
Nacionalidad
Mexicana
Teléfono particular
22290339
Teléfono de oficina
5623 1828
Teléfono celular
55 1688-1607
Correo electrónico
[email protected]
Nivel máximo de estudios Doctorado
Nivel de PRIDE
C
Nivel de PAIPA
SNI
EMÉRITO
Área
Área de las Ciencias Biológicas, Químicas y de la Salud
Disciplina
Zootecnia, veterinaria y acuacultura
Especialidad
Patología y Mocotoxicosis
Categoría y nivel
PROF TIT B T C
Entidad académica de adscripción
F.E.S. Cuautitlán
Domicilio dentro de la universidad donde recibir correspondencia
Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán, UNAM. Carretera Cuautitlán-Teoloyucan, Km 2.5, Col. San
Sebastian Xhala, Estado de México 54780, México.
Unidad de Investigación Lab. 14
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AVANCES DE LA INVESTIGACIÓN
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METAS LOGRADAS
Para la obtención de MVs de Mannheimia haemolytica serotipo A2, se utilizó una cepa patógena de campo,
obtenida a partir del aislamiento de un pulmón neumónico, de un animal muerto por la enfermedad
recuperada en un trabajo previo. Paralelamente se trabajó con una cepa de referencia serotipo A1
(National Animal Disease Center, Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture, Ames, Iowa
50010). Se realizó la tinción de Gram y un análisis bioquímico para corroborar la morfología e identidad
bacteriana respectivamente. Posteriormente la bacteria se cultivó mediante métodos bacteriológicos
convencionales adicionando a los cultivos Gentamicina a dósis sublíticas para exacervar la producción de
MVs. Posterirormente se recuperó el sobrenadante de cultivo a partir del cual se ultrafiltró y posteriromente
ultracentrifugó bajo las condiciones descritas en el proyecto. Se eliminó el sobrenadante y la pastilla
resultante correspondió a MVs, la cual resuspendió en Hepes 10 mM con inhibidores de proteasas y
conservándola a -70 C hasta su uso. Esta metodología se realiza de forma cíclica de manera que las MVs
se van recuperando según se vallan utilizando a lo largo del proyecto. Sin embargo, en cada corrida de
500 ml de cultivo se recuperan aproximadamente 200 microgramos de proteína / ml de cultivo. A partir
de la obtención de Mvs, se realizó un biológico vacunal experimental con el que se inmunizó un rebaño de
corderos mantenidos en condiciones de campo. Dadas las condiciones del lugar, fue factible establecer 2
grupo más de comparación, que fueron inmunizados con una vacuna comercial y un grupo control que solo
recibió solución salina fisiológica. Se estableció el calendario de inmunización y se colectaron paralelamente
muestras de sangre y moco, para la evaluación mediante ELISA Indirecta de inmunoglobulinas del tipos IgA
e IgG. Cabe aclarar que hubo que modificar parte de la metodología y las metas de esta primera parte del
proyecto. A la inmunización del ganado se le consideró "Evaluación de la Respuesta inmune humoral" y la
sengunda parte en este primer año consistió en evaluar la "Respuesta de inmudad innata". Dicha situación
se modifico dadas las condiciones de los experimentos en campo con los corderos, la entrega de reactivos
y por lo tanto del desface de tiempo. A partir de la evaluación en campo, el grupo de animales inmunizados
por vía intranasal con MVs de M. haemolytica A2, resultó obtener los mejores títulos de respuesta de IgA e
IgG. Una vez que llegaron los reactivos se adquirieron tres corderos más que se mantuvieron en condiciones
controladas en las instalaciones de la FES. Cuautitlán para realizar la evaluación de la respuesta de inmunidad
innata. Para tal situación se obtuvieron periódicamente monocitos sanguíneos a partir de venopunción
para diferenciarlos en cultivo celular a células dendríticas mediante kits de diferenciación. Paralelamente
se obtuvieron macrófagos alveolares a partir de lavados traqueobronquiales para su cultivo y posterior
evaluación en la expresión de receptores de tipo Toll-4, cuando las células se sometan al contacto con MVs de
M. haemolytica A2. Como es evidente, esta parte del proyecto se modifico dado que los reactivos solicitados
en la primera propuesta tardarían más de 4 meses para su entrega.
Se asistió a un congresos nacional y se asistirá a uno internacional. Se culminaron dos tesis de licenciatura
de los alumnos Erick A. Ruíz Arce con la tesis titulada “Evaluación de un inmunógeno de microvesículas
(MVs) de Mannheimia haemolytica serotipo A2 en un rebaño de corderos de 3 semanas de edad, ubicado en
Zumpango, Estado de México”., y del alumno Gerardo A. Ramírez Rico con la tesis titulada: “Determinación
y caracterización de proteasas de secreción acarreadas en Microvesículas (MVs) de Mannheimia haemolytica
A2”. La alumna de maestría Christian Ávalos Gómez presentó avances del 80% y Elia Riqueleme Zubiría
presentó avances del 90% respectivamente.
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OBJETIVOS ALCANZADOS
Se utilizó una cepa de campo de M. haemolytica A2, obtenida de un trabajo previo, a partir de lesiones
neumónicas de un ovino muerto por el proceso en campo. Dicha cepa se identificó mediante kit comercial:
Api 20E (BioMérieux S.A). Se realizó primocultivo de dicha cepa, en agar sangre mediante estría cerrada,
incubando a 37 C por 24 h. A continuación, se realizó una tinción de Gram para verificar la morfología de
la bacteria y la pureza del cultivo. Para la obtención de MVs, se realizó el crecimiento bacteriano de la cepa
antes mencionada, en medios sólidos y posteriormente se resembró con estos mismos en medios líquidos
adicionando gentamicina y de esta manera exacerbando la producción de MVs. A partir del sobrenadante
de cultivo las MVs se obtuvieron mediante filtración y ultracentrifugación de los sobrenadantes. Las Mvs se
conservarán a -70 C hasta su uso. Este procedimiento se esta estado realizando de forma cíclica para la
obtención de MVs a partir de cultivos frescos.
