Download Prueba de Antiglobulina Indirecta

Procedimiento 1
Prueba de Antiglobulina Indirecta

Principio
La técnica de inmunoglobulina indirecta fue descrita por primera vez en 1945
por Coombs y colaboradores y permite observar aglutinaciones de anticuerpos que
normalmente no serían evidenciables en condiciones estándar de laboratorio. Esta
técnica de antiglobulina indirecta es muchas veces necesaria en el fenotipaje de
grupos sanguíneos en los que los antígenos se encuentran en baja densidad
antigénica, ya que se propicia la adsorción de los anticuerpos gracias a la fase de
incubación. Igualmente es aplicable en aquellos casos en los que se buscan
anticuerpos en el suero de una persona, ya que estos pueden estar en bajo título y no
ser detectados tras incubaciones cortas.
En esta prueba se utiliza el suero de Coombs, o reactivo de inmunoglobulina
humana, el cual consiste, en su forma más simple, en una inmunoglobulina dirigida
contra la porción Fc (cadenas pesadas) de los anticuerpos de tipo IgG. Existen
igualmente reactivos que están conformados no solamente por inmunoglobulinas antiIgG sino también por inmunoglobulinas dirigidas contra la molécula C3 del
complemento, lo que permite reconocer la presencia de anticuerpos fijadores de
complemento. Se han desarrollado asimismo reactivos dirigidos contra fracciones
específicas de complemento, como C3b, C3d, C4b y C4d.
La prueba de Antiglobulina Indirecta cuenta con varias fases, siendo la primera
una fase de centrifugación, en la cual se detectan anticuerpos de tipo IgM como los del
sistema ABO, auto-anti-I, anti-M, anti-N, anti-Lewis, etc. Luego de esta fase se
permite, por un tiempo prolongado y a una temperatura de 37ºC la reacción entre
antígenos y anticuerpos (de estar estos presentes). Dependiendo de las normativas
establecidas por el Banco de Sangre, es posible que se utilicen otros medios
potenciadores de la aglutinación, como albúmina, LISS, polietilenglicol o enzimas. En
caso de que alguno de estos reactivos sea utilizado, es necesario apegarse a las
instrucciones aportadas por el fabricante. Se espera que, de haber reconocimiento, al
finalizar esta fase haya una sensibilización de los glóbulos rojos.
Una vez terminada esta incubación, se pasa a realizar lavados con el fin de
remover inmunoglobulinas u otro tipo de proteínas que puedan interferir con la
reacción. La fase de los lavados es crítica, ya que la presencia de anti-anticuerpos u
otros interferentes en el suero podrían llevar a la neutralización del reactivo. Asimismo,
es sumamente importante eliminar el exceso de solución salina al finalizar estos
lavados, ya que de lo contrario, el reactivo de antiglobulina es diluido, lo cual puede
afectar la sensibilidad de la prueba. Posterior a los lavados se añade el reactivo de
antiglobulina, se centrifuga y se lee la prueba. De haberse dado sensibilización, los
anticuerpos adheridos a la superficie eritrocitaria serán reconocidos por el reactivo de
Coombs y se podrá observar una reacción de aglutinación.
Muestras y reactivos
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Solución salina
Muestras de sangre total anticoagulada con EDTA u obtenida en tubo sin
anticoagulante
Baño maría a 37ºC.
Juego de células rastreadoras 3%.
Reactivo de Antiglobulina Humana (Suero de Coombs)
Albúmina bovina 22%.
Células de control de antiglobulina humana.
Método
1. Rotular tubos para las Células I, Células II y Células III.
2. Mezclar y homogenizar con suavidad el juego de reactivo de células
rastreadoras.
3. Añadir al tubo rotulado como células I, 50 ul del pool I. Debe tenerse
especial cuidado en no intercambiar las tapas de los goteros y en
minimizar la posibilidad de contaminación de los mismos.
4. Añadir al tubo rotulado como células II, 50 ul del pool II.
5. Añadir al tubo rotulado como células III, 50 ul del pool III.
6. Añadir 100 ul del suero en análisis a cada uno de los tubos.
7. A partir de este momento se inician las tres fases de una prueba de
antiglobulina:
i. Fase i, centrifugación inmediata o prueba rápida:
1. Centrifugar los tubos 15 segundos a 3000 rpm.
2. Resuspender con suavidad, leer y anotar resultados.
ii. Fase ii, incubación a 37ºC:
1. Después de la lectura anterior, colocar los tubos a 37ºC
por 30 minutos.
2. Centrifugar los tubos 10 segundos a 3000 rpm. Leer y
anotar resultados.
3. Realizar tres lavados con solución salina fisiológica.
iii. Fase III, antiglobulina:
1. Añadir 100ul del reactivo de antiglobulina humana
poliespecífico (suero de Coombs).
2. Mezclar y centrifugar 10 segundos a 3000 rpm.
3. A las pruebas que dieron negativo, se les realiza el
control con Células Control, agregando 50ul de las
células reactivo de Control de Antiglobulina Humana.
4. Mezclar y centrifugar 10 segundos a 3000 rpm, leer y
anotar resultados.
2.
Procedimiento 2
Prueba de Antiglobulina Directa
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Principio
La prueba de Coombs directo se utiliza primordialmente para determinar si los
eritrocitos del paciente en análisis están recubiertos por inmunoglobulinas o fracciones
de complemento. Esto puede llegar a presentarse en diferentes condiciones, como por
ejemplo, la presencia de alo o autoanticuerpos dirigidos contra antígenos de propios
de la superficie eritrocitaria, de anticuerpos dirigidos contra drogas que se adsorben a
la membrana del glóbulo rojo o por la activación de complemento en esta superficie.
Por estas razones, la prueba de antiglobulina directa son útiles en el estudio de
anemias hemolíticas, ya sean autoinmunes o inducidas por drogas, de la Enfermedad
Hemolítica del Recién Nacido o en reacciones aloinmunes a eritrocitos recientemente
transfundidos.
Normalmente, esta prueba se realiza con el reactivo de Antiglobulina Humana,
que tal como se explicó en el procedimiento anterior, usualmente es poliespecífico e
incluye anticuerpos dirigidos tanto contra las IgG humanas como contra fracciones del
complemento. En caso de obtener una reacción positiva utilizando este reactivo, se
procede a utilizar reactivos monoespecíficos con el fin de identificar la especificidad de
los anticuerpos involucrados en la reacción.
