Download Practicas de Laboratorio de Biología de Procariotas

Practicas de Laboratorio Biología de Procariotas
PRACTICA 1
Medios de cultivo y técnicas de siembra
Introducción
Las bacterias deben ser cultivadas en los medios correspondientes de
laboratorio para caracterizar su crecimiento, hacer su identificación y
determinar sus actividades metabólicas.
Las técnicas de aislamiento, permiten la obtención de microorganismos
a partir de muestras complejas (suelo, agua, alimentos, etc.) en las que hay
gran diversidad microbiana, así como comprobar la pureza de los cultivos
obtenidos.
Los
cultivos
puros
está
formados
por
un
solo
tipo
de
microorganismo; y son indispensables para conocer las características
morfológicas, propiedades de tinción, actividad bioquímica, patogenicidad,
sensibilidad a antibióticos e identificación de las especies microbianas.
Objetivos

Conocer las diferentes técnicas de aislamiento en medios de cultivo
sólido para la obtención de cultivos puros de bacterias.

Conocer los medios de cultivo de uso general, diferenciales y selectivos.
Materiales de laboratorio por equipo
Material del equipo
2 Mecheros
Cinta adhesiva (masquin)
1 Asa bacteriológica en punta
Cerillos
1 Asa bacteriológica en aro
1 Plumón indeleble o lápiz graso
3 tubos de caldo nutritivo
Franela
3 Tubo con agar nutritivo
Colores
3 Cajas de Petri con agar nutritivo
Cloro
1 cajas de Petri con agar KTP
1 Cajas de Petri con EMB
Practicas de Laboratorio Biología de Procariotas
Actividad de la practica
Técnica de estría cruzada
1. En la parte posterior y exterior de la caja, dividirla en 4 cuadrantes.
Tomar una muestra con el asa previamente flameada y fría, inocular la
muestra haciendo 4-5 estrías simples muy juntas de lado a lado sobre el
primer cuadrante.
2. Flamear el asa de inoculación y hacer girara la caja Petri un cuarto de
vuelta. Abrir nuevamente la caja y enfriar el asa de siembra tocando la
superficie del medio lejos de la zona de estrías recién hechas.
3. Rozar con el asa una vez la superficie del conjunto original de estrías y
hacer un segundo grupo de estrías en el segundo cuadrante, esta vez
mas separadas y en una sola dirección.
4. Repetir el paso 2 y 3 para el tercer cuadrante (enfriar en el mismo lugar
que el anterior) y para el cuarto cuadrante no se flameará el asa, las
estrías serán más separadas o abiertas.
Siembra en tubos
1. Sembrar en los tubos de agar nutritivo (inclinados), con el asa
previamente esterilizada, realizando una pequeña estría desde abajo
hasta el pico, finalizando con una picadura en la base y en los tubos de
agar nutritivo en forma recta por picadura.
2. Incubar los tubos a 35  C durante 24 hrs.
3. Los tubos con caldo nutritivo se dejaran en agitación
Siembra de cajas de Petri con medios diferenciales y selectivos.
1. Dividir en tres partes, una caja de Petri con EMB y agar KTP, sembrar
por estría simple.
2. Incubar a 35  C en forma invertida durante 24 hrs.
Practicas de Laboratorio Biología de Procariotas
Resultados Recopilar la información de la caracterización colonial de cada
cepa en el cuadro de resultados.
Aislamiento
estría
Bacteria1
Bacteria 2
Medio EMB
Medio KTP
por
cruzada
(agar nutritivo)
Forma:
Color
Tamaño(mm)
Borde
Superficie
Aspecto
Elevación
Luz transmitida
Luz reflejada
Consistencia
Sin inocular (3)
Practicas de Laboratorio Biología de Procariotas
Siembra en medios
selectivos
y
1
1
diferenciales
2
3
Bacteria 1
Forma
Color
Tamaño
Tamaño(mm)
Borde
Superficie
Aspecto
Elevación
Luz transmitida
Luz reflejada
Consistencia
Bacteria 2
Forma
Color
Tamaño
Tamaño(mm)
Borde
Superficie
Aspecto
Elevación
2
3
Practicas de Laboratorio Biología de Procariotas
Luz transmitida
Luz reflejada
Consistencia
Nota: la descripción colonial puede hacerse considerando los siguientes criterios.
Forma: circular, irregular, filamentosa o rizoide
Borde: entero, lobulado, aserrado
Superficie: lisa o rugosa
Aspecto: húmeda, seca, butirosa
Elevación: convexa, plana, hundida
Luz transmitida: translúcida, opaca
Luz reflejada: brillante, mate
Consistencia: dura, blanda, mucoide
Bacteria1
Bacteria 2
Sin
inocular
Tubos inclinados de agar nutritivo:
Crecimiento: arborescente, filiforme,
rizoide, disperso, puntiforme.
Color
Bacteria1
Bacteria 2
Sin
inocular
Tubos de caldo nutritivo
Crecimiento:
superficie
como
película, como sedimento, turbidez
en todo el tubo.
Practicas de Laboratorio Biología de Procariotas
Color
Bacteria1
Bacteria 2
Sin
inocular
Tubos rectos de agar nutritivo
Crecimiento: en forma de película
superficial, a lo largo de la picadura,
solo en el fondo.
Color
Cuestionario
1. ¿Que es el agar y de donde se obtiene?, ¿cuáles son los
nutrimentos que proporciona a los microorganismos?
2. ¿Cuál es la composición química de los medios EMB, KTP,
MM?
3. ¿cuáles son los componentes o propiedades responsables de
su función como medios selectivos o diferenciales?
Practicas de Laboratorio Biología de Procariotas
4. ¿Por qué el agar nutritivo es un medio de uso general para el
cultivo de bacteria? Proponga algunas sustancias que se le
agregarían para hacerlo selectivo para bacterias Gram
negativas?
Fichas
catolográficas
del
material
bibliográfico
sugerido
que
se
encuentran en la biblioteca de la UMAR
Ficha No. 2768
CLASIFICACION 571. 638293 M507
ISBN:
Título: Manual de Medios de Cultivos / Publicación patrocinada por MERCK
Autor:
Editorial: Alemania: E. MERCK, 1990
Descripción: 355 p.
TEMAS: 1. MICROBIOLOGIA - CULTIVOS - MANUALES \ 2.
MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL - INDUSTRIA QUIMICO FARMACEUTICA INVESTIGACION Y DESARROLLO \ 3. MEDIOS DE CULTIVO GRANULADOS
- PREPARACION - CONSERVACION
Notas: Incluye referencias bibliográficas e índice
Ficha No. 1416
CLASIFICACION 616.014 M507p
ISBN: 968-7157-10-0
Título: Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia
clínica / Jean F. Mac Faddin, Irma Lorenzo trad.
Autor: Mac Faddin, Jean F.
Editorial: México : Médica Panaméricana, 1990
Descripción: 301 p.
TEMAS: 1. BACTERIOLOGIA - LABORATORIO, REACTIVOS DE - VIRUS \ 2.
MICROORGANISMOS - OBSERVACION - MANUAL \ 3. BACTERIAS IDENTIFICACION - LABORATORIO
Notas: Fotocopia de original