El presente trabajo se evaluó un inmunógenos acelular a base de MVs de M. haemolytica A2. Este estudio
se realizó en un rancho de ovinos ubicado en Zumpango, Estado de México. Se utilizaron 60 corderos de 3
semanas de edad, con peso promedio de 3 kg, de las razas Romanov, Charollais y Suffolk. Los 60 animales
objeto de estudio, se ubicarán en tres grupos. El grupo A, correspondió a animales vacunados con MVs de M.
haemolytica A2 por vía intranasal, el Grupo B correspondió a animales vacunados con un biológico comercial
por vía subcutánea, y el Grupo C, correspondió a los animales del grupo control, vacunados con SSF (Solución
Salina Fisiológica) por vía intranasal y subcutánea respectivamente. A todos los animales, se le realizó
muestreos de sangre para obtención de sueros y de hisopo nasal 2 veces por semana, para la obtención de
moco durante 12 semanas. A partir del 9° muestreo los animales se inmunizaron de acuerdo al grupo que
pertenecían. Los animales inmunizados con MVs recibieron una segunda inmunización ocho días después
de la primera, según el calendario de inmunización previamente establecido. A partir de dichas muestras se
evaluó mediante ELISA Indirecta, inmunoglobulinas del tipo IgG e IgA. El grupo de animales inmunizados por
vía intranasal con Mvs de M. haemolytica A2, resultaron con altos títulos de Anticuerpos del tipo IgG e IgA.
Paralelamente se obtuvieron monocitos sanguíneos a partir de sangre periférica de ovinos mantenidos en
condiciones controladas en áreas de investigación en instalaciones de la FES Cuautitlán. Estas células han
sido sujeto de diferenciación celular en cultivo celular para llevarlas a Células Dendríticas. Así mismo a dichos
animales también se les realizó lavado traqueobronquial para la obtención de macrófagos alveolares. En
ambos casos, se ha estandarizado los cultivos celulares, para su posterior evaluación a la interacción con
MVs de M. haemolytica A2 y determinación tanto del CMH-II en Células Dendríticas y receptores tipo Toll-4
en macrófagos alveolares mediante diferentes técnicas de inmuno marcaje y detección así como de tipo
molecular.
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AVANCES DE LA INVESTIGACIÓN
En el presente proyecto se estableció como objetivo general evaluar la respuesta inmomoduladora de las
Microvesículas (MVs) de Mannheimia haemolytica A2 local en el aparato respiratorio y sistémico en ovinos.
Para tal efecto cumplimos con los objetivos particulares que fueron modificados parcialmente a lo largo de
este primer año. Muchas de las modificaciones realizadas, giraron en torno a la disponibilidad de animales
para inmunizar, la disponibilidad de reactivos en el país así como su tiempo de entrega, además de la
estandarización de pruebas inmunológicas mediante el uso de reactivos de experimentación en humanos,
ratón y finalmente en ovinos.
Los resultados que se generaron en esta primera etapa permitieron establecer las estrategias de
estandarización de las técnicas de obtención de células de participación primaria, que regulan la respuesta
de inmunidad innata en los ovinos como son las Células Dendríticas y los macrófagos alveolares. A partir
de los cultivos celulares ya montados, se realizará la segunda parte de la evaluación, que justamente
corresponde a la interacción de éstas células con MVs de Mannheimia haemolytica A2 en condiciones de
cultivo.
Paralelamente se inmunizó por vía intranasal un rebaño en condiciones de campo con un biológico elaborado
a partir de MVs de Mannheimia haemolytica A2. El rebaño se localizó en Zumpango Edo. de México. La unidad
de producción cuenta con alrededor de 200 ovinos, los cuales se encuentran distribuidos por edad y sexo. Se
utilizaron 60 corderos de 3 semanas de edad, con peso promedio de 3 kg, de las razas Romanov, Charollais
y Suffolk. Los 60 animales objeto de estudio, se ubicarán en tres grupos. El grupo A, correspondió a animales
vacunados con MVs de M. haemolytica A2 por vía intranasal, el Grupo B correspondió a animales vacunados
con un biológico comercial por vía subcutánea, y el Grupo C, correspondió a los animales del grupo control,
vacunados con SSF (Solución Salina Fisiológica) por vía intranasal y subcutánea respectivamente. A todos
los animales, se le realizó muestreos de sangre y de moco nasal mediante hisopo dos veces por semana,
durante 12 semanas. Con los primeros ocho muestreos se estableció la concentración basal de anticuerpos,
ya que éstos animales no son negativos a la bacteria, dado que M. haemolytica es una bacteria saprófita
de vías respiratorias altas. Al noveno muestreo se realizó la inmunización de los animales de acuerdo al
calendario de inmunización que se estableció. En el caso de los animales inmunizados con MVs se realizó una
segunda inmunización ocho días después de la primera, según el calendario de inmunización. A partir de la
obtención de las muestras, se evaluaron títulos de anticuerpos IgA e IgG en todos los casos mediante ELISA
Indirecta. La evaluación en campo resultó exitosa, pues los animales vacunados con MVs de Mannheimia
haemolytica A2, desarrollaron altos títulos de anticuerpos de tipo IgA e IgG en comparación con los otros dos
grupos evaluados.
Los datos aportados en este estudio, son el primer reporte de inmunización en ovinos con MVs de M.
haemolytica A2 en condiciones de campo. Dichos resultados contribuyen de forma relevante en la evaluación
de un inmunógeno que actualmente estamos patentando (MX/a/2011/011868). Dicho biológico se ha
evaluado solo en condiciones de experimentación por la misma vía (Intranasal), obteniéndose resultados
similares.
Los resultados de la inmunización en campo así como los resultados preliminares de las células que
intervienen en la regulación de la respuesta inmune innata y su interacción con las MVs de la bacteria,
aportan datos relevantes que permitirán esclarecer el papel que juegan éstas estructuras bacterianas
en la inducción de una respuesta inmune humoral cuando son utilizadas como biológico vacunal o bien
cuando se encuentran interaccionando con el sistema inmune innato como saprofitas en el sistema. Una
ventaja interesante del uso de estos biológicos es que dichas estructuras acarrean los principales factores de
virulencia de M. haemolytica serotipo A2. Dichos factores de virulencia son importantes ligándos activadores
de la respuesta inmune innata. Juntos, todos los componentes de las MVs, parecen actúar sinérgicamente
para modular la respuesta del huésped en diferentes formas, que bien pueden estimular la eliminación del
patógeno involucrado, mejorara la virulencia de la infección o ambas dependiendo de las circunstancias.