Dado que es posible que exista fijación de complemento in vitro en muestras no
anticoaguladas, se prefiere realizar esta prueba en muestras que hayan sido
anticoaguladas con EDTA. De lo contrario, si se obtiene un resultado positivo debido a
la fracción de complemento, este debe ser corroborado utilizando una nueva muestra.
También se recomienda utilizar eritrocitos lavados para realizar la prueba, ya que
podrán existir proteínas o sustancias inespecíficas que interferirían con la reacción.
Muestras y Reactivos
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Solución salina
Muestras de sangre total anticoagulada con EDTA u obtenida en tubo sin
anticoagulante
Baño maría a 37ºC.
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Reactivo de Antiglobulina Humana (Suero de Coombs)
Albúmina bovina 22%.
Células de control de antiglobulina humana.
Método
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Rotular tres tubos con el número de muestra por analizar.
Tomar una alícuota de la muestra y transferir al tubo correspondiente.
Realizar tres lavados con solución salina fisiológica.
En el segundo tubo hacer una suspensión de trabajo al 3-5% a partir de
la muestra de eritrocitos lavada.
Añadir al tercer tubo 50 ul de la suspensión de trabajo realizada.
Añadir 100 ul del reactivo de antiglobulina humana.
Mezclar y centrifugar por 10 segundos a 3000 rpm
Resuspender levemente, leer por aglutinación y hacer las anotaciones
respectivas.
En caso de obtener un resultado negativo, corroborar el mismo
utilizando las Células Control de Coombs.
Procedimiento 3
Estudio de Anticuerpos Irregulares utilizando Células
Rastreadoras
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Principio
Como se mencionó anteriormente, la prueba de Antiglobulina Indirecta puede
ser utilizada para la detección de la presencia de anticuerpos dirigidos hacia antígenos
de la superficie eritrocitaria, sobre todo, cuando estos se encuentran en bajo título. En
medicina transfusional es de suma importancia la detección de la presencia de estos
anticuerpos ya que si están presentes en el suero de un paciente, por una reacción de
aloinmunización previa, van a condicionar el tipo de eritrocitos que le pueden ser
transfundidos en adelante. Por esta razón, el rastreo de anticuerpos se realiza de
rutina a todos los receptores de hemocomponentes como parte de los estudios
pretransfusionales. Su presencia puede correlacionar con reacciones transfusionales o
hemolíticas graves, así como producir un acortamiento de la sobrevida de las células
transfundidas.
Los anticuerpos irregulares son por lo general del tipo IgG, reactivos a 37ºC y/o
en la prueba de antiglobulina. Son ejemplos de este tipo de anticuerpos los dirigidos
contra los antígenos de los grupos sanguíneos Rh, Kell, Duffy, Kidd y SsU. Se ha
estimado que la incidencia de anticuerpos no-ABO en diferentes poblaciones oscila
entre el 0,78% y el 1,64%. En poblaciones hospitalarias especiales, que por su
condición de fondo reciben transfusiones de hemocomponentes con frecuencia, esta
incidencia puede ser mucho mayor.
Los métodos empleados en la detección de anticuerpos irregulares pueden
incluir 2 a 3 células pantalla o rastreadoras. Estas células deben de contar con la
mayoría de los antígenos de significancia clínica y se trabajan, al igual que las
suspensiones de trabajo eritrocitarias, a una concentración de 3 %. Una cantidad
adecuada de cada una de estas células se incuba con la proporción indicada de suero
del paciente en análisis y se realiza una prueba de antiglobulina indirecta, siguiendo el
medio de reacción que el Banco de Sangre tenga establecido, sea el salino, con
albúmina, con enzimas o con medio de baja fuerza iónica y finalizados con la prueba
de antiglobulina humana de tipo IgG o anti IgG + C3d. De preferencia cuando la
determinación se realiza en tubo se debe utilizar el reactivo poliespecífico (anti
IgG+C3d) debido a que con él se pueden detectar algunos anticuerpos poco
frecuentes demostrados sólo por la actividad del complemento, como ocurre con los
anticuerpos dirigidos contra el sistema de grupo sanguíneo Kidd.
Cuando un anticuerpo irregular es detectado, la especificidad debe de ser
definida mediante la confrontación del suero/plasma del paciente con las células del
panel de identificación de anticuerpos.
Una vez identificada la especificidad del anticuerpo, se debe de buscar un
hemocomponente que no posea dicho antígeno, realizarle la prueba cruzada y solo
una vez obtenido un resultado negativo se procede a transfundir al paciente.
Muestras y reactivos
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Solución salina
Muestras de sangre total anticoagulada con EDTA u obtenida en tubo sin
anticoagulante
Baño maría a 37ºC.
Juego de células rastreadoras 3%.
Reactivo de Antiglobulina Humana (Suero de Coombs)
Albúmina bovina 22%.
Células de control de antiglobulina humana.
Método
1. Rotular tubos para las Células I, Células II y Células III.
2. Mezclar y homogenizar con suavidad el juego de reactivo de células
rastreadoras.
3. Añadir al tubo rotulado como células I, 50 ul del pool I. Debe tenerse
especial cuidado en no intercambiar las tapas de los goteros y en
minimizar la posibilidad de contaminación de los mismos.
4. Añadir al tubo rotulado como células II, 50 ul del pool II.
5. Añadir al tubo rotulado como células III, 50 ul del pool III.
6. Añadir 100 ul del suero en análisis a cada uno de los tubos.
7. A partir de este momento se inician las tres fases de una prueba de
antiglobulina:
i. Fase i, centrifugación inmediata o prueba rápida:
1. Centrifugar los tubos 15 segundos a 3000 rpm.
2. Resuspender con suavidad, leer y anotar resultados.
ii. Fase ii, incubación a 37ºC:
1. Después de la lectura anterior, colocar los tubos a 37ºC
por 30 minutos.
2. Centrifugar los tubos 10 segundos a 3000 rpm. Leer y
anotar resultados.
3. Realizar tres lavados con solución salina fisiológica.
iii. Fase III, antiglobulina:
1. Añadir 100ul del reactivo de antiglobulina humana
poliespecífico (suero de Coombs).
2. Mezclar y centrifugar 10 segundos a 3000 rpm.
3. A las pruebas que dieron negativo, se les realiza el
control con Células Control, agregando 50ul de las
células reactivo de Control de Antiglobulina Humana.
4. Mezclar y centrifugar 10 segundos a 3000 rpm, leer y
anotar resultados.
3.
