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MANUAL DE MICROBIOLOGÍA
PRACTICA 8
Medios de cultivo y técnicas de siembra
Introducción
Las bacterias deben ser cultivadas en los medios correspondientes de
laboratorio para caracterizar su crecimiento, hacer su identificación y determinar sus
actividades metabólicas.
Las técnicas de aislamiento, permiten la obtención de microorganismos a partir
de muestras complejas (suelo, agua, alimentos, etc.) en las que hay gran diversidad
microbiana, así como comprobar la pureza de los cultivos obtenidos. Los cultivos puros
está formados por un solo tipo de microorganismo; y son indispensables para conocer
las características morfológicas, propiedades de tinción, actividad bioquímica,
patogenicidad, sensibilidad a antibióticos e identificación de las especies microbianas.
Objetivos

Conocer las diferentes técnicas de aislamiento en medios de cultivo sólido para
la obtención de cultivos puros de bacterias.

Conocer los medios de cultivo de uso general, diferenciales y selectivos.
Materiales de laboratorio por equipo
Material del equipo
2 Mecheros
Cinta adhesiva (masquin)
1 Asa bacteriológica en punta
Cerillos
1 Asa bacteriológica en aro
1 Plumón indeleble o lápiz graso
3 tubos de caldo nutritivo
Franela
3 Tubo con agar nutritivo
Colores
3 Cajas de Petri con agar nutritivo
Cloro
1 cajas de Petri con agar KTP
1 Cajas de Petri con EMB
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Actividad de la practica
Técnica de estría cruzada
1. En la parte posterior y exterior de la caja, dividirla en 4 cuadrantes. Tomar una
muestra con el asa previamente flameada y fría, inocular la muestra haciendo 45 estrías simples muy juntas de lado a lado sobre el primer cuadrante.
2. Flamear el asa de inoculación y hacer girara la caja Petri un cuarto de vuelta.
Abrir nuevamente la caja y enfriar el asa de siembra tocando la superficie del
medio lejos de la zona de estrías recién hechas.
3. Rozar con el asa una vez la superficie del conjunto original de estrías y hacer un
segundo grupo de estrías en el segundo cuadrante, esta vez mas separadas y
en una sola dirección.
4. Repetir el paso 2 y 3 para el tercer cuadrante (enfriar en el mismo lugar que el
anterior) y para el cuarto cuadrante no se flameará el asa, las estrías serán más
separadas o abiertas.
Siembra en tubos
1. Sembrar en los tubos de agar nutritivo (inclinados), con el asa previamente
esterilizada, realizando una pequeña estría desde abajo hasta el pico,
finalizando con una picadura en la base y en los tubos de agar nutritivo en forma
recta por picadura.
2. Incubar los tubos a 35  C durante 24 hrs.
3. Los tubos con caldo nutritivo se dejaran en agitación
Siembra de cajas de Petri con medios diferenciales y selectivos.
1. Dividir en tres partes, una caja de Petri con EMB y agar KTP, sembrar por estría
simple.
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2. Incubar a 35  C en forma invertida durante 24 hrs.
Resultados Recopilar la información de la caracterización colonial de cada cepa en el
cuadro de resultados.
Bacteria1
Aislamiento
estría
por
cruzada
(agar nutritivo)
Forma:
Bacteria 2
Sin inocular (3)
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Color
Tamaño(mm)
Borde
Superficie
Aspecto
Elevación
Luz transmitida
Luz reflejada
Consistencia
Medio EMB
Medio KTP
1
1
Siembra en medios
selectivos
y
diferenciales
2
2
3
Bacteria 1
Forma
Color
Tamaño
Tamaño(mm)
Borde
Superficie
Aspecto
Elevación
Luz transmitida
3
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Luz reflejada
Consistencia
Bacteria 2
Forma
Color
Tamaño
Tamaño(mm)
Borde
Superficie
Aspecto
Elevación
Luz transmitida
Luz reflejada
Consistencia
Nota: la descripción colonial puede hacerse considerando los siguientes criterios.
Forma: circular, irregular, filamentosa o rizoide
Borde: entero, lobulado, aserrado
Superficie: lisa o rugosa
Aspecto: húmeda, seca, butirosa
Elevación: convexa, plana, hundida
Luz transmitida: translúcida, opaca
Luz reflejada: brillante, mate
Consistencia: dura, blanda, mucoide
Bacteria1
Bacteria 2
Sin
inocular
Tubos inclinados de agar nutritivo:
Crecimiento: arborescente, filiforme,
rizoide, disperso, puntiforme.
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Color
Bacteria1
Bacteria 2
Sin
inocular
Tubos de caldo nutritivo
Crecimiento: superficie como película,
como sedimento, turbidez en todo el
tubo.
Color
Bacteria1
Bacteria 2
Sin
inocular
Tubos rectos de agar nutritivo
Crecimiento: en forma de película
superficial, a lo largo de la picadura,
solo en el fondo.
Color
Cuestionario
1. ¿Que es el agar y de donde se obtiene?, ¿cuáles son los nutrimentos
que proporciona a los microorganismos?
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2. ¿Cuál es la composición química de los medios EMB, KTP, MM?
3. ¿cuáles son los componentes o propiedades responsables de su
función como medios selectivos o diferenciales?
4. ¿Por qué el agar nutritivo es un medio de uso general para el cultivo
de bacteria? Proponga algunas sustancias que se le agregarían para
hacerlo selectivo para bacterias Gram negativas?
Fichas catolográficas del material bibliográfico sugerido que se encuentran en la
biblioteca de la UMAR
Ficha No. 2768
CLASIFICACION 571. 638293 M507
ISBN:
Título: Manual de Medios de Cultivos / Publicación patrocinada por MERCK
Autor:
Editorial: Alemania: E. MERCK, 1990
Descripción: 355 p.
TEMAS: 1. MICROBIOLOGIA - CULTIVOS - MANUALES \ 2. MICROBIOLOGIA
INDUSTRIAL - INDUSTRIA QUIMICO FARMACEUTICA - INVESTIGACION Y
MANUAL DE MICROBIOLOGÍA
DESARROLLO \ 3. MEDIOS DE CULTIVO GRANULADOS - PREPARACION CONSERVACION
Notas: Incluye referencias bibliográficas e índice
Ficha No. 1416
CLASIFICACION 616.014 M507p
ISBN: 968-7157-10-0
Título: Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia clínica /
Jean F. Mac Faddin, Irma Lorenzo trad.
Autor: Mac Faddin, Jean F.
Editorial: México : Médica Panaméricana, 1990
Descripción: 301 p.
TEMAS: 1. BACTERIOLOGIA - LABORATORIO, REACTIVOS DE - VIRUS \ 2.
MICROORGANISMOS - OBSERVACION - MANUAL \ 3. BACTERIAS IDENTIFICACION - LABORATORIO
Notas: Fotocopia de original