Download 9-Enfoque parasitologico – Dra. Florencia Mongi

ENFOQUE PARASITOLÓGICO
DE LA DIARREAS INFECCIOSAS
Hospital Nacional de Clínicas
Departamento de Parasitología
Rodolfo CaseroCasero-Florencia Mongi
[email protected]
Síndrome diarreico (OMS)
“Alteración en el contenido de agua, volumen o frecuencia de las
deposiciones, disminución de la consistencia (blanda o líquida) y un
aumento de la frecuencia ( ≥ 3 deposiciones /día) > 200grs /día”
/día”
Diarrea osmótica
( malabsorción, elimin. solutos y macromoléculas)
Diarrea secretora
( pédida de H2O y electrolitos)
Diarrea con sangre
evacuaciones pastosas o líquidas
sangre visible.
PARÁSITOS
Diarrea invasora
Enteritis con invasión mucosa intestinal,
inflamación y daño tisular; presencia de PMN
Síndrome disentérico
cólicos, pujo, tenesmo y fiebre, estado toxiinfeccioso.
evacuaciones numerosas, de escasa cantidad,
moco y sangre con poca materia fecal,
Abordaje de las diarreas infecciosas
Diarreas Persistentes
Autolimitadas
Búsqueda de patógenos
Identificación del patógeno
¿hallazgo es significativo ?
…si se investigan 20 microorganismos (virus, bacterias, parásitos)…
…tasa de identificación 5050-70% (Laboratorios especializados)
Generalmente alcanza el 55-10% (laboratorios no especializados)
Tratamiento ?
DOSIS INFECCIOSAS DE PATÓGENOS ENTÉRICOS
Shigella spp
101 -2
Campylobacter jejuni 102 -6
Salmonella spp
105
Escherichia coli
108
Vibrio cholerae
108
Giardia lamblia
101 -2 quistes
Entamoeba histolytica 101 -2 quistes
Cryptosporidium spp
102 ooquistes
PARÁSITO
SISTEMA INMUNE
HUÉSPED
placa de
Peyer
DE MUCOSAS
Protege las membranas mucosas de
microorganismos
Controla la entrada de antígenos no degradados
(alimentos y microorganismos)
Evita una respuesta inmune potencialmente
peligrosa .
Secrecion de mucus
Secrecion de IgA
Reclutamiento de neutrófilos/ eosinófilos
Fagocitocis
Degradacion de cutículas de larvas
COMO SOBREVIVEN DENTRO DEL HUESPED ???
GRACIAS A SUS MECANISMOS DE EVASION DE LA RESPUESTA INMUNE
1)Internalización celular
Cystoisospora
2)Membranas parasitóforas
Cryptosporidium sp
Microsporidia
3) Transformación en quistes (Protozoos intestinales)
intestinales)
5) Mec
Mec.. no identificados
( Dientamoeba
Dientamoeba,, Blastocystis)
4)Variación antigénica (Giardia duodenalis )
6) Secreción de proteasas
(Entamoeba histolytica)
7) Act
Act.. Policlonal (helmintos)
8) Mimetizar y/o recubrirse con Ags del hu
(Schistosoma
Schistosoma)) ……….
9)……
Epidemiologia de las diarrreas parasitarias
Animales
( domésticos y silvestres )
Aguas
contaminadas
Alimentos
Humano
Humano
Contaminación directa
fecal-oral
Interrogar minuciosamente al
paciente!!!!!!
