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XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico
CARACTERIZACIÓN DE UN PLÁSMIDO CODIFICANTE PARA LA PROTEÍNA
NS2A DEL DENV-2
Alan Michelle Ferman Orduña Unidad Académica de Ciencias Químico Biológicas de la
Universidad Autónoma de Guerrero, [email protected], Asesora: Dra. Leticia Cedillo
Barrón Co-asesor M.C Gaurav Shrivastava Centro de Investigación y Estudios Avanzados
del Instituto Politécnico Nacional, [email protected]/[email protected]
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
El Dengue es en la actulidad la enfermedad más importante transmitida por
artrópodos ya que infecta aproximadamente 2500 millones de personas (más del
40% de la población mundial) constituyendo un gran problema de salud pública.
La OMS calcula que cada año se producen entre 50 y 100 millones de infecciones.
El virus dengue posee cuatro serotipos diferentes (DENV 1-4) cada uno de estos
puede causar infección la cual puede ser en su forma febril autolimitada o causar
las formas severas de la enfermedad; dengue hemorrágico o síndrome de shock
por dengue. El Dengue es ocasionado por el virus homónimo, virus Dengue
(DENV) el cual es un virus envuelto que posee un genoma de RNA de cadena
sencilla de polaridad positiva el cual pertenece a la familia Flaviviridae, pesa
alrededor de 11 kb, contiene un sólo marco de lectura que codifica para una sola
poliproteína la cual es procesada proteolíticamente para dar origen a tres
proteínas estructurales( E; envoltura, preM; membrana, y C; cápside) y siete no
estructurales ( NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B y NS5). Existen muchos
aspectos de la patogénesis molecular y de las interacciones entre las proteínas
virales y la célula, que permanecen aún sin dilucidar, se ha descrito que las
proteínas virales estan íntimantente involucradas en los diversos fenómenos de la
patogénesis, tal es el caso de la proteína NS2A, la cual se ha elucubrado su
participación en eventos de replicación, sin embargo no está del todo demostrada
su participación en la inmunopatogénesis, por tal motivo es indispensable evaluar
el efecto de esta proteína viral en la biología del virus.
Objetivo general: Expresar y purificar la proteína recombinante NS2A del virus
dengue en un sistema bacteriano.
METODOLOGÍA
El trabajo se realizó a partir de un plásmido que codifica para la proteína NS2A,
esta construcción se analizó con las enzimas de restricción EcoRI y KpnI. Una vez
comprobada la presencia del amplicón en el vector, las proteínas expresadas en
este vector están reguladas por el promotor Lac. Se transformó una cepa
competente de E. coli (BL21 DE3) debido a su alta capacidad de expresión, esta
cepa se transformó integrando el plásmido codificante para la proteína de interés
(NS2A-pET 151 topo), de manera subsecuente se realizaron cultivos con un
período de incubación de toda una noche, al día siguiente se indujo la expresión
de la proteína con IPTG [1 mM] durante un período de 4 h a 37ºC. Se analizó la
presencia de la proteína mediante ensayos de Western Blot con el anticuerpo
HRP-Histidina.
© Programa Interinstitucional para el Fortalecimiento de la Investigación y el Posgrado del
Pacífico
Agosto 2014
XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico
CONCLUSIONES
En este trabajo logramos expresar, identificar y purificar la proteína NS2A del
DENV-2 para evaluar su papel en la patogénesis. Los resultados obtenidos son
suficientes para llevar a cabo otros ensayos biológicos ya que la caracterización
molecular del plásmido codificante de la proteína NS2A nos puede dar mas
aproximaciones en la patogénesis molecular.
© Programa Interinstitucional para el Fortalecimiento de la Investigación y el Posgrado del
Pacífico
Agosto 2014