Procedimiento 4
Pruebas de Compatibilidad Sanguínea
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Principio
La transfusión sanguínea representa en la actualidad una parte importante de
la práctica médica y en algunas patologías, la única terapia existente. Sin embargo, el
éxito de la hemoterapia depende de que se asegure compatibilidad entre el donador y
el receptor de un hemocomponente. Por ejemplo, las primeras transfusiones de sangre
documentadas (que datan del siglo XVII), terminaron en la muerte de los receptores de
la donación. Gracias a los avances y descubrimientos en el área de la
Inmunohematología que fueron realizados a partir del siglo XX, pudo comprenderse
que la existencia de antígenos y grupos sanguíneos o de anticuerpos dirigidos contra
estos, son factores determinantes del éxito y beneficio de una transfusión sanguínea.
Las primeras pruebas de compatibilidad se realizaron tomando en cuenta la
necesidad de que donante y receptor fuesen ABO compatibles. Los pioneros en este
campo mezclaban el suero del paciente con las células rojas del donador y estudiaban
la lisis, la aglutinación o ambas del glóbulo rojo, lo que se conoce como la prueba
cruzada mayor. Actualmente el cruce de sangre para la compatibilidad sanguínea
forma parte de una serie de procedimientos conocidos como pruebas
pretransfusionales, las cuales tienen el propósito de seleccionar los
hemocomponentes con menor probabilidad de causar una reacción adversa en el
receptor y prevenir sobre todo las reacciones por incompatibilidad de grupos.
Para que un hemocomponente pueda ser utilizado en un paciente particular,
las normas internacionales (AABB) indican que debe cumplirse de previo con los
siguientes procedimientos:
-
-
Solicitud del hemocomponente por parte del médico tratante.
Muestra del receptor. La identidad del paciente y de la muestra deben
ser corroboradas, con el fin de evitar cualquier tipo de confusión.
Pruebas al donante: grupo ABO/Rh, determinación del fenotipo Rh y
Kell, detección de anticuerpos irregulares y serología para
enfermedades transmisibles por transfusión sanguínea.
Pruebas al receptor: grupo ABO/Rh, detección de anticuerpos
irregulares.
Prueba cruzada mayor.
Además, es necesario incluir diferentes etapas de verificación que permitan
confirmar que efectivamente se están trabajando las muestras correspondientes al
hemocomponente y al receptor.
Este proceso, como se indicó anteriormente, al ser realizado correctamente y
siguiendo estrictas normas de control de calidad, permite disminuir considerablemente
los riesgos de una reacción postranfusional. Tomando en cuenta los antígenos del
sistema de grupos sanguíneos ABO y Rh (D) la compatibilidad puede alcanzar hasta
un 98%; el resto del porcentaje restante se logra por medio del estudio de anticuerpos
irregulares clínicamente significativos y la prueba de compatibilidad entre el suero del
receptor y los eritrocitos del donador. A pesar de esto, siempre existe la posibilidad de
que existan anticuerpos irregulares en cantidades no detectables antes de la
transfusión, o con especificidades no reconocidas por los paneles de células más
comúnmente utilizados.
PROCESO DE LAS PRUEBAS PRETRANSFUSIONALES
La Solicitud, identificación y colección de la muestra de sangre:
Aproximadamente el 50% de las reacciones por transfusión se deben a
reacciones hemolíticas secundarias a errores de tipo clerical por identificación
equívoca del paciente a transfundir, confusión al momento de extraer la muestra, o en
el laboratorio.
Los procedimientos exactos en la identificación del paciente, la muestra
sanguínea y la unidad a transfundir, tienen que estar perfectamente definidos y
escritos en Manuales de Procedimiento de Banco de Sangre, en forma de rutas
críticas para ser consultados cuando sean requeridos.
Antes de realizar la extracción de sangre, el tubo y la solicitud deben de
coincidir con la identificación del paciente, preguntando directamente cuando sea
factible al paciente o corroborando con brazaletes de identificación; nunca se debe de
guiar por los números de cama ya que los pacientes pueden ser cambiados
dependiendo de la necesidad del servicio.
La solicitud debe tener como datos mínimos:
-­‐
Identificación del paciente, número de cédula de identidad o pasaporte.
-­‐
Nombre completo y edad del receptor.
-­‐
Sexo.
-­‐
En caso de conocerse se debe de indicar valores como por ejemplo
grupo ABO y Rh, hemoglobina y hematocrito, antecedentes transfusionales,
gestaciones, inmunización materno fetal, reacciones adversas que se hubieran
presentando y medicamentos que se están administrando.
-­‐
Diagnóstico de certeza o de probabilidad, así como el motivo de la
indicación transfusional.
-­‐
Número de expediente, cama y nombre del servicio donde será
transfundido.
-­‐
Señalar el producto a solicitar incluyendo cantidad de unidades,
volumen o características requeridas.
-­‐
Fecha y hora en que se realizará la transfusión y, de ser necesario el
señalamiento de la urgencia de la transfusión.
-­‐
Fecha, nombre completo y firma del médico que indica la transfusión.
-­‐
Las solicitudes transfusionales deben ser escritas en forma legible para
evitar al máximo la equivocación.
Después de haber realizado una adecuada identificación del receptor, la
muestra de sangre debe ser obtenida, usando técnicas muy cuidadosas para evitar
hemólisis, ya que la misma produce activación del complemento y algunos anticuerpos
pueden ser enmascarados al requerirse del complemento para visualizar la reacción
antígeno-anticuerpo.
Si no existen problemas serológicos de fondo son suficientes 5 ml de sangre
del receptor para realizar todos los procedimientos inmunohematológicos.
DETERMINACIÓN DEL GRUPO SANGUINEO ABO/ Rh EN EL RECEPTOR
Grupo ABO
En la medida de lo posible los receptores deberán recibir hemocomponentes
sanguíneos ABO idénticos, sin embargo, en ciertas situaciones puede ser necesario
hacer selecciones alternativas.
La determinación del grupo ABO es el paso más importante de las pruebas
serológicas pretransfusionales. Se emplean antisueros hemoclasificadores anti A y
anti B para determinar grupo eritrocítico y glóbulos rojos con antígenos A1 y B para la
prueba inversa.
En receptores menores de 4 meses de edad la prueba inversa no se realiza, ya
que en este tipo de pacientes el desarrollo de los anticuerpos naturales todavía es
inmaduro.
En caso de discrepancias entre grupo directo e inverso se emplearán técnicas
adicionales antes de establecer el tipo sanguíneo.
Cuando se está en presencia de una urgencia extrema, en la que el grupo ABO
no se puede determinar se podrá utilizar glóbulos rojos empacados del grupo O para
transfundir.