Situaciones en que se debe investigar enteroparásitos ante EDA
ᴑ Disentería ,diarrea debilitante, síntomas sistémicos
ᴑ Paciente relata eventuales epiodios diarreicos alternados de:
desórdenes en sus hábitos defecatorios
cantidad de moco inusual
cólicos, distensión abdominal, meteorismo, dispepsias
ᴑDiarrea crónica o recidivantes (diferenciar infecciosas /no infecciosas)
tumores ,colon irritable, celiaquía, SMA, diarrea medicamentosa
ᴑ Brotes epidémicos /diarreas del viajero
ᴑInmunocomprometidos
Diarrea pastosa o líquida
Macroscópico
Incremento en la cantidad de moco
ASPECTO de la diarrea
Presencia variable de PMN (gralmente ), eosínófilos y/o cristales
Charcot-Leyden
Microscópico
Formas tróficas, ooquistes y larvas >> quistes y huevos
Tipos deSecretoras
infección entérica
Invasivas
Osmóticas
Invasivas
Invasivas
Adherenciales
Enterotóxicas
Inflamatorias
Penetrantes
No inflamatorio
No inflamatorio
Invasión y
destrucción del
enterocito
Invasión de la
mucosa
Localización
Intestino
delgado y
grueso
Intestino
delgado
proximal
Intestino
grueso
Colon
Intestino
delgado
distal
Enfermedad
Diarrea acuosa
Diarrea acuosa
Disentería
diseminacion
sistémica
no
no
Si
sangre
Si
Mecanismo
PMN
Diarrea del
viajero
Contaminacion
accidental
Cryptosporidium
C.belli
G. lamblia
D. fragilis
C. Cayetanensis
VIH
Transplante
Strongyloides
stercoralis
Microsporidios
Balantidium coli
S stercoralis
T. spiralis
E. histolytica
Paso
Agua Negra,
San Juan,
Argentina.
Muchas
Gracias
DIAGNOSTICO DE DIARREAS
INFECCIONES PARASITARIAS EN EPISODIOS
DIARREICOS
Bioq. Florencia Mongi- 2015
[email protected]
Laboratorio de Parasitología- HNC
¿Cuando sospechar de infecciones parasitarias en episodios diarreicos?
Pte sintomático + clínica + epidemiología: DIAGNOSTICO PRESUNTIVO
Laboratorio + muestra adecuada + método apropiado:
DIAGNOSTICO CERTERO
Etapas del diagnóstico
Etapa pre-analítica
• Datos del paciente
• Indicaciones: Recolectar
materia fecal en recipiente
limpio y seco, NO del
inodoro, NO contaminar con
orina
• Muestra rotulada
Etapa analítica
Etapa post-analítica
• Identificación de trofozoítos,
• Validación e informe de los
quistes, larvas, huevos y
resultados
adultos
• Observaciones y
• Análisis macro y microscópico,
sugerencias
método de concentración y
cultivo
Toma de muestra
Numero de muestras y frecuencia de recolección
-Muestra fresca: 1 muestra remitida antes de las 2 horas de recolección
CONCENTRAR!!!!
IDEAL: 1 muestra fresca/ día
Mínimo 4 muestras
-Muestra conservada: 4 muestras, 1/día, días consecutivos en líquido conservante
Solución conservante
preparada
Kit comercial
Ventaja
 Mayor volumen de muestra a analizar
Relación conservante: muestra
3:1
Por qué muestra conservada?
 Comodidad para el paciente
 Comodidad para el analista
Conservantes
Ventajas
Desventajas
• Preserva morfología de trofozoítos,
quistes, huevos y larvas
•Interfiere en la extracción de ADN:
técnicas de biología molecular (PCR)
• Apropiado para algunos métodos de
concentración
•No permite el cultivo ni desarrollo
de estadios in vitro





SAF (acetato de sodio-ácido acético- formaldheído)
Solución salina o acuosa formolada (5 o 10 %)
PVA (alcohol polivinílico)- Schaudinn
Solución de dicromato de potasio (2,5%)
Merthiolate-yodo-formaldehído (MIF)
Procesamiento de la muestra
Método directo
Macroscópico
Microscópico
Métodos de concentración
Flotación
Faust
Willis
Sheather
Sedimentación
Espontánea
Centrifugación
Ritchie
 Coloraciones húmedas
Cultivo de larvas
 Coloraciones permanentes
Baermann
Coloraciones: Húmedas
* Lugol
* Tionina
* Azul de metileno
Solución fisiológica (SF)
MUESTRA FRESCA!!
