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UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO
FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA DE LOS ALIMENTOS
Profesor:
Ing. M. Sc. Mario Paredes
Práctica # 1
Ayudante: Egda. Gabriela Vinueza
Semestre: Cuarto
TEMA: “SIEMBRA EN PLACA SOBRE MEDIOS DIFERENCIALES”
1. INTRODUCCIÓN
En esta práctica se aprovechan las características fisiológicas de las bacterias, de tal
modo que las colonias pueden ser reconocidas directamente en las placas. En la
primera parte de esta práctica se describe el aislamiento de las bacterias de la leche,
capaces de fermentar la lactosa. Mediante la adición de un indicador de pH, al agar
lactosa se puede detectar visualmente aquellas colonias que producen ácido a partir de
la lactosa.
En la segunda parte se indica el aislamiento de las bacterias del suelo capaces de
hidrolizar la caseína, empleando el mismo principio que se ha utilizado para medir la
hidrólisis de la caseína.
2. OBJETIVOS
2.1.
Conocer el principio de los medios diferenciales.
2.2.
Observar bacterias lácticas y bacterias que hidrolizan la caseína a partir de
muestras de leche y suelo.
3. MATERIALES
1 Termómetro
2 Erlenmeyer (500 ml)
2 Erlenmeyer (125 ml)
6 Pipetas (1 ml)
1 Pipeta 10 ml
Incubadora a 37 y 30 ºC
1 Vaso de precipitación
Agar lactosa extracto de levadura 60 ml
6 Cajas Petri estériles
Agar leche descremada
3 Porta y cubre objetos
Soluciones de: Alcohol, Cristal violeta,
1 Piceta con agua destilada
Lugol, Safranina.
1 Microscopio por cada subgrupo
Leche descremada en polvo
1 Filtro de tela
Leche sin pasteurizar.
4. PROCEDIMIENTO
4.1.
BACTERIAS FERMENTADORAS DE LACTOSA
4.1.1.
Esterilizar agar lactosa-extracto de levadura que contenga el indicador
PBC (púrpura bromo cresol) para 2 cajas y enfríelos a 45ºC.
Agar lactosa extracto de levadura
4.1.2.
Extracto de levadura
10.0 g
Triptona
10.0 g
Lactosa
5.0 g
K2HPO4
5.0 g
Agar
15.0 g
Agua
1000 ml
Cuando use indicador:
4.1.2.1. Púrpura de bromo cresol (1.6% solución alcohólica del 80%) 2ml por
litro.
4.1.2.2. Siembre por el método de dilución utilizando la muestra de leche.
4.1.2.3. Incube las placas a 37ºC hasta el siguiente periodo de laboratorio.
4.1.2.4. Examine en la placa la presencia de colonias rodeada de zonas
amarillas. El indicador PBC es amarillo a valores de pH inferiores a
5.2; por lo tanto una zona amarilla es indicativo de la formación de
ácido.
4.2.
BACTERIAS HIDROLIZANTES DE LA CASEÍNA
4.2.1.
Preparar agar leche descremada (al agar para recuento en placa, añadir
leche descremada, esterilizada al 2%) para 2 cajas petri. Esterilizar en
autoclave durante 20 min. A 121ºC y enfríelos a 45ºC.
Agar leche descremada
Triptona
5.0 g
Extracto de levadura
2.5 g
Glucosa
1.0 g
Leche descremada en polvo
20.0 g
Agar
15.0 g
Agua
1000 ml
4.2.2.
Siembre por el método de dilución, una muestra de la suspensión de tierra
suministrada.
4.2.3.
Incube las placas a 30ºC hasta el próximo periodo de laboratorio.
4.2.4.
Examine en las placas la aparición de colonias rodeadas de zonas claras,
la caseína es opaca en la placa antes de la incubación, por hidrólisis se
convierte en productos solubles. Por lo tanto, una zona clara alrededor de
una colonia es indicativa de la digestión de la caseína.
4.2.5.
Realice tinciones de Gram en tres colonias de bacterias fermentadoras de
lactosa y en otras tres que hidrolicen la caseína.
5. RESULTADOS
-
De acuerdo a lo observado se diría que los organismos de cada hábitat
presentan características fisiológicas y morfológicas comunes, fundamente
bibliográficamente su respuesta.
-
Explique cómo se observa que la caseína se ha degradado, así como indique
qué es la caseína.
-
Presentar gráficos y discusión de lo observado en práctica.
6. CUESTIONARIO
6.1.
Las bacterias que producen ácido acético se pueden identificar directamente en
un medio que contenga CaCO3 en suspensión. ¿Cuál es el fundamento de
esta técnica de aislamiento?.
6.2.
Por qué se denominan medios diferenciales y qué sustancias químicas se
agregan a estos para diferenciarlos.
6.3.
Cuál es o son las enzimas responsables de la hidrólisis de la caseína?.
Explique su mecanismo de acción.
6.4.
Cuál es la función del indicador en la formación del ácido a partir de la lactosa?
7. BIBLIOGRAFÍA
SEELEY, H: 1973. “Microbios en Acción”. 1era. Edición. Barcelona – España. Ed.
Blume.
PELCZAR, M: 1995. “Microbiología”. 2da. Edición. Ed. Mc Graw Hill. New York.
BURDON, W: 1974. “Microbiología”. México. Ed. Cultural.