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DESARROLLO DE EMBRIONES in vitro A PARTIR DE BLASTÓMERAS
OBTENIDAS DE EMBRIONES EN ETAPA DE DOS CÉLULAS EN RATONES
DE CEPA CD-1.
Sampedro-Pacio E1, Flores-Alonso JC2, Batiz-Romero JA3, Escamilla-Weismann
C3 y Reyes Luna R1. 1Lab. Biología del Desarrollo, Escuela de Biología,
Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2Lab. Biología de la Reproducción,
Centro de Investigación Biomédica de Oriente, IMSS, Metepec, Puebla, 3Bioterio
“Claude Bernard”, Benemérita Universidad Autónoma de Puebla.
La capacidad de una blastómera para generar un nuevo embrión nos ha
permitido observar su potencialidad de desarrollo in Vitro. También se ha
reportado la obtención de células madre embrionarias a partir de una blastómera
microseparada, pero cuando las líneas celulares embrionarias son aisladas de la
masa celular interna del blastocisto, este procedimiento ocasiona la destrucción
del embrión. Sería de suma importancia estudiar en primer lugar, el desarrollo de
embriones a partir de blastómeras microseparadas en donde estas células
presentan la propiedad de totipotencialidad y posteriormente trasladar esta
metodología a la obtención de células madre de origen embrionario.
Para ello, cuatro grupos de 3 ratones hembra de 10 semanas de edad de la cepa
CD-1 fueron estimuladas hormonalmente para inducir superovulación con la i.p. de
5 U.I. de PMCG seguida de la i.p. de 5 U.I. de HCG 48 h después. Las hembras
fueron sacrificadas a las 16 h por dislocación cervical y los oviductos fueron
recolectados y colocados en medio CZB-H para recuperar las células ovuladas.
Todos los procedimientos de recuperación y manipulación se realizaron bajo un
microscopio estereoscópico; y todas las incubaciones se realizaron a 37°C en
atmosfera húmeda de aire y CO2 al 5%. Las células recuperadas de los oviductos
se incubaron por 9 h en medio CZB, los ovocitos con presencia del primer cuerpo
polar se incubaron con 50,000 x 106 espermatozoides obtenidos de machos
adultos de la cepa CD-1, que previamente fueron capacitados 1 h en medio CZB
suplementado con 4 mg/ml de Albúmina de Suero Bovino. Se procedió a cultivar
las células en medio CZB hasta observar el desarrollo de embriones en estadio de
2 células. Con la ayuda de dos micromanipuladores se procedió a separar las
blastómeras en medio CZB-H y después se cultivaron en medio CZB para el
desarrollo de un nuevo embrión. Se determino los tiempos de cada uno de los
procedimientos y la viabilidad de cada embrión obtenido por FIV, de las
blastómeras microseparadas y de los embriones obtenidos a partir de cada
blastómera por medio de la tinción con diacetato de fluoresceína-yoduro de
Propidio.
Se establecieron 9 h de cultivo para que las células recuperadas de los oviductos
terminaran de madurar y se pudiera observar el primer cuerpo polar para realizar
la FIV. El tiempo óptimo para la obtención de embriones en etapa de dos células
fue de 14 h después de iniciada la FIV. El desarrollo de embriones en cultivo a
partir de blastómeras microseparadas tomo 46 h de incubación. Se obtuvo un 50%
de éxito en la obtención de embriones por FIV en los cuatro grupos estudiados.
Establecidos los tiempos de todos los procedimientos, la viabilidad celular de los
ovocito, embriones y blastómeras fue del 80%. La totipotencialidad de las
blastómeras para generar un nuevo embrión se mantuvo en las condiciones
establecidas en el laboratorio.