Además, las propiedades inmunogénicas de las MVs conducen a respuestas de protección bactericidas de
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anticuerpo a nivel de mucosas y sistémicos que actualmente son explotadas con fines vacunales en otras
especies bacterianas principalmente de afección en humanos. Por lo que nuestros resultados, son la primera
información generada en cuanto al uso de vacunas acelulares (MVs) en Medicina Veterinaria y ahora en
campo
El biológico vacunal a base de MVs, se ha evaluado en modelos animales de experimentación determinándose
la respuesta inmune humoral que inducen las MVs de la bacteria. Sin embargo es en este proyecto (PAPIIT
TR200113) hemos podido evaluar la respuesta a la vacunación en condiciones de campo así como aspectos
de inmunidad innata que aún falta integrar para tener un panorama más específico de respuesta inmune
que inducen las MVs de M. haemolytica A2 al interactuar con las principales células de la respuesta inmune
innata de las vías respiratorias de los ovinos, como son los macrófagos alveolares considerados primera linea
de defensa del pulmón y las Células Dendríticas diferenciadas a partir de monocitos de sangre periférica,
consideradas principales células presentadoras de antígenos y puente de comunicación directa entre la
respuesta innmune innata y la adquirida.
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PRODUCTOS COMPROMETIDOS EN LA SOLICITUD
Categoría: Formación de recursos humanos
Producto: Licenciatura
Descripción:
Se realizarán dos tesis de licenciatura, de la carrera de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Se tiene proyectado
realizar una tesis en cada año de los dos que se pretende dura el proyecto.
Categoría: Formación de recursos humanos
Producto: Maestría
Descripción:
Se cuenta con dos alumnas de Maestría, las cuales tiene diferentes grados de avances en sus posgrados.
Sin embargo, en ambos casos se estaría por iniciar la parte experimental de sus proyectos. De los cuales se
obtendrán las respectivas publicaciones que permitan a las alumnas obtener sus grados.
Categoría: Publicaciones (con arbitraje)
Producto: Artículo en revista especializada
Descripción:
A partir de los trabajos realizados en las 2 Maestrías con las que se esta trabajando, se desarrollaran 1
artículo por cada una. Dichas publicaciones se requieren en tiempo y forma para que las alumnas obtengan
sus respectivos grados.
Categoría: Otras publicaciones
Producto: Resumen de ponencias
Descripción:
Se pretende asistir a dos congresos nacionales anuales de divulgación científica relacionados con el área
(Reunión Anual de Investigación Pecuaria y Seminario Internacional de producción de ovinos en el trópico
y Congreso Nacional de Técnicos especialistas en ovinocultura) y a uno internacional (PANVET y/o ASM
CONFERENCE ON PASTEURELLACEAE)
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PRODUCTOS REPORTADOS
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MEMORIAS
Nombre de la memoria Reunión Nacional de Investigación e Inovación Pecuaria Agrícola Forestal y
Acuícola-Pesquera
Título del artículo DETERMINACIÓN Y CARACTERIZACIÓN PARCIAL DE PROTEASAS DE SECRECIÓN EN
MICROVESÍCULAS (MVs) DE Mannheimia haemolytica A2
Situación Publicado
ISBN
Con arbitraje Sí
Año 2013
Lugar de publicación Veracruz., México
Difusión Nacional
Con agradecimiento al PAPIIT Sí
Publicación de Investigación
Editorial INIFAP
Idioma Español
Actividad académica a la que pertenece la memoria
Tipo de actividad
Congreso
Nombre de la actividad
Reunión Nacional de Investigación e Inovación Pecuaria Agrícola Forestal y
Acuícola-Pesquera
Participantes
Nombre
CYNTHIA GONZALEZ RUIZ
Tipo de participante
Académico UNAM responsable
Participa
como
Coautor
Nombre de la memoria XVII Congreso Internacional de Ovinocultura
Título del artículo EVALUACIÓN DE UN INMUNÓGENO DE MICROVESÍCULAS (MVS) DE Mannheimia
haemolytica SEROTIPO A2 EN UN REBAÑO DE CORDEROS, EN ZUMPANGO, ESTADO DE MÉXICO.
Situación Aceptado
ISBN
Con arbitraje No
Año 2013
Lugar de publicación Acapulco, Guerrero., México
Difusión Internacional
Con agradecimiento al PAPIIT Sí
Publicación de Investigación
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TA200113
Editorial Asociación AMTEO
Idioma Español
Actividad académica a la que pertenece la memoria
Tipo de actividad
Congreso
Nombre de la actividad
XVII Congreso Internacional de Ovinocultura
Participantes
Nombre
CYNTHIA GONZALEZ RUIZ
06/04/2015 12:14
Tipo de participante
Académico UNAM responsable
Participa
como
Autor
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TA200113
FORMACIÓN DE RECURSOS HUMANOS
Nombre CHRISTIAN AVALOS GOMEZ
RFC AAGC880202V13
CURP AAGC880202MDFVMH02
Nivel obtenido Maestría
Concluyó tesis No
% de avance 70
Título de la tesis Identificación de receptor tipo Toll-4 en macrófagos alveolares de ovino que interaccionan
con Microvesículas (MVs) de Mannheimia haemolytica A2 en condiciones in vitro
Con agradecimiento al PAPIIT No
Fecha de titulación
Entidad académica de inscripción
F.E.S. Cuautitlán
Becado No
Nombre ELIA RIQUELME ZUBIRIA
RFC RIZE870905
CURP RIZE870905MMCQBL03
Nivel obtenido Maestría
Concluyó tesis No
% de avance 90
Título de la tesis Determinación del complejo principal de histocompatibilidad clase II en células dendríticas
(CD) de ovino en presencia de vesículas de membrana externa (MVs) de Mannheimia haemolytica A2
Con agradecimiento al PAPIIT Sí
Fecha de titulación
Entidad académica de inscripción
F.E.S. Cuautitlán
Becado Sí
Tipo de beca Maestría/Obtención de grado
Duración de beca 6 mes(es)
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PARTICIPACIÓN EN ACTIVIDADES ACADÉMICAS (actividades académicas realizadas)
Tipo Congreso
Nombre
Reunión Nacional de Investigación e Inovación Pecuaria Agrícola Forestal y Acuícola-Pesquera
Lugar donde se realizó
Veracruz., México
Difusión Nacional
Participantes en la actividad
Nombre
Tipo de participante
CYNTHIA GONZALEZ RUIZ
Académico UNAM responsable
Participa
como
Ponente
Tipo Congreso
Nombre
XVII Congreso Internacional de Ovinocultura
Lugar donde se realizó
Acapulco, Guerrero., México
Difusión Internacional
Participantes en la actividad
Nombre
CYNTHIA GONZALEZ RUIZ
06/04/2015 12:14
Tipo de participante
Académico UNAM responsable
Participa
como
Ponente
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SOLICITUD DE RENOVACIÓN
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OBJETIVOS ORIGINALES
OBJETIVO GENERAL:
Evaluar el efecto inmomodulador sistémico y local en el aparato respiratorio de las Microvesículas (MVs) de
Mannheimia haemolytica A2 en ovinos
Objetivos particulares:
a)Obtener MVs de M. haemolytica A2, mediante filtración y ultracentrifugación de sobrenadantes de cultivo
sobre estimulados con antibióticos de amplio espectro.