ESQUEMA DE SELECCION DE HEMOCOMPONENTES POR ABO:
Si se va a transfundir sangre total o sangre total reconstituida no hay
alternativa transfusional, todas deberán de transfundirse grupo ABO idéntico.
Si la solicitud se refiere a Glóbulos Rojos Empacados se pueden utilizar
alternativas como se indican en la tabla 1 dependiendo de las existencias y reservas
del Banco de Sangre.
Tabla 6:
Alternativas de selección de unidades de Glóbulos Rojos
Empacados dependiendo del grupo ABO del paciente a transfundir
Grupo
del Paciente
O
A
B
AB
Alternativas
Primera
O
A
B
AB
Segunda
O
O
A*
Tercera
B*
Cuarta
O
* Uno u otro de estos grupos sanguíneos pueden ser utilizados en cualquier
momento, pero si se escoge uno debe de mantenerse por el resto de las transfusiones
realizadas, no es recomendable hacer cambio de grupo.
Debido a lo anterior, se prefiere la utilización de unidades del grupo A sobre B,
ya que la frecuencia en la población del grupo A es mayor y, por lo tanto, es más
frecuente encontrar más cantidad de sangre A en reservas en los Bancos de Sangre.
Grupo Rh
La identificación de antígeno Rh D se realiza usando el hemoclasificador anti D
, la prueba puede realizarse en tubo o en placa de acuerdo a lo establecido por el
fabricante y será validado mediante una prueba de control en paralelo, que permita
demostrar que el eritrocito previamente no tenía inmunoglobulina tipo IgG adherida en
la superficie, si el control es positivo, el resultado debe ser invalidado.
Cuando la prueba da un resultado negativo, se investigará la expresión débil
del antígeno con la utilización del reactivo de antiglobulina humana, en neonatos y
donadores de sangre.
Las reacciones positivas con anti D, incluyendo el antígeno D expresado
débilmente se clasificarán como Rh POSITIVOS y los restantes como Rh
NEGATIVOS.
Si el grupo Rh no puede ser establecido, dado a que el control también
presenta aglutinación y la transfusión es urgente podrá ser utilizado glóbulos rojos
empacados Rh negativo.
Los hemocomponentes Rh positivos deberán rutinariamente ser enviados a
receptores Rh positivos.
El uso de productos Rh negativos para pacientes Rh positivos es permitido,
aunque en forma ideal, deberán de reservarse exclusivamente para pacientes o
receptores Rh negativos.
De forma inversa, los productos Rh negativos pueden no estar disponibles, en
esta situación se podrá optar por otras medidas alternativas, como posponer la
transfusión o en caso de que el retardo de la transfusión ponga en peligro la vida del
paciente y siempre que el rastreo de anticuerpos del paciente esté negativo se podría
utilizar sangre Rh positiva con un riesgo de inmunización de un 70%.
PRUEBA CRUZADA PARA TRANSFUSIÓN DE ERITROCITOS
El cruce de sangre en la actualidad ha sido expuesto a una serie de
interrogantes en cuanto a si debe ser eliminada o no en aquellos pacientes que no
presentan anticuerpos irregulares.
Lo anterior, dado que el rastreo rutinario de anticuerpos en los sueros del
receptor y del donador tiene una alta sensibilidad.
Esto no aplica para cuando la transfusión sea destinada a un paciente que
presente anticuerpos clínicamente significativos.
A estos pacientes, una vez identificado el anticuerpo y seleccionada una unidad
carente del antígeno es obligatorio realizar la prueba cruzada.
La prueba cruzada mayor se refiere a la técnica mediante el cual se demuestra
la ausencia de anticuerpos en el plasma del receptor contra los antígenos del glóbulo
rojo del donador.
Por otro lado, la prueba cruzada menor se refería al cruce entre los eritrocitos
del receptor con el suero del donador y ha sido sustituida en la mayoría de los bancos
de sangre por el rastreo rutinario de anticuerpos clínicamente significativos en los
donantes de sangre.
En caso de existir en el donante un anticuerpo de baja incidencia en su plasma
estos probablemente no causen una reacción transfusional al ser diluidos en el
plasma del receptor.
También se han modificado los medios de reacción, las temperaturas óptimas y
los períodos de incubación, seleccionando procedimientos con un menor tiempo, costo
y un máximo de detecciones de incompatibilidad.
La incubación de la prueba cruzada a temperatura ambiente ha sido siendo
eliminada y se cambió por la fase I de lectura rápida.
La prueba cruzada está constituida por tres fases que se describen en detalle
en la parte del procedimiento y se considera que existe compatibilidad cuando no se
visualiza hemólisis o aglutinación en ninguno de los pasos de la prueba.
PRUEBA CRUZADA EN SITUACIONES ESPECIALES
Urgencias.
La necesidad urgente de transfusión en ciertas situaciones clínicas establece
que la sangre sea liberada antes de que la prueba cruzada sea terminada.
El médico tratante debe estar consciente de este riesgo y firmar una hoja de
autorización para que la unidad sanguínea sea liberada, mientras el Banco de Sangre
finaliza la prueba.
En caso de que durante el proceso se determine alguna incompatibilidad en
alguno de los pasos se dará aviso de inmediato al médico encargado para que se
administre el tratamiento oportuno.
De acuerdo a la necesidad de liberación urgente del producto sanguíneo el
Banco de Sangre puede optar por:
-­‐
Enviar glóbulos rojos empacados del grupo O Rh negativo y en caso de
no tener en existencia emplear grupo O Rh positivo cuando se desconozca el grupo
sanguíneo del receptor.
-­‐
Enviar sangre compatible a grupo ABO y Rh del receptor y donador.
-­‐
Siempre que sea posible, realizar la primera fase de centrifugación
inmediata antes de enviar el producto sanguíneo.
-­‐
Cuando la transfusión no es de extrema urgencia, pero la sangre se
requiere lo más pronto posible, se puede acortar el tiempo de incubación de la fase II
de la prueba cruzada, empleando diferentes medios de reacción que requieran un
período de incubación más breve a 37ºC para finalizar con la fase de Antiglobulina
Humana.
Prueba de compatibilidad para productos plasmáticos
Deberán ser transfundidos con la corroboración previa del grupo inverso de
acuerdo al esquema transfusional que se indica en la tabla 7.
En el caso de la transfusión de plasma no se debe tomar en consideración el
tipo Rh del paciente o donante debido a que estas unidades no contienen el antígeno
D.
Para el caso de la transfusión de plaquetas, estas deben de ser transfundidas
bajo el esquema de sangre total pues poseen componentes celulares y plasmáticos.
