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EXPRESION TRANSITORIA DE GENES REPORTEROS
EN TIQUISQUE BLANCO Xanthosomasagittifolium
SCHOTT)
Nan~ Hidalgo
Doctorado en Sistemas de Produccion de Agricultura Sostenible
Francisco Saborio, Luis Gomez, Sergio Torres y Roberto Valverde
Centro de Investigaciones Agronomicas, Universidad de Costa Rica
JoseLuis Cabrera-Ponce
y Luis Herrera-Estrella
Departamento de Ingenieria Genetica de Plantas, Centro de Investigaci6n
Avanzados de! lPN, Unidad Irapuato, Mexico
y Estudios
El mejoramiento genCtico de tiquisque por metodos tradicionales presenta una serie de dificultades para
su desarrollo. El mismo se ha propagado, fundamentalmente por via vegetativa pero, a la vez, la
propagacion sexual presenta problemas como escasa floracion de la especie, bajos porcentajes de
fertilizacion y pobre viabilidad de lag semillas. Por 10tanto, resulta fundamental el desarrollo de tecnicas
altemativas de mejoramieno genetico que pennitan resolver problemas inherentes al cultivo. Es por ello
que se ban iniciado pruebas de transformacion de la especie por medio de biolistica.
El objetivo del presente trabajo file el establecimiento de un metodo eficiente de transformacion genetica
de tiquisque.
Se usaron callos embriogCnicos de tiquisque obtenidos mediante la metodologia descrita por Villalobos
(1994). Los callos se dividieron, 48 horas antes del bombardeo, y se colocaron en la parte central de
cajas de petri, que contenian 30 rnl del medio Murashige y Skoog (1962) con 0.1 mgiL de 2,4-D, 30 g/
L de azUcar y 1.8 giL de Gelrite (Merck) y un pH de 5.8 (Medio MT). Se usaron tres tratamientos para
el acondicionarniento de log callos: I. MT + Manitol 0.4 M.,
2. MT + sacarosa 12%, 3. MT. El
material se coloco en estos medios a la oscuridad, 24 h antes del bombardeo. Para el bombardeD se uso
el Sistema de Helio PDS-1OOOcon presion de helio de 800 psi, vacio parcial 0.07 atm, particulas de
tungsteno de 0.7 1Bn. El material vegetal file colocado a 5.8 cm de la malla retenedora. Se efectuaron
cinco sesiones de bornbardeo con cinco tratamientos (mezc lag de AD N): 1. gen de resistencia a herbicida
PPT, 2. gen de resistencia a higrornicina, 3. gen de resistencia a kanarnicina, 4. gen 1 + gen2, 5. gen I
+ gen 3, y un testigo sin bombardear. Ademas, se usaron hojas de tabaco como control positivo. Se
realizo el analisis de la expresion transitoria con x-Gluc, 48 h despues del bombardeo. La lectura de la
reaccion se efectuo 24 h despues del bombardeo.
El mayor nilmero de puntos azules se obtuvo en log tratamientos con preacondicionamiento en manitol
0.4M, seguido del tratamiento sin preacondicionarniento. De log ADN's usados, bubo mayor numero de
puntos azules en el material bombardeado con el gen de resistencia a higromicina y en el material
bombardeado con la combinacion de genes de resistencia a PPT y a higromicina. En el material
bombardeado con el gen de resistencia a kanarnicina se obtuvo el menor nilmero de puntos azules. De
lag combinaciones de tratamientos se logro un mayor nilmero de puntos azules en el material con el
tratamiento que incluia el bombardeo con el gen de resistencia a PPT que habia sido preacondicionado
con manitol en el medio, asi como en el material bombardeado con el gen de resistencia a higromicina
que se encontraba en un medio MT. El nilmero de puntos azules tambien file importante en el material
bombardeado con el gen de resistencia a higrornicina que file preacondicionado con manitoI en el
medio.
Los resultados obtenidos a la fecha indican que esposible reaIizar transformaciones de callos de tiquisque
usando biolistica. El desarrollo de procedirnientos de ingenieria genCtica en la especie permite iniciar
sistemas alternativos de mejoramiento.
PALABRAS CIA VES: Xanthosoma sagittifolium, expresiOntransitoria, ingenierla genetiCG
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XI CongresoNacional Agronomico1999