Download LíNEA 7 ACTIVACIÓN Y REGULACiÓN DE LA RESPUESTA INMUNE

INSTITUTO
DE
ACTIVACIÓN
7.1
Papel del correceptor
C043
LíNEA 7
Y REGULACiÓN DE LA RESPUESTA INMUNE
en la regulación
punto de vista de 105 mecanismos
activación
7.2
BIOTECNOlOGíA
de las funciones
de adhesión
de linfocitos
como de transmisión
T tanto desde el
de señales de
celLJlar
Estudio de las vías de transmisión
estructurales
de la molécula
C043
de señal a través de C043.
necesarios
En linfocitos T, la especificidad
antigénica está
determinada
por el receptor para el antígeno
(TcR). La transmisión
y amplificación
de las señales de activación intracelulares generadas por
la interacción específica del TcR con su complejo
[MHC-Agl está a cargo del llamado complejo C03.
Además del complejo TcR-C03, las células T presentan en su superficie
una serie de moléculas llamadas moléculas accesorias o correceptoras
involucradas
en regular las fases de reconocimiento, activación y efectos de los linfocitos 1.
La función de dichas moléculas puede ser la de
estabilizar la interacción
física entre célula T y
APC (adhesión) y/o la de participar en los fenómenos de activación y transimisión
de señal hacia el interior de la célula efectora. Entre éstas
se encuentran
C02, C04, C08, CD 11a/ CD 18,
C045, VLA-4, VLA6 y C043.
La molécula C043, también conocida como
gpL 115, sialoforina o leucosialina, se expresa en
la superficie de todas las células hematopoyéticas, excepto en eritrocitos. Si bien la estructura
de esta molécula se conoce relativamente
bien,
poco se sabe acerca 'de sus funciones
en la
superficie de las células linfoides. Sin ser la causa primaria del padecimiento (el gene de C043 se
encuentra en el cromosoma
16). se ha descrito
que los linfocitos T de los pacientes afectados
con la inmunodeficiencia
de Wiskott-Aldrich
(asociada al cromosoma X) carecen de C043 en
Análisis
para la transmisión
de 105 requerimientos
de señales de activación
su superficie
celular, o bien expresan formas
anómalas de la molécula. La capacidad de respuesta de las células T y B de estos individuos
está severamente
comprometida,
por lo cual,
además de una grave trombocitopenia,
estos
pacientes
presentan
numerosas
infecciones
recurrentes.
PROGRAMA
7.1
Papel del correceptor C043 en la regulación
de las funciones de linfocitos T tanto desde
el punto de vista de 105 mecanismos de adhesión
como de transmisión de señales de activación
celular
7.1.a Papel del correceptor
C043
ción de las interacciones celulares
en la regula-
Debido a su larga estructura cilíndrica (45 nm).
es probable que C043 ejerza un papel importante
en la regulación de las interacciones adhesivas de
los linfocitos con otras células. Hemos demostrado que C043 puede interaccionar de una manera
específica con C054 (lCAM-l), aunque queda por
determinar si esta interacción regula la adhesión
de linfocitos T con otras células, o bien si C043
tiene, como es el caso de C054, más de un contrarreceptor. Por medio de un análisis de estructura/función
se delinearán
los requerimientos
INFORME
ANUAL
estructurales necesarios para que C043 funcione
como molécula de adhesión. Para ello se están
generando mutaciones a partir del cONA de
C043 en la región extracelular de la molécula.
Cada mutante se expresará posteriormente en
un hibridoma T murino, antígeno-específico, y
su capacidad de regular fenómenos de adhesión
celular con C054 u otros ligandos será evaluada.
- Papel de C043 en la regulación de los fenómenos de adhesión intracelular: identificación de
nuevos ligandos; definición de dominios de la
región extracelular involucrados en dicha función.
y
1994
este síndrome. No encontramos diferencia
entre la capacidad de transmitir señal a través
de C043 en las células de los pacientes de Wiskott-Aldrich, comparada con las células de individuos normales. Por lo que se puede concluir que la molécula C043 expresada por
estos individuos es funcional, y que su inmunodeficiencia se debe a otra alteración molecular.