También para las plaquetas, dependiendo del tipo de receptor y del volumen de
células transfundidas se puede considerar la administración de inmunoglobulina Rh a
los pacientes Rh negativos transfundidos con productos Rh positivos.
Tabla 7:
Alternativas de selección de unidades de plasma dependiendo
del grupo ABO a transfundir
Grupo
del Paciente
Alternativas
Primera
Segunda
Tercera
Cuarta
O
O
A*
B*
AB
A
A
AB
B
B
AB
AB
AB
* Uno u otro de estos grupos sanguíneos pueden ser utilizado en cualquier
momento, pero si se escoge uno debe de mantenerse por el resto de las transfusiones
realizadas, no es recomendable hacer cambio de grupo.
Materiales y reactivos:
Frascos de anti A, anti B, anti AB, anti D, anti A1, Reactivo de antiglobulina
humana, albúmina al 22%, células A y B al 3%.
Tubos con muestras de eritrocitos a analizar.
Tubos con muestras de suero a analizar.
Células rastreadoras.
Tubos de 12 x 75 mm para realizar las reacciones
Solución salina al 0.85% (Pizetas).
Centrífugas Serológicas.
Microscopios.
Frascos con células control de antiglobulina humana.
Pipetas Pasteur.
Bulbos para pipeta Pasteur.
Baños de María a 37ºC.
Portaobjetos.
Caja de aplicadores.
Gradillas metálicas.
Gradillas madera.
Papel toalla.
Método:
-­‐
y Paciente 4
-­‐
-­‐
Paciente 1.
-­‐
Paciente 2.
-­‐
Paciente 3.
-­‐
Paciente 4.
-­‐
paciente 1.
-­‐
paciente 2.
Rotular los tubos con el nombre Paciente 1, Paciente 2, Paciente 3
Realizar suspensiones de trabajo 3-5% de los donantes 1, 2, 3 y 4.
Añadir 50ul de la suspensión del donante 1 al tubo rotulado como
Añadir 50ul de la suspensión del donante 2 al tubo rotulado como
Añadir 50ul de la suspensión del donante 3 al tubo rotulado como
Añadir 50ul de la suspensión del donante 4 al tubo rotulado como
Añadir 100ul del suero del paciente 1 al tubo rotulado como
Añadir 100ul del suero del paciente 2 al tubo rotulado como
-­‐
Añadir 100ul del suero del paciente 3 al tubo rotulado como
paciente 3.
-­‐
Añadir 100ul del suero del paciente 4 al tubo rotulado como
paciente 4.
-­‐
Añadir 100 ul de albúmina bovina al 22% a todos los tubos.
-­‐
Mezcle los tubos, a partir de este momento iniciamos con las tres fases
de la prueba de antiglobulina humana indirecta.
-­‐
Fase I: Centrifugación inmediata o prueba rápida:
Centrifugar los tubos 15 segundos a 3500 rpm. En esta fase se establece la
compatibilidad al sistema ABO, sin embargo, otros anticuerpos (ejemplo: auto-anti-I),
pueden también ser detectados en esta fase. Leer y realizar las anotaciones.
-­‐
Fase II o a 37ºC:
Después de la lectura anterior colocar todos los tubos a 37ºC por 30 minutos.
Al concluir la incubación sacar los tubos del baño y centrifugar por 10
segundos a 3000 rpm.
Leer y hacer las anotaciones correspondientes.
Realizar tres lavados con solución salina fisiológica.
Llevar la prueba a la fase de antiglobulina.
-­‐
Fase III o antiglobulina:
Añadir 100ul del reactivo de antiglobulina humana poliespecífico.
Mezclar y centrifugue 10 segundos a 3000 rpm.
Leer y realizar anotaciones.
Las reacciones con resultado negativo confirmar con las células control.
Durante el período de incubación realizar las determinaciones de grupo
sanguíneo eritrocitario a cada una de las suspensiones de los pacientes y donantes.
RESULTADOS
Prueba Cruzada
Paciente
Donante 1
1/ Paciente
Donante 2
2/
Paciente
Donante 3
3/ Paciente
Donante 4
4/
Fase I
Fase II
Fase III
Grupo ABO/Rh
Donante
Grupo ABO/Rh
Paciente
Anti-A
Anti-B
Anti-D
Control
Grupo
eritrocítico ABO
/Rh
Paciente 1
Paciente 2
Paciente 3
Paciente 4
Anti-A
Anti-B
Anti-D
Control
Grupo
eritrocítico ABO
/Rh
Donante 1
Donante 2
Donante 3
Donante 4
Interpretación de Resultados:
Paciente 1:
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
______________________________________________________
Paciente 2:
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
______________________________________________________
Paciente 3:
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
______________________________________________________
Paciente 4:
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
______________________________________________________
Recomendaciones:
Los resultados de las pruebas deberán ser leídos contra luz blanca.
Se puede utilizar espejos magnificadores, lentes y microscopios que ayuden con la
lectura de las pruebas.
El botón de las células se resuspenderá, se hará la lectura y se asignará los
puntajes en cruces en la hoja de trabajo.
En caso de resultados incompatibles deberán ser investigados en busca de su
causa.
Consideraciones finales:
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_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_______________________________________
Procedimiento 21
Identificación de Anticuerpos
Principio
Una vez que se ha detectado la existencia de un anticuerpo irregular se debe
identificar su especificidad y su importancia clínica.
La determinación de la especificidad de los anticuerpos detectados en los análisis
pretransfusionales es importante para seleccionar unidades que no posean el antígeno
contra el cual va dirigido el anticuerpo.
Los paneles de identificación están compuestos por juegos de 8 a 16 tipos diferentes
de células del grupo O con fenotipo conocido contra los principales antígenos de grupo
sanguíneo.
Estos paneles poseen células positivas y negativas en combinación estratégica para
poder identificar anticuerpos contra alguno de los siguientes antígenos de grupo
sanguíneo:
D, C,E, c, e y usualmente V, VS, f, Cw
M, N, S, s
Fya, Fyb
Jka, Jkb
K, k y usualmente Kpa, Kpb, Jsa, Jsb
Lua, Lub
Lea, Leb
P1
Xga
Otros antígenos con fenotipo poco frecuente pueden ser incluidos dentro del panel e
incluso pueden estar incluidos dependiendo de la zona geográfica donde se encuentre
la investigación.
El panel de identificación dispone de una tabla antigénica de reacción donde se indica
la positividad de los diferentes antígenos en relación a la célula que se está
analizando, así como el lote del reactivo, fecha de vencimiento y un lugar destinado
para hacer las anotaciones de los resultados obtenidos y sus interpretaciones.
