Download Congreso Nacional del XIV Verano de la Investigación Científica del

XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico
EFECTO DEL COLECALCIFEROL EN LA EXPRESIÓN DE GENES DE VIRULENCIA
DE Staphylococcus aureus
Minerva Frutis Murillo Instituto Tecnológico de Morelia, [email protected]. Asesor Joel
Edmundo López Meza CMEB – FMVZ de la Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo,
[email protected]
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
La mastitis bovina es la principal enfermedad que afecta al ganado lechero a nivel
mundial, se caracteriza por una respuesta inflamatoria de la glándula mamaria ante un
trauma o infección. Staphylococcus aureus es el principal patógeno relacionado con esta
patología, aislándose en el 70% de las infecciones intramamarias. Esta bacteria evade al
sistema inmune del animal al internalizarse en la célula hospedera (ej. célula de epitelio
mamario bovino, CEMB), y para lograrlo es necesario que exprese un amplio arsenal de
factores de virulencia (ej. ClfB, SpA, FnBPA y FnBPA). Se ha reportado que el pretratamiento (24 h) de las CEMB con colecalciferol (50 nM) disminuye la internalización de
S. aureus al favorecer la respuesta inmune innata. Sin embargo, no se ha evaluado el
efecto de este compuesto sobre la expresión de genes de virulencia de S. aureus.
METODOLOGIA
Se utilizó una cepa certificada de Staphylococcus aureus (ATCC 27543) con capacidad
de internalizarse en las CEMB. Para obtener el inóculo, la bacteria se creció en caldo
Luria Bertani (LB), incubándose a 37°C toda la noche. Se realizó la extracción de ADN
genómico y se determinó la temperatura de alineamiento de oligonucléotidos específicos
que amplifican el gen de la proteína A (SpA), de la proteína de unión a fibronectina A y B
(FnBPA y FnBPB, respectivamente), para utilizarlos posteriormente en qPCR. Para
evaluar la expresión relativa de genes de virulencia de S. aureus, se incubó a la bacteria
con 50 y 200 nM de colecalciferol (2 ó 24 h), se extrajo el ARN total usando Trizol
(Invitrogen) siguiendo las indicaciones del fabricante, y se sintetizó el ADNc. Finalmente,
se evaluó la expresión del gen del factor de aglutinación B (ClfB) mediante qPCR,
usando como control el gen 16S.
CONCLUSIONES
Las temperaturas de alineamiento óptimas de los oligonucleótidos utilizados fueron
60°C, 59°C y 59°C para amplificar SpA, FnBPA y FnBPB, respectivamente. El
tratamiento de 50 nM de colecalciferol (2h) indujo (~10 veces) la expresión del gen del
ClfB en S. aureus. Es necesario evaluar la expresión de otros genes de virulencia
modulada por colecalciferol y establecer su relación con la internalización bacteriana.
© Programa Interinstitucional para el Fortalecimiento de la Investigación y el Posgrado del Pacífico
Agosto 2014