b)Inmunizar 15 corderos con MVs de M. haemolytica A2 por vías I.M e I.N en condiciones de campo.
c)Evaluar la respuesta inmune humoral (sistémica y local) de los corderos inmunizados en campo, a partir de
muestras de suero y moco nasal, para determinar títulos de IgG y localmente de IgA.
d)Realizar aislamiento bacteriológico antes y al final de la inmunización de los animales.
e)Obtención de monocitos y linfocitos B sanguíneos a partir de corderos inmunizados
f)Realizar cultivos celulares de linfocitos B (LB) y monocitos, diferenciado éstos últimos a Células Dendríticas
(CD) mediante Kits de diferenciación celular.
g)Evaluar CD y LB en cultivo celular con 300 µg de MVs de M. haemolytica A2, para determinar su activación
mediante la expresión de Interleucina 12 (IL-12), por el método de ELISA de Sandwich.
h)Caracterizar mediante RT-PCR, el receptor tipo Toll-4 y Moléculas del Complejo Mayor de Histocompatibilidad
de Clase II (CMH-II) expresadas en la superficie de ambos tipos celulares.
i)Evaluar CD activadas mediante Microscopía Confocal.
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REESTRUCTURACIÓN DE OBJETIVOS ORIGINALES
A continuación se describirán solo los objetivos modificados
Objetivos particulares:
b) Evaluar un inmunógeno elaborado con microvesículas (MVs) de Mannheimia haemolytica serotipo A2 por
vía intranasal en un rebaño de corderos en condiciones de campo.
d) Objetivo eliminado
e) Obtención de monocitos sanguíneos de sangre periférica de ovino clínicamente sano, para su cultivo y
diferenciación a células dendríticas mediante inmunokits.
f) Evaluar la expresión de Moléculas del Complejo Principal de Histocompatibilidad tipo II (CMH-II) en Células
Dendríticas de ovino previamente diferenciadas, al someterse a la presencia de Microvesículas (MVs) de M.
haemolytica A2 en condiciones de cultivo mediante inmunodetección.
g) Obtención de Macrófagos alveolares a partir de lavados traqueobronquiales en ovinos, para la
estandarización de sus cultivos celulares.
h) Determinación de la expresión de los receptores tipo Toll-4 en la superficie de macrófagos alveolares
mantenidos en condiciones de cultivo celular, al exponerse a diferentes concentraciones de MVs de M.
haemolytica A2. mediante RT-PCR
i) Evaluar la presencia de Interleucinas IL-10, IL-6, IL1-beta y TNF-alfa, en sobrenadante de cultivo celular de
macrófagos alveolares expuestos a diferentes concentraciones de MVs de M. haemolytica A2.
J) Evaluar mediante Microscopía Confocal:Células Dendríticas y Macrófagos Alveolares previamente
inmunomarcadas.
JUSTIFICACIÓN
El trabajo de evaluación en campo se adapto a las condiciones que ofrecía en ese momento el Rancho en el
que se desarrolló el trabajo, como lo fue el número de corderos y los parámetros de producción, además se
consideró que el biológico vacunal en trámite de patente ha sido evaluado principalmente en condiciones
experimentales por vía intranasal, por lo que se decidió reevaluar la vía de inmunización, pero ahora
en condiciones de campo. Evidentemente los resultados de la evaluación en campo reforzaran los datos
previamente obtenidos en condiciones experimentales, dándole más peso aún, al valor inmunólógico que
generan las MVs de M. haemolytica A2 al ser utilizadas como biológico vacunal por esta vía. Paralelamente
esta evaluación permitió comparar el biológico de MVs de M. haemolyticva A2 con un grupo de ovinos
inmunizados con un biológico comercial y un grupo control que solo recibió SSF. La evaluación reconoció
que los animales vacunados con MVs de M. haemolytica desarrollaron altos títulos de antiuerpos del tipo
IgA e IgG, además de que se compararon parámetros productivos, resultando los animales vacunados con
MVs, con mejor conversión alimenticia que el resto de los animales evaluados. Por otro lado, se decidió
trabajar solamente con monocitos sanguíneos de sangre periférica de ovino para su posterior diferenciación
a células dendríticas, dado que fue más fácil encontrar en el mercado anticuerpo anti-ovino para monocitos
que para linfocitos B. Por otro lado la técnica de diferenciación mediante inmunokit, trabaja solamente
con monocitos. Así mismo se decidió trabajar con macrófagos alveolares, ya que esta es la primera linea
de defensa pulmonar y es una célula de respuesta local que se ve directamente afectada por la exotoxina
(Leucotoxina-LKT) de la bacteria cuando ésta, se encuentra en fase de crecimiento logarítmico y por lo tanto
en proceso de invasión. Las Microvesículas (MVs) de M. haemolytica A2, acarrean LKT activa, evidencia
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de resultados obtenidos en un trabajo previo. Los macrófagos son células fagocitarias por naturaleza y
presentadoras de antígeno, por tanto uno de los principales componentes de la inmunidad innata en los
mamíferos. La importancia de las células presentadoras de antígeno (CPA) profesionales radica en su
capacidad de iniciar y modular respuesta inmune; de manera específica, para la correcta activación de los
linfocitos vírgenes. Los macrófagos y células dendríticas se encuentran como centinelas ubicados en las
principales entradas de microorganismos, como son la piel y mucosas de vías respiratorias en este caso.
Básicamente por eso nos interesó evaluar este tipo celular que además expresa receptores tipo Toll-4, los
cuales podrían interaccionar con el LPS anclado en la membrana que constituye la estructura de las MVs de
M. haemolytica. Una forma de evaluar que efectivamente se esta desencadenando una interacción inmune
adecuada entre el receptor Toll-4 y las MVs, es la presencia en de interleucinas el medio de cultivo resultados
de la correspondiente transduccion de señales. Por lo que se evaluaran dos interleucinas de Inmunidad
Adquirida y dos de respuesta inflamatoria, como son la IL-10, IL-6, IL-4 y TNF- alfa.
