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XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico
ANÁLISIS PROTEÓMICO DE LA INTERACCIÓN DE CÉLULAS DE COLON
HUMANAS CON Bifidobacterium longum
María Teresa Arceo Martínez Genómica Alimentaria de la Universidad de La Ciénega del
Estado de Michoacán de Ocampo, [email protected]. Asesora Dra. Ana Paulina
Barba de la Rosa del Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica,
[email protected]
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
De acuerdo con la Sociedad Americana del Cáncer, esta enfermedad es
responsable de cerca del 13% de las muertes a nivel mundial, definiéndose como
la división no regulada de un grupo celular. De entre los tipos de cáncer más
comunes se encuentra el cáncer colorrectal (CCR), el cual representa la segunda
causa de muerte por cáncer en Estados Unidos y México. Ante esto, se ha
demostrado una asociación directa entre el desarrollo de cáncer y el estilo de vida,
siendo la dieta responsable del 75 al 80% de los casos, por lo que se ha propuesto
que esta relación radica en la modificación del microbioma intestinal y colónico.
Estudios recientes mencionan que diversos géneros bacterianos de carácter
probiótico como Bifidobacterium han reducido significativamente el daño al ADN
inducido por carcínogenos en líneas celulares de colon; sin embargo, el
mecanismo de dicho efecto aún no está del todo dilucidado, por lo tanto se
propone realizar un perfil proteínico comparativo de células de colon humanas
cancerosas y normales, con y sin exposición a Bifidobacterium longum.
METODOLOGÍA
La cepa de Bifidobcaterium longum ATCC15707 se cultivó en medio Mann
Rogose-Sharpe (MRS) en condiciones de anaerobiosis a 37 oC. Su identidad fue
corroborada por amplificación por PCR del gen F6PPK. Se estandarizó el método
de extracción de proteínas solubles emplendo una solución de lisis ácida y
sonicación. Asimismo, la línea celular cancerosa de colón SW480 fue mantenida
en medio DMEM, mientras que la línea normal de colon CRL-1831 se cultivó en
medio EMEM, ambas a 37 oC y 5% de CO2. Cuando las células de colon llegaron
a 85% de confluencia se realizó la interacción de células con B. longum agregando
la cantidad de bacterias necesaria para obtener una densidad óptica de 0.5 (1X108
bacterias aprox.). Las proteínas totales solubles de las células de colon antes y
despúes de la interacción con el probiótico fueron extraídas empleando el método
urea-tiourea y las proteínas se analizaron mediante electroforesis en dos
dimensiones (2-DE). Por último, se realizó el ensayo de viabilidad celular
empleando el método basado en la reducción de Bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2il)-2,5 difeniltetrazolio (MTT).
CONCLUSIONES
En la estancia se logró el establecimiento del cultivo de B. longum así como de las
lineas celulares de colon. Se cuantificó la cantidad de proteína obtenida tanto en
las bacterias como en las líneas celulares de colon bajo los diferentes
© Programa Interinstitucional para el Fortalecimiento de la Investigación y el Posgrado del
Pacífico
Agosto 2014
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tratamientos, y se realizó la corrida electroforética, lo que representa algunos
resultados obtenidos hasta el momento.
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