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XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico
ANALISIS DE COMPORTAMIENTO ANTE EL ESTRÉS OXIDATIVO EN CEPAS
MUTANTES DE Ustilago maydis y Saccharomyces cerevisiae EN EL GEN DE LA
METACASPASA.
Mónica Ponce García, Instituto Tecnológico Superior de Ciudad Hidalgo; [email protected];
Asesor Dr. José Antonio Cervantes Chávez, Universidad Autónoma de Querétaro Campus
Aeropuerto. [email protected]
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
El hongo Ustilago maydis en un hongo patógeno biotrófico del maíz que produce la
enfermedad conocida como carbón común o Huitlacoche en el maíz y también en el
teocintle. Por otro lado Saccharomyces cerevisiae es un hongo unicelular utilizado
comúnmente en la industria alimenticia y el cual se caracteriza por ser un modelo de
estudio biológico y de ciencias básica de organismos eucariotas. En sus genomas se ha
identificado la presencia de un gen con función metacaspasas el cual está involucrado
en la supervivencia ante condiciones de estrés. Las metacaspasas son proteasas de
cisteína similares estructuralmente a las caspasas. Esta proteína se asocia a los
procesos de muerte celular programada.
Se ha reportado en S. cerevisiae que el gen de la proteína metacaspasa cumple un
papel importante en los procesos de muerte celular programada de células expuestas a
diferentes tipos de estrés ambiental como H2O2, NaCl, entre otros. En este trabajo se
utilizaron 5 cepas mutantes Δmca1 denominadas 202 y 203 de S. cerevisiae y 160, 161
y 165 de U. maydis respectivamente. Así como las correspondientes cepas silvestres
198 y 178 respectivamente. Nuestra hipótesis es que las mutantes presentarán mayor
resistencia ante las condiciones de estrés oxidativo en comparación con la cepa
silvestres.
METODOLOGÍA
Se realizó un tratamiento de estrés oxidativo con Peróxido de Hidrogeno 1.3M; 10 μL y 5
μL, así como con Terbutoxido 0.7M; 15 μL, durante 3 horas en agitación a 28°C.
Transcurrido el tiempo de exposición al agente oxidante se realizó una tinción con azul
de tripano el cual tiñe células muertas, para realizar un conteo diferencial al microscopio
del número de células muertas y vivas. Posteriormente se realizaron diluciones seriadas
de las muestras tratadas y sus controles, con las cuales se efectuó una siembra en
medio sólido medio minimo pH 7 (U. maydis), medio completo YPD (S. cerevisiae) de las
diluciones de 1 x 104 cell/mL y 1 x 103 cell/mL de muestras tratadas y controles de 1 x
103 cell/mL. Se evaluaron el número de células muertas así como el número de unidades
formadoras de colonia en placa para ser comparadas con los controles y la cepa
silvestre, así determinar tanto las concentraciones adecuadas del agente oxidante como
su comportamiento ante dicho tratamiento.
CONCLUSIONES
Una vez realizadas mínimo 3 repeticiones de cada tratamiento, se espera observar
mayor supervivencia en las cepas mutantes 160, 161 y 165 de U. maydis así como en la
202 y 203 de S. cerevisiae, como afirmación de la hipótesis planteada.
© Programa Interinstitucional para el Fortalecimiento de la Investigación y el Posgrado del Pacífico
Agosto 2014