Otro de los factores que condicionó nuestra modificación de objetivos, fue la adquisición de reactivos. Ya que
nos enfrentamos con la compra de reactivos a través de un laboratorio que se comprometió a entregar en
determinado tiempo los reactivos solicitados. Sin embargo, después del 3° mes, el laboratorio se retracto de
su compromiso. Por lo que nos dimos a la tarea de buscar otras opciones. Afortunadamente encontramos un
laboratorio (CIPQUIM S.A. de C.V.) que nos consiguió mucho más rápido y relativamente más económicos los
reactivos, dadas sus buenas relaciones con las aduanas mexicanas. Sin embargo, esta situación determinó
cierto retraso y desface de actividades entre los alumnos de maestría y licenciatura. Por lo que se decidió
comprar 3 corderos clínicamente sanos, mantenidos en unidades experimentales en instalaciones de la FES.
Cuautitlán, a partir de los cuales se han estado obteniendo las células en cuestión.
Solo hasta entonces que llegaron los reactivos, se comenzó con la estandarización de la obtención de ambos
tipos celulares. Así como su inmunodiferenciación.
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METAS ORIGINALES
En el Primer año se obtendrán Microvesículas bacterianas a partir de cultivos bacterianos coestimulados con
Gentamicina. Se iniciara la inmunización de 15 corderos.Una vez culminado el calendario de inmnización, se
obtendrán paralelamente muestras de suero y moco nasal para la evaluación de IgG e IgA respectivamente
mediante ELISA de Sandwich así como también se realizara aislamiento bacteriano antes y al final del
calendario de inmunización.Posteriormente se realizara la obtención de sangre completa de los diferentes
grupos inmunizados para la separación de linfocitos y monocitos sanguíneos, mediante gradiente de Ficoll y
anticuerpos específicos para receptores de superficie. Una vez obtenidas las células se procederá a montar
los cultivos celulares de linfocitos B (LB) y Monocitos. A estos últimos se les someterá a diferenciación celular
para llevarlos a Células Dendríticas (CD) mediante Kit de diferenciación celular.
En el primer año se tiene proyectado asistir a 2 congresos nacionales y 1 internacional, a lo largo del primer
año se pretende sacar una tesis de licenciatura y 1 artículo de publicación internacional. Así como avances
del 50% mínimo de dos alumnas de Maestría.
Para el segundo año se realizaran los ensayos en cultivo celular de LB y CD al interaccionarlos con 300
microgramos de MVs de M. haemolytica, se determinará IL-12 mediate ELISA, así mismo se detectarán en
las CD receptores tipo toll-4 y del CMH-II, para posteriormente correlacionarlos con la respuesta inmune
humoral.Se asistirá a 2 congresos nacionales y 1 internacional, 1 tesis de licenciatura, 1 articulo internacional
y 85 a 95% de avances en los tesistas de maestría.
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TA200113
REESTRUCTURACIÓN DE METAS ORIGINALES
La inmunización en campo se desarrolló, modificando particularmente, el número de animales a inmunizar,
la vía de inmunización y la evaluación comparativa con dos grupos más de corderos que fueron inmunizados
con una vacuna comercial y un grupo control inmunizado solo con SSF. El aislamiento de la bacteria antes y
después de la inmunización no se realizó. Con respecto a los tipos celulares a trabajar, solo nos quedamos
con los monocitos sanguíneos, a partir de los cuales se está realizando la inmunodiferenciación a Células
Dendríticas y los linfocitos B, se cambiaron por macrófagos alveolares, por el papel que éstas juega en la
respuesta de inmunidad innata y adquirida a nivel pulmonar.
En este primer año se asistió a dos congresos uno nacional y uno internacional. Se culminaron al 100%
con dos tesis de licenciatura de dos alumnos que se anexaron al inicio del proyecto y los cuales están en
trámite de titulación con los trabajos titulados: “Evaluación de un inmunógeno de microvesículas (MVs)
de Mannheimia haemolytica serotipo A2 en un rebaño de corderos de 3 semanas de edad, ubicado en
Zumpango, Estado de México”, por el alumno Erick Alonso Ruíz Arce y la tesis titulada “Determinación y
Caracterización de Proteasas de secreción acarreadas en Microvesículas (MVs) de Mannheimia haemolytica
A2”, por el alumno Gerardo A. Ramírez Rico. Así mismo, las alumnas de Maestría presentaron avances
considerables en sus respectivos proyectos: Elía Riquelme Zubiría presntó avances del 90% y Christian Ávalos
Gómez del 80%. Sin embargo, no se logró sacar la publicación comprometida, la cual esta en redacción y se
tiene avances del 60%.
JUSTIFICACIÓN
Las metas originales se modificaron porque hubo que adecuar los objetivos en base a las circunstancias
que ya fueron ampliamente descritas. Sin embargo, los objetivos y metas ya modificadas se alcanzaron
satisfactoriamente. Se comprometió una tesis de Licenciatura para el primer año y al final se obtuvieron
dos. Por el otro lado, las alumnas de maestría están entregando avances considerables de sus respectivos
proyectos y el artículo comprometido tendrá que publicarse en el transcurso del primer semestre del
siguiente año.
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PARTICIPANTES
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TA200113
ACADÉMICOS UNAM
Nombre
JORGE ALFREDO CUELLAR ORDAZ
RFC
CUOJ550113
Nivel máximo de estudios
Maestría
Nombramiento académico
PROF TIT B T C
Entidad académica de
adscripción
F.E.S. Cuautitlán
Actividades que realizará en el proyecto
El Dr. J. Alfredo Cuellar colabora directamente en todos los aspectos referentes a los ovinos, como es el caso
de la alimentación, toma de muestras (sangre, moco) esta al pendiente de los procedimientos de manejo ya
sea sanitario y experimental. Así mismo estará a cargo de la organización y ponencia del Evento a realizar
a lo largo del próximo año. Paralelamente, el Dr., cotutora tanto trabajos de maestría como de licenciatura,
derivados del proyecto directamente.
Nombre
LUCIA ANGELICA GARCIA CAMACHO
RFC
GACL640713
Nivel máximo de estudios
Doctorado
Nombramiento académico
PROF TIT A T C
Entidad académica de
adscripción
F.E.S. Cuautitlán
Actividades que realizará en el proyecto
La Dra. Camacho tiene una participación directa al colaborara con las alumnas de maestría para estandarizar
las pruebas moleculares con las que se determinarán los receptores tipo Toll-4, así como las técnicas de
Inmunodetección para interleucinas a partir de sobrenadantes de cultivo de macrófagos alveolares. Su
asesoría incide en este punto, dada la basta experiencia que la Dra. posee en esta área.