Para el estudio de anticuerpos es importante tener presente las características de los
anticuerpos como son:
- rango térmico,
- temperatura óptima de reacción,
- sensibilidad o aumento de reacción con enzimas,
- fuerza de reacción de los resultados positivos, tanto aglutinación como
hemólisis.
- Resultado del autocontrol para la detección de autoanticuerpos.
Si se tiene la sospecha que en el estudio están presentes dos o más anticuerpos se
puede hacer uso de diferentes técnicas, procesos y reactivos durante el análisis.
La aplicación de dos o más técnicas o medios de reacción permite separar los
anticuerpos en base a sus características de reacción con sus antígenos respectivos,
de tal manera que permitan separarlos y diferenciarlos con mayor claridad.
Dentro de estas técnicas se deben considerar la utilización de procedimientos de
absorción/elución, reacciones a diferentes temperaturas y uso de enzimas como medio
de reacción.
La mayoría de pacientes se sensibilizan contra un único antígeno y es fácil determinar
su especificidad, basta con ubicarse en el perfil de reacción dentro de la tabla
antigénica del panel.( 1,2 )
Características de los anticuerpos en las fases de reacción:
• Fase de Centrifugación Inmediata:
A 22ºC reaccionan mejor los anticuerpos del tipo IgM como el M, N, Lewis, y el
P.
El anti I tiene un rango térmico desde 4ºC hasta fase de antiglobulina, sin
embargo, su temperatura óptima es de 4ºC, por lo que para detectarlo mejor se
debe incubar en el refrigerador.
• INCUBACION A 37ºC:
En este grupo se incluyen los anticuerpos del tipo IgG que tiene la capacidad
de aglutinar sin llegar a la fase de antiglobulina humana. Se pueden mencionar
los anti C, c, E, e, que reaccionan óptimamente al ser incubados por 30
minutos. También pueden reaccionar a esta temperatura el anti S, s, D y el
Kell.
• FASE DE ANTIGLOBULINA HUMANA:
En esta fase se incluyen todos los anticuerpos tipo IgG no aglutinantes como el
anti Duffy, Kidd, Lutheran, S, s y Cellano.
EQUIPOS Y REACTIVOS:
Solución salina fisiológica
Panel de identificación
Panel de identificación tratado con enzima
Tubos 12 x 75mm para reacción.
Centrífugas serológicas.
Papel toalla.
Pipetas Pasteur.
Bulbos para pipetas Pasteur.
Tubos rotulados como muestra 1 con de suero/plasma a identificar.
Tubos rotulados como muestra 2 con de suero/plasma a identificar.
Tubos con eritrocitos a analizar
Frascos con cloroformo.
Tubos 13 X 100 mm.
Tapones rojos.
Pipetas 10 ml.
Pipeteadores.
Método:
Panel de identificación
-­‐
-­‐
Mezclar con suavidad y homogenizar el juego de reactivos del panel de
identificación según corresponda.
Rotular un juego de 11 tubos con el número y la muestra a analizar.
-­‐
-­‐
-­‐
-­‐
-­‐
-­‐
-­‐
Añadir 50ul de las células reactivo correspondiente 1 al tubo rotulado como
células 1.
Añadir 50ul de las células reactivo correspondiente 2 al tubo rotulado como
células 2 y así sucesivamente hasta completar los 11 tubos.
Añadir 100ul del suero o plasma a estudiar a los 11 tubos.
A todos los tubos añadir 100ul del reactivo de albúmina bovina al 22%.
Mezclar y a partir de este momento se inicia con las tres fases de la prueba de
antiglobulina humana indirecta.
Anotar los resultados obtenidos en la tabla antigénica que corresponde al lote
del panel.
Identificar según perfil antigénico obtenido el antígeno contra el cual va dirigido
el anticuerpo en estudio.
Procedimiento 22
Técnica de adsorción de anticuerpos
Principio
En inmunohematología se habla de adsorción cuando se utilizan células con
fenotipo conocido para provocar que un anticuerpo se pegue a la superficie del
glóbulo rojo.
A partir de un proceso de adsorción se pueden separar a nivel de laboratorio
dos o más anticuerpos mezclados en un suero.
Como primer punto para seleccionar las células a utilizar en la absorción se
deben agrupar las reacciones obtenidas en el panel de identificación y
establecer cuáles eventuales anticuerpos pueden estar presentes.
Seguidamente se debe buscar dentro de las unidades del Banco de Sangre
una unidad cuyo fenotipo posea sólo uno de los antígenos que se sospecha.
Una vez seleccionada la unidad se toma una alícuota y se realiza el proceso de
adsorción bajo las condiciones óptimas del anticuerpo en estudio.
La parte final del proceso establece una centrifugación que sirve para separar
los glóbulos rojos sensibilizados del plasma y así obtener los dos anticuerpos
separados.
EQUIPOS Y REACTIVOS:
Solución salina fisiológica
Panel de identificación
Panel de identificación tratado con enzima
Tubos 12 x 75mm para reacción.
Centrífugas serológicas.
Papel toalla.
Pipetas Pasteur.
Bulbos para pipetas Pasteur.
Tubos rotulados como muestra 1 con de suero/plasma a identificar.
Tubos rotulados como muestra 2 con de suero/plasma a identificar.
Tubos con eritrocitos a analizar
Baños a 37ºC
Tubos 13 X 100 mm.
Tapones rojos.
Pipetas 10 ml.
Pipeteadores.
Método:
- Seleccionar una unidad adecuada para adsorción de glóbulos rojos y tomar
estérilmente una alícuota de unos 20 ml.
- Lavar tres veces el paquete con solución salina fisiológica.
- Dejar el paquete el máximo posible sin salina después del último lavado.
- Agregar igual cantidad del suero en estudio.
- Incubar a 37ºC por 30 minutos.
- Mezclar cada 10 minutos para ayudar al proceso de adsorción.
- Tomar una muestra de eritrocitos y realizar una prueba de antiglobulina
humana directa.
- Mantener en incubación a 37ºC, hasta que se alcance el máximo de
positividad de antiglobulina humana directa, idealmente debe tener una
aglutinación de 3 a 4 cruces.
- Centrifugar 10 minutos a 2000 r.p.m, para separar el suero adsorbido y los
eritrocitos sensibilizados.
- Rotular un tubo con los datos necesarios y transferir el suero del tubo
centrifugado.
- Al suero realizar el panel de identificación de anticuerpos.