-C043, un correceptor de linfocitos T
G. PEDRAZA, G. HOLLANDER, S. BURAKOFF E Y ROSENSTEIN
1 993/P/S/DGFM
ROSENSTEIN y G. PEDRAZA
I 994/P/S/DG FM
Oebido a que no existe un ligando activador de
C043, y aunque hemos demostrado que C054
(lCAM-l) es un ligando para C043, hemos buscado otras alternativas para estudiar con mayor
detalle las funciones correceptoras de C043.
Para ello hemos reemplazado al ligando activador por anticuerpos monoclonales (mAbs) dirigidos en contra de la molécula C043 y/o el TcR, y
hemos entrecruzado estos reactivos en la superficie de Iinfocitos T. Esta metodología nos permitió llegar a las siguientes conclusiones:
PROGRAMA 7.2
Estudio de las vías de transmisión de señal a
través de (043. Análisis de los requerimientos
estructurales de la molécula (043 necesarios
para la transmisión de señales de activación
Simular la interacción de una molécula de superficie con su ligando reemplazando al ligando por
un anticuerpo específico para la molécula de
superficie, ha resultado ser una buena estrategia
para estudiar los mecanismos de transmisión de
señal de diferentes moléculas.
7.2.a Regulación de la fosforilación de proteínas
intracelulares a través de la activación mediada
por (043
a) C043 es una molécula correceptora; es decir,
que para transmitir señales de activación
requiere de las señales transmitidas por el TcR.
b) Para que C043 desempeñe sus funciones de
molécula correceptora requiere de la integridad de su región intracitoplásmica
y ha de
encontrarse en el mismo complejo macromolecular que el TcR.
e) Porque se ha reportado que la expresión de
C043 es anormal en pacientes con el síndrome de inmunodeficiencia de Wiskott-Aldrich,
estudiamos las funciones correceptoras de
C043 en linfocitos aislados de pacientes con
Los experimentos iniciales se han enfocado a
evaluar la actividad de tirosina kinasa analizando los substratos cuyos residuos de tirosina
sean fosforilados a consecuencia de los procesos de activación medidos por C043.
Las células C043+ son estimuladas simulando
la interacción de C043 y del complejo TcR-C03
con sus respectivos ligandos por entrecruzamiento de C043 y/o el TcR mediante anticuerpos
monoclonales.
Los resultados preliminares
sugieren que la estimulación de los linfocitos T
a través de la molécula C043 modifica los patro-
INSTITUTO
DE
BIOTECNOLOGíA
nes de bandas fosforiladas,
comparando
con
células control, sin estimular
o estimuladas
a
través del TcR. Se proseguirá
a identificar
los
substratos que contengan residuos de fosfotorosina después de la activación vía CD43.
-Identificación
de las vías de transmisión
señales de activación a través de CD43
v.
de
de la porción intracitoplásmica
de esta molécula. Se dispone de un sistema experimental
que
permite estudiar la activación de linfocitos T de
una manera CD43-dependiente
y CD43-específica. Las diferentes mutantes que se generen en la
molécula serán analizadas en este modelo experimental tanto en lo que se refiere a la capacidad
de mediar adhesión con CD54 u otros posibles
ligandos, como a la capacidad de transmitir señales de activación.
ICRAS, G. PEDRAZA E Y ROSENSTEIN
I 994/I/S/DGFM/DFCI
7.2.b Identificación
de dominios reguladores
de diferentes funciones en la región
intracitoplásmica
de CD43
-Regulación
de la afinidad de CD43 por su(s)
Iigando( s): anál isis estructura-función
y
ROSENSTEIN y G. PEDRAZA
I 994/I/DG FM
Con el objeto de definir regiones involucradas
en regular las diferentes funciones de CD43 (activación celular, adhesión y cambios en la afinidad
de la adhesión) se hará un análisis mutacional
-Análisis mutacional de la región intracitoplásmica de CD43 estudio de las vías de señalización
G. PEDRAZA, S. BURAKOFF E Y ROSENSTEIN
I 994/S/DGFM/DFCI