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TA200113
ALUMNOS UNAM
Nombre
CHRISTIAN AVALOS GOMEZ
Género
F
Lugar de nacimiento Estado de México
CURP
AAGC880202MDFVMH02 RFC AAGC880202V13
Correo electrónico
[email protected]
Número de cuenta
406023117
Nivel máximo de
estudios
Maestría-Realización de tesis
Título de la tesis
Identificación del receptor tipo Toll-4 en macrófagos de ovino y su activación, al interaccionar con
Microvesículas (MVs) de Mannheimia haemolytica A2 en condiciones in vitro
Entidad académica de inscripción del alumno
Facultad de Estudios Superiores "Cuautitlán"
Semestre
4
Promedio
8.29
Porcentaje de avance de estudios 70.0 %
Solicita beca No
Actividades que realizará en el proyecto
La alumna se encuentra en la etapa final de su proyecto de investigación titulada: Identificación del
receptor Toll-4 en macrófagos alveolares de ovino que interacciona con Microvesículas (MVs) de Mannheimia
haemolytica A2
Nombre
DANIEL RODRIGUEZ OLMOS
Género
M
Lugar de nacimiento Distrito Federal
CURP
ROOD900402HDFDLN03 RFC ROOD900402
Correo electrónico
[email protected]
Número de cuenta
306686452
Nivel máximo de
estudios
Licenciatura-Estudios terminados
Título de la tesis
ESTANDARIZACIÓN DE UNA TÉCNICA DE OBTENCIÓN DE MONOCITOS SANGUÍNEOS DE OVINO PARA SU
DIFERENCIACIÓN A CÉLULAS DENDRÍTICAS (CD)
Entidad académica de inscripción del alumno
Facultad de Estudios Superiores "Cuautitlán"
Semestre
Culminados
Promedio
8.46
Porcentaje de avance de estudios 100.0 %
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TA200113
Solicita beca Sí
Tipo de beca Licenciatura / Titulación
Duración de beca 4 mes(es)
Actividades que realizará en el proyecto
El alumno trabajará paralelamente con la alumna de maestría Elia Riquelme Zubiría, para la obtención de
monocitos sanguíneos a partir del sangrado de 3 corderos clínicamente sanos, mantenidos en unidades
experimentales en la FES. Cuautitlán. El alumno se hará cargo parcialmente, del cuidado y alimentación de
dichos animales. Paralelamente el alumno, realizará la estandarización del cultivo celular de monocitos para
su posterior diferenciación a Células Dendríticas.
Nombre
ELIA RIQUELME ZUBIRIA
Género
F
Lugar de nacimiento Estado de México
CURP
RIZE870905MMCQBL03
RFC RIZE870905
Correo electrónico
[email protected]
Número de cuenta
303830388
Nivel máximo de
estudios
Maestría-Realización de tesis
Título de la tesis
Determinación del Complejo Principal de Histocompatibilidad clase II en Células Dendríticas de ovino en
presencia de vesículas de membrana externa de Mannheimia haemolytica A2
Entidad académica de inscripción del alumno
Facultad de Estudios Superiores "Cuautitlán"
Semestre
4
Promedio
9.0
Porcentaje de avance de estudios 100.0 %
Solicita beca Sí
Tipo de beca Maestría/Obtención de grado
Duración de beca 6 mes(es)
Actividades que realizará en el proyecto
La alumna actualmente se encuentra cursando su prorroga ante el programa de maestría al cual esta inscrita,
pues hubo un retraso en el desarrollo de su proyecto, dado que los reactivos solicitados no se entregaron en
tiempo y forma por el laboratorio. Su proyecto de investigación titulado Determinación del Complejo Principal
de Histocompatibilidad clase II en Células Dendríticas de ovino en presencia de vesículas de membrana
externa de Mannheimia haemolytica A2, se encuentra en fase terminal.
Nombre
ERICK ALONSO RUIZ ARCE
Género
M
Lugar de nacimiento Estado de México
CURP
RUAE870810HMCZRR00 RFC RUAE870810
Correo electrónico
06/04/2015 12:14
[email protected]
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PAPIIT
TA200113
Número de cuenta
303232586
Nivel máximo de
estudios
Licenciatura-Estudios terminados
Título de la tesis
Evaluación de un inmunógeno de microvesículas (MVs) de Mannheimia haemolytica serotipo A2 en un rebaño
de corderos, ubicado en Zumpango, Estado de México
Entidad académica de inscripción del alumno
Facultad de Estudios Superiores "Cuautitlán"
Semestre
CULMINADOS
Promedio
8.36
Porcentaje de avance de estudios 100.0 %
Solicita beca No
Actividades que realizará en el proyecto
El alumno desarrolló su tema de tesis de licenciatura titulado: “Evaluación de un inmunógeno de
microvesículas (MVs) de Mannheimia haemolytica serotipo A2 en un rebaño de corderos, ubicado en
Zumpango, Estado de México”. Este trabajo se realizó como parte de una primera etapa en la evaluación de
las MVs de Mannheimia haemolytica A2 en campo, la cual se denominó: Evaluación de la Inmunidad Humoral
y Sistémica que inducen las MVs de Mannheimia haemolytica A2, determinando IgG sistémica e IgA a nivel
local, ambas inmunoglobulinas se obtuvieron mediante la colección de suero y moco a partir de corderos
inmunizados por vía intranasal con las MVs de M. haemolytica A2. El alumno contribuyó a la obtención de MVs
de la bacteria, apoyando a las alumnas de maestría para su colección.
Nombre
GERARDO ALBERTO RAMIREZ RICO
Género
M
Lugar de nacimiento Distrito Federal
CURP
RARG880704HDFMCR00 RFC RARG880704
Correo electrónico
[email protected]
Número de cuenta
304127687
Nivel máximo de
estudios
Licenciatura-Realización de tesis
Título de la tesis
DETERMINACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE PROTEASAS DE SECRECIÓN ACARREADAS EN MICROVESÍCULAS
(MVs) DE Mannheimia haemolytica A2
Entidad académica de inscripción del alumno
Facultad de Estudios Superiores "Cuautitlán"
Semestre
CULMINADOS
Promedio
8.04
Porcentaje de avance de estudios 100.0 %
Solicita beca No
Actividades que realizará en el proyecto
El alumno desarrolló su tema de tesis de licenciatura: "DETERMINACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE PROTEASAS
DE SECRECIÓN ACARREADAS EN MICROVESÍCULAS (MVs) DE Mannheimia haemolytica A2 a partir de
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muestras de MVs obtenidas paralelamente al inicio del proyecto. Este trabajo sale un poco del contexto
del desarrollo del proyecto. Sin embargo, surgió la inquietud de determinar proteasas de secreción en MVs
de la bacteria, dados los múltiples reportes que hay al respecto en otros géneros bacterianos de afección
principalmente en humanos. El alumno, colaboró con las alumnas de maestría para la producción y obtención
de microvesículas bacterianas.