movilidad
Coloraciones: Permanentes
Coccidios
Protozoos
Microsporidios
Kinyoun
+++
-
-
Ziehl-Neelsen (ZN)
+
-
-
Safranina
+
-
-
Tricrómica de Wheatley
(TCR)
+/-
+++
+
Hematoxilina Férrica (HF)
-
+++
-
Weber
-
+/-
+++
Gram Cromotropo (GC)
-
+/-
+++
Coloraciones: Permanentes
Coccidios
Protozoos
Microsporidios
Kinyoun
+++
-
-
Ziehl-Neelsen (ZN)
+
-
-
Safranina
+
-
-
Tricrómica de Wheatley
(TCR)
+/-
+++
+
Hematoxilina Férrica (HF)
-
+++
-
Weber
-
+/-
+++
Gram Cromotropo (GC)
-
+/-
+++
Si no se cuenta con alguna de estas coloraciones y/o persisten dudas en el resultado
DERIVAR A CENTROS DE REFERENCIA
Métodos de concentración
Centrifugación
Centrifugación- Flotación
Flotación
Sedimentación espontánea
(SE)
Cultivo de larvas:
Baermann
Métodos de concentración
Método de Telemann modificado/ Ritchie/ FAE
 Objetivo: Recuperar quistes, huevos
y larvas
 Coloraciones:
* Húmedas: Lugol
* Permanentes: TCR, Kinyoun,
Safranina, GC
Solventes
SAF
Sedimento
Métodos de concentración
 Objetivo: Recuperar trofozoítos, quistes y huevos
 Coloraciones:
*Húmedas: Lugol
*Permanentes: TCR, Kinyoun, Safranina, GC
Método sencillo
Buena sensibilidad y especificidad
EVALUACIÓN DE UNA TÉCNICA DE SEDIMENTACIÓN ESPONTÁNEA Y DEL EXÁMEN
DIRECTO COMO MÉTODOS PARASITOLÓGICOS APLICABLES EN LABORATORIOS NO
ESPECIALIZADOS
Laconte L, Mongi F, Casero R.
Departamento de Parasitología. Hospital Nacional de Clínicas, UNC
Conclusiones:
 La técnica de sedimentación espontánea (SE) demostró valores aceptables de Sensibilidad y
Especificidad como método de identificación tanto para helmintos como protozoos.
 Nuestros resultados indican que la técnica de SE es un método válido, sencillo y económico para
concentración e identificación de parásitos si no se contara con otras técnicas para diagnóstico
parasitológico
Otros métodos de concentración
Sheather (sacarosa)
Willis/Faust (Na Cl/ ZnSO4)
 Objetivo: concentración de ooquistes de coccidios
concentración de huevos de bajo peso específico/ no operculados
 Observación: En fresco
Otros métodos de concentración
 Objetivo: recuperación de larvas
rhabditiformes
de Strongyloides sp
Cultivo de larvas
Cultivo y aislamiento de larvas:
Método Harada- Mori
 Objetivo: transformación
de larvas
Rabhditoides
Filariformes (F1)
(Strongyloides stercoralis)
Cultivo en Placa de agar (CPA)
 Objetivo: evidenciar larvas viables de S stercoralis y Uncinarias
Recomendaciones
Métodos sencillos y de bajo costo
 Técnica de FAE (Formol-acetato de etilo)
 Sedimentación espontánea
 Técnica de Willis
 Técnica de Sheather
Métodos específicos
 Cultivo de Baermann
 Harada Mori
 Cultivo en Placa de Agar
DERIVAR
Muestra fresca!!!
Fresco con Lugol
Coloración Tricromica de Wheatley
Blastocystis sp
Fresco con Lugol
Fresco con Lugol
Fresco con Tionina
Entamoeba histolytica/ dispar/
moshkovskii/ dysenteriae
Coloración Tricromica de Wheatley
Entamoeba histolytica/ dispar/
moshkovskii/ dysenteriae
Fresco con SF
Fresco con Lugol
Fresco con AM
Dientamoeba fragilis
Col Tricromica de Wheatley
Fresco con Lugol
Giardia lamblia
Fresco con Lugol
Fresco con SF
ARTEFACTO
Balantidium coli
Coloración Kinyoun
Fresco con SF
Cryptosporidium
parvum
Fresco sin Lugol
Fresco con Lugol
Cystoisospora
belli
Coloración Kinyoun
Coloración: Kinyoun
Cyclospora cayetanensis
Coloración Gram Cromotropo
Microporidios
Fresco con SF
Fresco con SF
Fresco con Lugol
Strongyloides stercoralis