Transcript
XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico EVALUACIÓN BIOLÓGICA DE ALIMENTOS, PRODUCTOS NATURALES Y SUS COMPUESTOS Josué Misael Zamudio-Bolaños1+ Luis Alberto Madrigal-Pérez1-2 y Minerva Ramos Gómez2+ 1 Instituto Tecnológico Superior de Ciudad Hidalgo y 2Universidad Autónoma de Querétaro. Alumno: [email protected]. Asesora: [email protected]. Los estudios del envejecimiento han tomado gran importancia en la investigación biomédica. El envejecimiento puede ser definido como la disminución progresiva de la capacidad de una célula o de un organismo para responder al estrés, daños o lesiones. Así mismo se ha encontrado que algunas sustancias polifenólicas presentes en plantas tienen efectos antioxidantes, prolongando la viabilidad de las células. El resveratrol es un polifenol, el cual se ha demostrado tiene efectos benéficos sobre la salud en seres humanos, aunque no se ha demostrado que aumente la longevidad en Saccharomyces cerevisiae, en nuestro grupo de investigación, se sugiere que existe un efecto sobre la levadura mediado por la vía de señalización Sir2p/Elm1p/Snf1p. Sin embargo, es poca la evidencia acerca de este mecanismo en levaduras. Es así, que se pretende establecer el mecanismo por el cual el resveratrol pudiera aumentar la longevidad en S. cerevisiae. Para lo cual se adquirieron las mutantes de la vía de señalización que se propone, las cuales fueron retadas con diferentes dosis de resveratrol. Para encontrar si existe una activación directa entre Sir2p y Snf1p se realizaron análisis de Western Blot aunque durante la estancia se está trabajando en la estandarización del Western Blot todavía. Esta técnica de inmunodetección será utilizada para determinar y cuantificar proteínas en las distintas etapas de crecimiento o ausencia de las mismas en el caso de las mutantes. De igual manera se realiza cuantificación de proteína por medio de la técnica BCA para asegurar que la concentración de la muestra de proteínas a analizar en el Western Blot sea mayor a 30 µg por carril para asegurar la presencia de la proteína de interés y por consiguiente su detección. La técnica BCA se ha realizado de manera satisfactoria todas las veces en las que fue requerida. Sin embargo, las concentraciones de proteína en las muestras son insuficientes para contener los 30 µg de proteínas en el volumen utilizado para el análisis en Western Blot. Por tal razón se implementará un protocolo de extracción de proteína más eficiente. Los resultados obtenidos del Western Blot a pesar de las bajas concentraciones que se han analizado permitieron la detección de las proteínas AMPK Y AMPK (Thr) en muestras obtenidas del cultivo de la cepa BY4742. © Programa Interinstitucional para el Fortalecimiento de la Investigación y el Posgrado del Pacífico Agosto 2014