Nombre
MARCO ANTONIO VALENCIA ROSALES
Género
M
Lugar de nacimiento Estado de México
CURP
VARM900525HMCLSR03 RFC VARM900525
Correo electrónico
[email protected]
Número de cuenta
306274691
Nivel máximo de
estudios
Licenciatura-Estudios terminados
Título de la tesis
ESTANDARIZACIÓN DE UNA TÉCNICA DE LAVADO TRAQUEOBRONQUIAL EN OVINOS PARA LA OBTENCIÓN Y
CULTIVO CELULAR DE MACRÓFAGOS ALVEOLARES
Entidad académica de inscripción del alumno
Facultad de Estudios Superiores "Cuautitlán"
Semestre
Culminados
Promedio
8.51
Porcentaje de avance de estudios 100.0 %
Solicita beca Sí
Tipo de beca Licenciatura / Titulación
Duración de beca 4 mes(es)
Actividades que realizará en el proyecto
El alumno apoyará al cuidado y alimentación parcial de los ovinos mantenidos en unidades de
experimentación dentro de instalaciones de la FES. Cuautitlán, así como también apoyará a la alumna de
maestría Christian Ávalos Gómez en la estandarización de la técnica de obtención de macrófagos alveolares
para su cultivo celular, de la cual se derivará su tesis de licenciatura
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PAPIIT
TA200113
PARTICIPACIÓN EN ACTIVIDADES ACADÉMICAS (actividades académicas programadas)
Tipo Congreso
Nombre
SEMINARIO INTERNACIONAL DE PRODUCCIÓN DE OVINOS EN EL TRÓPICO Y CONGRESO NACIONAL DE
TÉCNICOS EN OVINOCULTURA
Lugar donde se realizará
Pachuca, Hidálgo.
Difusión Nacional
Participantes en la actividad
Nombre
CYNTHIA GONZALEZ RUIZ
Tipo de participante
Académico UNAM responsable
Participa
como
Ponente
Tipo Congreso
Nombre
ISEV-International Society for extracellular vesicle
Lugar donde se realizará
Rotterdam, The Netherlands
Difusión Internacional
Participantes en la actividad
Nombre
CYNTHIA GONZALEZ RUIZ
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Tipo de participante
Académico UNAM responsable
Participa
como
Ponente
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PAPIIT
TA200113
ORGANIZACIÓN DE ACTIVIDADES ACADÉMICAS (actividades académicas programadas)
Tipo Seminario
Nombre
"Microvesículas Bacterianas" Avances y perspectivas.
Lugar donde se realizará
Facultad de Estudios Superiores Cuautilán
Difusión Nacional
Institución(es) que participa(n)
CINVESTAV, INIFAP, FMVA
Participantes en la actividad
Nombre
Tipo de participante
Participa
como
CHRISTIAN AVALOS GOMEZ
Alumno UNAM
Organizador
CYNTHIA GONZALEZ RUIZ
Académico UNAM responsable
Ponente
DANIEL RODRIGUEZ OLMOS
Alumno UNAM
Organizador
ELIA RIQUELME ZUBIRIA
Alumno UNAM
Ponente
JORGE ALFREDO CUELLAR ORDAZ
Académico UNAM
Ponente
JUAN CARLOS DEL RIO GARCIA
Académico UNAM corresponsable
Organizador
LUCIA ANGELICA GARCIA CAMACHO
Académico UNAM
Ponente
MARCO ANTONIO VALENCIA ROSALES
Alumno UNAM
Organizador
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PAPIIT
TA200113
REQUERIMIENTOS FINANCIEROS PARA EL SIGUIENTE PERIÓDO
Catálogo de partidas para el PAPIIT
211.Viáticos para el personal
$ 39,650
212.Pasajes aéreos
$ 26,000
223.Encuadernaciones e impresiones
$ 8,000
243.Otros servicios comerciales
$ 8,500
248.Cuotas de inscripción
$ 5,400
411.Artículos, materiales y útiles diversos
$ 77,092
512.Equipo e instrumental
$ 20,363
731.Becas para alumnos de licenciatura y posgrado en proyectos de investigación
$ 14,960
TOTAL
$ 199,965
Firma del responsable
CYNTHIA GONZALEZ RUIZ
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PAPIIT
TA200113
DESCRIPCIÓN Y JUSTIFICACIÓN FINANCIERA SIGUIENTE PERIÓDO
Catálogo de partidas para el PAPIIT
211. Viáticos para el personal
Descripción
Congreso Internacional de producción de ovinos en el trópico y Congreso
Nacional de técnicos en Ovinocultura
$ 4,650
ISEV International Society for extracellular vesicles
$ 35,000
TOTAL
$ 39,650
Justificación
Se asistirá a los principales Foros de divulgación científica tanto nacionales como internacionales, con la
finalidad de dar a conocer los principales resultados y avances en la linea de trabajo, que actualmente se
desarrolla. En dichos foros, hay la posibilidad de que surjan contactos de colaboración multidisciplinaria así
como de retroalimentación de los conocimientos adquiridos hasta el momento, principalmente para los
alumnos involucrados en este proyecto.
212. Pasajes aéreos
Descripción
Congreso Internacional de producción de ovinos en el trópico y Congreso
Nacional de técnicos en Ovinocultura
$ 2,000
ISEV International Society for extracellular vesicles
$ 24,000
TOTAL
$ 26,000
Justificación
Se deberá considerar el gasto de pasajes aéreos para la asistencia de los congresos nacionales e
internacionales a los cuales se pretende asistir.
