Download Congreso Nacional del XIV Verano de la Investigación Científica del

XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico
RELACIÓN ESTRUCTURA-FUNCIÓN DE LA ONCOPROTEÍNA
ADENOVIRAL E1B 55K
Guadalupe Mariana González Flores Centro Universitario de los Lagos de la Universidad de
Guadalajara, [email protected]. Asesor Ramón A. Gonzalez García-Conde Universidad
Autónoma de Morelos, [email protected]
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
Los adenovirus son agentes virales ubicuos, causantes de enfermedades respiratorias,
gastrointestinales y queratoconjuntivitis. Además, pueden inducir la formación de
tumores en roedores y la transformación de células en cultivo.
La proteína E1B-55K (E1B) es una oncoproteína multifuncional que inhibe al supresor
tumoral p53, induce la degradación de algunas proteínas celulares y modula la expresión
de los genes virales tardíos.
En nuestro laboratorio se ha observado que la proteína E1B podría modular la
replicación del DNA y la transcripción de los genes virales, por lo que se pretende
determinar si esta proteína impacta directamente la transcripción de genes virales,
mediante la construcción de vectores que portan el gen de luciferasa bajo el control de
promotores virales de interés.
METODOLOGIA
Para determinar si la E1B puede activar la transcripción de los genes virales tempranos,
E1A, E2E, E2L y tardío, ML, se construyeron vectores con el gen de luciferasa bajo el
control de estos promotores. Para lograr esto, se diseñaron oligonucleótidos para
amplificar las secuencias de interés por PCR con el fin de insertarlas en el plásmido
pLuc. Una vez obtenidas las construcciones, estos plásmidos pueden utilizarse para
evaluar la actividad de E1B al cotransfectar células con cada uno de los plásmidos
construidos y un plásmido que expresa la E1B (pcDNA-E1B), para medir la actividad de
luciferasa.
CONCLUSIONES
La proteína adenoviral E1B es un blanco importante en el diseño de vectores con
propiedades oncolíticas; sin embargo, sus actividades en el ciclo de replicación viral no
se conocen con detalle. En este trabajo se planteó la construcción de vectores para
evaluar si la E1B puede regular directamente la transcripción de genes virales,
tempranos y tardío, usando como gen reportero al de la luciferasa. Los promotores de
los genes de interés se obtuvieron por PCR y cada uno de los plásmidos se está
utilizando para evaluar el impacto de la E1B sobre la transcripción. Los datos que
puedan obtenerse aportarán información útil en el estudio de las actividades de esta
oncoproteína.
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Agosto 2014