- Al paquete globular realizar procedimiento de elución.
Procedimiento 23
Técnica de Elución de Anticuerpos
Principio
El término elución significa en Inmunohematología liberar los anticuerpos unidos a la
membrana del glóbulo rojo proveniente de un proceso de adsorción.
Dependiendo de las necesidades y protocolos de trabajo del Banco de Sangre se
puede:
-­‐
-­‐
Separar el anticuerpo conservando la integridad de la membrana del glóbulo
rojo o se puede
Separar el anticuerpo rompiendo las membranas del eritrocito mediante
agentes químicos como el éter, cloroformo, digitonina o mediante condiciones
físicas extremas como la congelación o el calor.
Una vez liberado el anticuerpo en el eluído se procede a determinar su especificidad a
través del panel de identificación de anticuerpos.
EQUIPOS Y REACTIVOS:
Solución salina fisiológica
Panel de identificación
Panel de identificación tratado con enzima
Tubos 12 x 75mm para reacción.
Centrífugas serológicas.
Papel toalla.
Pipetas Pasteur.
Bulbos para pipetas Pasteur.
Tubos rotulados como muestra 1 con de suero/plasma a identificar.
Tubos rotulados como muestra 2 con de suero/plasma a identificar.
Tubos con eritrocitos a analizar
Frascos con cloroformo.
Baños a 37ºC.
Tubos 13 X 100 mm.
Tapones rojos.
Pipetas 10 ml.
Pipeteadores.
Método:
Técnica de elución con cloroformo
- Tomar el paquete de glóbulos rojos sensibilidados después del proceso de
adsorción.
- Lavar una vez con solución salina.
- A un volumen igual de células lavadas agregar un volumen de cloroformo.
- Tapar el tubo y agitar fuertemente por 1 minuto.
- Centrifugar 10 minutos a 2000 r.p.m,
- El tubo queda dividido en tres capas, una del cloroformo, otra de restos de
membrana y un eluido o hemolizado donde se encuentra el anticuerpo
separado.
- Transferir el eluído a otro tubo y realizar un panel de identificación de
anticuerpos.
Recomendaciones:
Para encontrar la especificidad del anticuerpo los resultados positivos por aglutinación
así como los negativos deben ser comparados con la tabla antigénica del panel en su
lote respectivo.
Para trabajar procedimientos de adsorción/elución siempre tomar en consideración la
temperatura óptima de reacción. Esta va a ser la temperatura donde ocurrió la
aglutinación más fuerte.
Anotaciones y consideraciones finales:
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_____________________________________________________________________
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Práctica:
Esta práctica incluye los procedimientos del 20 al 22 inclusive.
Se trabajará en grupo de trabajo por mesa en dos sesiones de laboratorio.
La primera sesión realizar la identificación de anticuerpos con panel corriente y
panel con enzima.
Con las muestras indicadas realizar proceso de adsorción y elución de
anticuerpos.
Obtener el suero adsorbido y colocar en la gradilla para trabajarlo en la
siguiente sesión de laboratorio.
Obtener el eluído y colocar en la gradilla para trabajarlo en la siguiente sesión
de laboratorio.
La segunda sesión de laboratorio realizar la identificación de anticuerpos del
suero adsorbido y del eluído.
Hacer el análisis y resolución de los casos de identificación de anticuerpos
propuestos.
PRACTICA DE CASOS:
Procedimiento 24
Incompatibilidad materno- fetal
Principio
La enfermedad hemolítica del recién nacido (EHRN) es una enfermedad en la cual la
madre en gestación produce in vivo aloanticuerpos del tipo IgG contra antígenos de
glóbulo rojo del feto que este heredó del padre.
Debido a esta sensibilización, los glóbulos rojos sufren una destrucción acelerada
tanto antes como después del nacimiento.
Para los recién nacidos que padecen la enfermedad hemolítica la elevación de los
niveles de bilirrubina se convierte en un problema clínico más grave que la pérdida de
la capacidad de transporte de oxígeno como resultado de la hemólisis.
Los antígenos localizados en la membrana de los eritrocitos, se desarrollan en
diferentes etapas de la vida intrauterina o postnatal.
Los antígenos contra el sistema de grupo sanguíneo Rh, Kell, MNSs, Duffy por
mencionar algunos, presentan al nacimiento una potencia antigénica similar a la
observada en los eritrocitos de una persona adulta.
Otros, por el contrario, se encuentran poco desarrollados, de ahí que su expresión
antigénica sea menor que los antígenos de un eritrocito de una persona adulta,
ejemplos de estos antígenos pueden ser los sistemas ABO, P1 y Lutheran.
También hay antígenos que están muy pobremente expresados al nacimiento y es
hasta después del primer año de vida cuando logran expresarse completamente,
ejemplos de estos antígenos son los del sistema Lewis y el antígeno I.
El contar con este tipo de información es importante pues a pesar de que la madre sea
portadora de alguno de los anticuerpos de la clase IgG contra algún antígeno que no
esté bien desarrollado al nacimiento, como por ejemplo un anti-Lea, la debilidad o
ausencia antigénica en el eritrocito del feto, impide que se inicie o exprese la
enfermedad.
En estos casos, puede existir la incompatibilidad eritrocitaria, sin embargo, no es una
evidencia irrefutable del diagnóstico etiológico de la enfermedad hemolítica.
Las acciones básicas en el estudio de la EHRN, se ajustan a las circunstancias en que
se ubica el médico y el paciente.
Una manera de estudiar los casos es dividiendo a los sujetos de estudio en tres
grupos: el feto o neonato, la madre y el padre.
Al feto o neonato se le debe realizar al menos las siguientes pruebas para su estudio:
Grupo ABO/Rh, prueba de antiglobulina directa, fenotipo eritrocitario, rastreo de
anticuerpos con las células pantallas y con las células A1 y B procedente del eluído de
la muestra.
Si la muestra lo permite rastreo de anticuerpos con las células A1 y B procedente del
suero de la muestra.
Que se busca con estos análisis?
-­‐
-­‐
Demostrar la presencia del antígeno en los glóbulos rojos del feto/neonato.
Demostrar la presencia del anticuerpo en el suero o glóbulo del feto neonato y
por consiguiente la reacción hemolítica que se está produciendo.
Análisis en la madre:
-­‐
-­‐
-­‐
Determinar grupo ABO/Rh.
Realizar estudio de anticuerpos.
Fenotipo
Que se busca con ellos?
-­‐
-­‐
Demostrar la ausencia del antígeno.
Demostrar la presencia del anticuerpo.