223. Encuadernaciones e impresiones
Descripción
Memorias, carteles y programas
$ 8,000
TOTAL
$ 8,000
Justificación
Se realizará un "Seminario de Microvesículas bacterianas": Avances y Perspectivas del cual se derivará la
elaboración de memorias, carteles y tripticos para la difusión del evento
243. Otros servicios comerciales
Descripción
Publicación en revistas indexadas
$ 8,500
TOTAL
$ 8,500
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PAPIIT
TA200113
Justificación
Se publicarán dos artículos en revistas internacionales para la divulgación científica de los resultados
obtenidos a partir de los trabajos desarrollados tanto de los tesistas de maestría como de licenciatura.
248. Cuotas de inscripción
Descripción
Congreso de Reunión Anual de Investigación Pecuaria
$ 1,200
Congreso Internacional de producción de ovinos en el trópico y Congreso
Nacional de técnicos en Ovinocultura
$ 1,200
ISEV International Society for extracellular vesicles
$ 3,000
TOTAL
$ 5,400
Justificación
Se requiere del pago de inscripción para acudir como ponenete a los congresos nacionales e Internacionales
411. Artículos, materiales y útiles diversos
Descripción
QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit (200). For 200 x 50 μl reactions: 3 x 1.7 ml
2x QuantiTect SYBR Green RT-PCR Master Mix, 100 μl QuantiTect RT Mix, 2 x 2
ml RNase-Free Water. Qiagen
$ 17,979
431229. Corning™ Syringe Filters. Acrylic housing; PES; 0.2μm pore; Dia.:
28mm. Case of 50. Fisher
$ 1,783
4110. Corning™ DeckWorks™ Bulk Pipet Tips. Vol. Range: 0.1 to 10μL;
Natural. Case of 10000. Fisher
$ 4,802
RNase I (Cloned) 100 U/μl (Invitrogen™), 25000 units. Life Technologies
$ 5,108
RNase A (20 mg/mL) (Invitrogen™), 10 ml. Life Technologies
$ 2,966
RNase T1 (Cloned) 1000 U/μl (Invitrogen™), 100 μl. Life Technologies
$ 2,409
RNaseOUT™ Recombinant Ribonuclease Inhibitor (Invitrogen™), 5,000 units.
Life Technologies
$ 3,485
ANTI-RNase (15-30 U/μl) (Ambion®), 2500 units. Life Technologies
$ 2,561
DNase I, Amplification Grade (Invitrogen™), 100 units. Life Technologies
$ 2,954
IL-6 (Polyclonal Antibody), Serum, 0.1 ml E, WB. AbD Srotec
$ 6,571
TNF ALPHA (Monoclonal Antibody), Purified, 0.5 mg E, F *. AbD Serotec
$ 8,778
IL-1 BETA (Polyclonal Antibody, Serum. 0.1 ml, E, WB. AbD Serotec
$ 6,571
IL-10 (Monoclonal Antibody), Biotin, 0.25 mg E, F. AbD Serotec
$ 8,778
Sodium pyruvate, 25G. Sigma
$ 2,347
TOTAL
$ 77,092
Justificación
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PAPIIT
TA200113
Se requerirán de una serie de reactivos, que permitirán el desarrollo de la segunda parte del proyecto la
cual comprende la determinación de receptores tipo Toll-4, mediante RT-PCR, así como se determinara la
presencia de de Interleucinas en el sobrenadante de cultivo de macrofago alveolares.
512. Equipo e instrumental
Descripción
Microscopio CxL binocular educacional de 45° con pieza de visor rotatorio y
ajuste interpupilar
$ 6,664
Incubadora L-200, capacidad 20 L, ambiente 70°, doble puerta 110 volts
$ 13,699
TOTAL
$ 20,363
Justificación
Se describe equipo que se requiere en el laboratorio para un mejor desarrollo de la investigación en esta
segunda parte del proyecto experimental.
731. Becas para alumnos de licenciatura y posgrado en proyectos de investigación
Descripción
Beca de Licenciatura (por 4 mese)
$ 7,480
Beca de Licenciatura ( por 4 mese)
$ 7,480
TOTAL
$ 14,960
Justificación
Se asignará dos beca a alumnos que han culminado sus estudios de licenciatura para elaboración de tesis,
por un periodo de 6 mese. Con las tesis tituladas: ESTANDARIZACIÓN DE UNA TÉCNICA DE OBTENCIÓN
DE MONOCITOS SANGUINEOS DE OVINO PARA SU DIFERENCIACIÓN A CÉLULAS DENDRÍTICAS...por
el alumno Daniel Rodríguez Olmos y la tesis titulada ESTANDARIZACIÓN DE UNA TÉCNICA DE LAVADO
TRAQUEOBRONQUIAL EN OVINOS PARA LA OBTENCIÓN Y CULTIVO CELULAR DE MACRÓFAGOS
ALVEOLARES., por el alumno Marco Antonio Valencia Rosales
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LISTA DE ARCHIVOS ADJUNTOS
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[participacion]Resumen AMTEO 2013.pdf
[formacion]Carta terminacion de tesis Erick A Ruiz Arce.pdf
[formacion]Votos Aprobatorios Gerardo Ramirez Rico.pdf
[participacion]Constancia Ponente Reunion Anual Veracruz (2).pdf
[participacion]Resumen para reunion de investigacion-junio 2013.pdf
[ejercido]PRESUPUESTO PAPIIT 1.pdf
[participacion]PROGRAMA - AMTEO (1).pdf
[formacion]Registro Protocolo Tesis Licenciatura Marco Valencia.pdf
[formacion]TESIS FINAL Erick A. Ruiz Arce 2013.pdf
[formacion]Avances Maestria Christian Avalos Gomez.pdf
[cotizacion]Incubadora.pdf
[formacion]Registro Protocolo Tesis Licenciatura Daniel Rodriguez.pdf
[participacion]Resumen Congreso AMTEO 2013.pdf
[participacion]CARTA ACEPTACION RESUMENES Congreso AMTEO.pdf
[participacion]ConstanciaRN2013_.pdf
[ejercido]PRESUPUESTO PAPIIT 2.pdf
[ejercido]PRESUPUESTO PAPIIT 5.pdf
[ejercido]PRESUPUESTO PAPIIT 3.pdf
[ejercido]PRESUPUESTO PAPIIT 4.pdf
[formacion]Avances Maestria Elia Riquelme.pdf
[memoria]Carta de aceptacion al congreso de Reunion Anual.pdf
[ejercido]REPORTE FINANCIERO FINAL.pdf
[cotizacion]Cotizacion-Centrifuga y Microscopio.pdf
[formacion]Tesis de licenciatura Gerardo VI.pdf
[cotizacion]1268-13 (1) Cipquim 2014 (3).pdf
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