Download o Proteinas

LAS ESTRUCTURAS TERCIARIAS DE LAS PROTEINAS ESTAN
MEJOR CONSERVADAS A TRAVES DE LA EVOLUCIÓN QUE SUS
RESPECTIVAS SECUENCIAS DE AMINO ÁCIDOS
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Segmentos (o Proteinas) Intrínsicamente Desordenados
CARECEN DE CENTRO HIDROFOBICO
ALTA DENSIDAD DE AA CON CARGA (K, R, E & P)
TUMOR SUPPRESOR p53
http://origin-ars.els-cdn.com/content/image/1-s2.0-S0014579308001324-gr2.jpg
Segmentos (o Proteínas) Intrínsicamente Desordenados
CARECEN DE CENTRO HIDROFÓBICO
ALTA DENSIDAD DE AA CON CARGA (K, R, E & P)
TUMOR SUPPRESOR p53
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http://cdn.sinobiological.com/Signaling-Pathway-Image/p53-Pathway.jpg
PROTEOSTASIS
http://www.nature.com/nrm/journal/v11/n11/images/nrm2993-f1.jpg
PROTEIN FOLDING
LA PARADOJA DE LEVINTHAL
100 AA/10 CONFORMACIONES = 10100
~10-13 SEGUNDOS
1077 AÑOS!!!
TERMODINÁMICA DEL “PROTEIN FOLDING”
THE FREE-ENERGY FUNNEL
MENOS ENTROPÍA=MAS ORDEN=MENOS ENERGÍA
DESNATURALIZACIÓN: PÉRDIDA DE ESTRUCTURA TERCIARIA
Cambio abrupto sugiere que es un proceso cooperativo
DESNATURALIZACIÓN: PÉRDIDA DE ESTRUCTURA TERCIARIA
Cambio abrupto sugiere que es un proceso cooperativo
RENATURALIZACIÓN
PRUEBA QUE ESTRUCTURA TERCIARIA ES DETERMINADA POR SECUENCIA DE AA
PROTEIN FOLDING
CHAPERONES
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PROTEIN FOLDING
CHAPERONES: GROEL/ES DE E. COLI
PROTEIN FOLDING
CHAPERONES: HEAT-SHOCK PROTEINS (HSP) EN EUCARIÓTAS
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http://www.neurology.org/content/76/7/660/F1.large.jpg
PROTEIN FOLDING
CHAPERONE: DNAK/J
DNAJ – HSP40
DNAK – HSP70
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SISTEMA DE DEGRADACIÓN PROTEOSOMAL DE UBIQUITINA
RECONOCIMIENTO Y CONJUGACIÓN
DEGRADACIÓN Y RECICLAJE
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ZEN Y EL ARTE DE LAS PROTEINAS
SEPARACIÓN Y FRACCIONACIÓN
SEPARACIÓN Y FRACCIONACIÓN
XENOPUS EGG EXTRACTS
Lipids
M-Phase
Extract
Pigment
Granules
+ Calcium
M-Phase Extract
S-Phase Extract
SEPARACIÓN Y FRACCIONACIÓN
XENOPUS EGG EXTRACTS
Sperm
chromatin
+ Calcium
M-Phase Extract
Sperm chromatin
S-Phase
Extract
S-Phase extract
2x
6,100 x g
5 min
6,100 x g
5 min
Nuclear
Fraction
Chromatin
Fraction
FRACCIONACIÓN: CROMATOGRAFÍA DE COLUMNA
CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO DE IONES
ION-EXCHANGE CHROMATOGRAPHY
CATION EXCHANGERS & ANION EXCHANGERS
CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN POR TAMAÑO
SIZE-EXCLUSION CHROMATOGRAPHY
CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD
AFFINITY CHROMATOGRAPHY
CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD
PURIFICACIÓN DE ANTICUERPOS
http://www.adocreative.com/clients/peprotech/images/FigureI-3.png
PRODUCCIÓN DE ANTICUERPOS MONOCLONALES
Mieloma
http://www.nature.com/nchembio/journal/v4/n6/images/nchembio0608-326-F1.jpg
PRODUCCIÓN DE ANTICUERPOS MONOCLONALES
https://www.youtube.com/watch?v=sOTdqLDMvcg
PRODUCCIÓN DE ANTICUERPOS POLICLONALES
http://www.lifesciences.sourcebioscience.com/media/382225/custom_antibody_flow20120928_499x145.jpg
http://absoluteantibody.com/wordpress/wp-content/uploads/Antibodies-as-tools.png
DIÁLISIS
SEPARACIÓN ENTRE PROTEINAS Y PEQUEÑOS SOLUTOS
http://biosiva.50webs.org/proiso4.jpg
ELECTROFORÉSIS
SEPARACIÓN Y CARACTERIZACIÓN
ELECTROFORÉSIS
SEPARACIÓN Y CARACTERIZACIÓN
POLÍMERO DE
POLYACRILAMIDA
http://www.siumed.edu/~bbartholomew/images/chapter6/F06-21.jpg
ELECTROFORÉSIS
SEPARACIÓN Y CARACTERIZACIÓN
La migración de una proteína por el gel durante electroforésis es función de
su tamaño y su forma.
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http://oregonstate.edu/instruct/bb450/spring13/stryer7/3/figure_03_07.jpg
ELECTROFORÉSIS
MIGRACIÓN DE PROTEINAS CARGADAS EN UN CAMPO ELÉCTRICO
 Se
enlaza casi una molecula de SDS
por cada residuo en la proteína.
 Contribuye una gran carga negativa
 Confiere a cada proteína una razon de
carga:masa similar.
 Parcialmente desdobla la proteína
ELECTROFORÉSIS
ESTIMANDO EL PESO MOLECULAR DE UNA PROTEÍNA
ELECTROFORÉSIS
DETECCIÓN CON TINTE COOMASSIE BLUE
ELECTROFORÉSIS
DETECCIÓN CON WESTERN BLOT
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ELECTROFORÉSIS
DETECCIÓN CON WESTERN BLOT
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ISOELECTRIC FOCUSING
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ISOELECTRIC FOCUSING
SEPARACIÓN POR pI
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ELECTROFORÉSIS EN DOS DIMENSIONES
SEPARACIÓN POR MASA Y pI
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2D GEL
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SECUENCIACIÓN DE PROTEÍNAS
DEGRADACIÓN EDMAN-TERMINAL N
pH bajo
pH bajo
pH alto
SECUENCIACIÓN DE PROTEÍNAS
FRAGMENTACIÓN CON PROTEASAS
ESPECTROMETRÍA DE MASA
MASS SPECTROSCOPY (MS)
ELECTROSPRAY IONIZATION MS (ESI MS)
DETERMINACIÓN DE MASA
http://www.mhhe.com/physsci/chemistry/carey/student/olc/graphics/carey04oc/ch13/figures/1334.gif
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SECUENCIACIÓN DE PROTEÍNAS
TANDEM MASS SPEC (MS/MS)
SECUENCIACIÓN Y CARACTERIZACIÓN
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SÍNTESIS DE PROTEÍNAS
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BIOINFORMÁTICA
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http://www.nature.com/nbt/journal/v20/n10/images/nbt1002-991-F1.gif
BIOINFORMÁTICA
BIOINFORMÁTICA
PUBMED (http://www.ncbi.nlm.nih.gov)
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BIOINFORMÁTICA
EXPASY (http://www.expasy.org)
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