Análisis al padre:
-­‐
-­‐
Determinar grupo ABO/Rh.
Determinar el fenotipo eritrocitario.
Que se busca con ellos?
-­‐
Demostrar la presencia del antígeno en los glóbulos rojos paternos.
De esta manera se puede contar con un panorama más completo de la situación y se
puede iniciar la evaluación del caso.
La enfermedad hemolítica del recién nacido, desde el punto de vista
inmunohematológico, se puede clasificar en tres categorías principales dependiendo
de la especificidad del anticuerpo sensibilizante:
-­‐
-­‐
-­‐
Enfermedad Hemolítica por ABO, principalmente por un anti-A,B en mujeres
del grupo O.
Enfermedad Hemolítica por Rh, debida al anti-D.
Enfermedad Hemolítica por otros anticuerpos irregulares.
Transfusión intrauterina y del neonato
La sangre para transfusión intrauterina debe ser seleccionada compatible con los
anticuerpos maternos capaces de cruzar la placenta.
Los glóbulos rojos empacados seleccionados para la transfusión intrauterina
deberán ser de preferencia O Rh negativo, y utilizando el suero de la madre para
realizar las pruebas de compatibilidad.
Para las unidades de exanguíneotransfusión deberán ser compatibles con
cualquier anticuerpo materno que hubiera entrado a la circulación fetal.
Todas las unidades seleccionadas para estos procedimientos deberán ser del
grupo sanguíneo O, filtradas, irradiadas, de menos de 5 días de recolectada y en el
caso para las exanguíneotransfusión el plasma para su reconstitución deberá ser
compatible con el grupo ABO del recién nacido.
Materiales y Reactivos:
Tubos 12 x 75 mm de reacción.
Pipetas Pasteur.
Bulbos pipetas.
Muestras de suero y eritrocitos a analizar
Solución salina fisiológica.
Juego de reactivos anti A, anti B, anti AB, anti D, albúmina bovina al 22%,
reactivo de antiglobulina hunana.
Panel de identificación de anticuerpos.
Frascos con células control de AGH.
Juego de células rastreadoras 3%.
Baños maría a 37°C.
Centrífugas serológicas.
Gradillas de madera.
Gradillas de metálicas.
Microscopios.
Papel toalla.
Método:
-­‐
-­‐
-­‐
-­‐
Realizar a la muestra de sangre rotulada como niño una prueba de
inmunoglobulina directa.
Determinar el grupo sanguíneo ABO/Rh del niño.
Realizar a la muestra de plasma de la madre un rastreo e identificación de
anticuerpos.
Realizar una prueba cruzada entre la muestra del niño y el plasma del donador.
RESULTADOS:
Tipo de incompatibilidad materno fetal analizada:
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Rastreo de anticuerpos materno:
________________________________________________________________
Identificación de anticuerpo materno:
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Prueba cruzada:
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Anotaciones y consideraciones finales:
_____________________________________________________________________
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Procedimiento 25
Anemia Hemolítica Autoinmune
Principio
La anemia hemolítica inmune se define como un acortamiento en la sobrevida del
glóbulo rojo debido a/o a través del sistema inmune, específicamente por los
autoanticuerpos.
Las anemias hemolíticas autoinmune se clasifican en:
-­‐
-­‐
-­‐
-­‐
-­‐
-­‐
Anemia Hemolítica Autoinmune por anticuerpos calientes
Síndrome de aglutininas frías
Hemoglobunuria paroxística al frío
Anemia Hemolítica Autoinmune Combinada (Anticuerpos fríos y calientes)
Anemia Hemolítica Inmune inducida por drogas
Anemia Hemolítica Inmune inducida por alloanticuerpos
Cada una de estas se subclasifica en grupos de enfermedades dependiendo de la
causa que desencadena la enfermedad, es decir, si es primaria o secundaria.
La Anemia Hemolítica Autoinmune es designada como primaria si se considera como
una entidad idiopática, es decir, si no está asociada con alguna enfermedad
demostrable que la desencadene.
En contraste, la secundaria está asociada con un desorden primario y con razones
suficientes para sospechar que su asociación es más que meramente fortuita.
Estos desordenes son diagnosticados en base a las características serológicas de
reacción.
La mayoría de los casos de AHAI son causados por autoanticuerpos cuya reacción es
en caliente, es decir, anticuerpos cuya reactividad optima con los glóbulos rojos
humanos es a 37ºC y que por lo general es una inmunoglobulina de la clase IgG.
El Síndrome de Aglutininas frías es generalmente causado por un autoanticuerpo de la
clase IgM y que exhibe una reactividad máxima a 4ºC.
El anticuerpo causante de la Hemoglobinuria Paroxística Nocturna es una
inmunoglobulina IgG bifásica que difiere en su modo de acción. Este anticuerpo se
detecta in vitro por su habilidad de causar hemólisis de los glóbulos rojos normales en
un procedimiento que lleva dos pasos, una incubación en frío seguido por una
incubación a 37ºC en presencia del complemento.
Finalmente, la ingesta de ciertos medicamentos pueden causar anemia hemolítica
pero aquí el anticuerpo siempre posee una especificidad por la droga o sus
metabolitos.
Reactivos y materiales:
Tubos 12 x 75 mm de reacción
Pipetas Pasteur.
Bulbos pipetas.
Muestras de suero y eritrocitos a analizar
Solución salina.
Reactivo de antiglobulina humana poliespecífico.
Reactivo de antiglobulina humana monoespecífico IgG.
Reactivo de antiglobulina humana monoespecífico C3
Panel de identificación eritrocitos.
Frascos con células control de AGH.
Juego de células rastreadoras 3%.
Baños maría a 37°C.
Centrífugas serológicas.
Gradillas de madera.
Gradillas de metálicas.
Microscopios.
Papel toalla.
Método:
De la muestra en estudio:
Hacer una suspensión de trabajo entre el 3-5% y:
-­‐
-­‐
-­‐
Realizar una prueba de antiglobulina humana directa utilizando el reactivo
poliespecífico.
Realizar una prueba de antiglobulina humana directa utilizando el reactivo
monoespecífica IgG.
Realizar una prueba de antiglobulina humana directa utilizando el reactivo
monoespecífico C3.
Realizar un rastreo e identificación de anticuerpos.
RESULTADOS
Prueba de antiglobulina humana directa:
MUESTRA
Poliespecífico
Monoespecífico
IgG
Monoespecífico C3
Rastreo de anticuerpos: _________________________________________
Identificación: ___________________________________________________
Interpretación de Resultados:
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
______________________________________________________