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ESPAÑOL Thermo Scientific™ Richard-Allan Scientific Chromaview® – Tinción Avanzada Tinción de Gram Tejido Instrucciones de uso Discusión técnica Comentarios técnicos Microtomía Cortar secciones a 4-6 micrones. Fijación Sin requisitos especiales; la fijación en formalina es adecuada. Si se producen precipitaciones en la Solución de Violeta Genciana, colóquela en una estufa caliente (aproximadamente 35° C) y agite. La Solución de yodo de Gram puede mostrar una reducción de potencia con el tiempo. Probable modo de acción Las bacterias se pueden clasificar en dos familias según el grosor de la pared celular, compuesta de peptidoglucano. Las bacterias gram positivas tienen una pared celular gruesa de peptidoglucano. Las bacterias gram negativas tienen una pared celular delgada de peptidoglucano. Tanto las bacterias gram negativas como gram positivas se tiñen con el colorante-laca creado por la tinción violeta cristal y el mordiente de yodo. Sin embargo, durante el aclarado con la solución decolorante, el colorante-laca es eliminado completamente de la delgada bacteria gram negativa. La pared celular se contrateñirá con la solución de tinción Safrina O. La corta duración del aclarado con la solución decolorante permite que el colorante-laca permanezca dentro de la pared celular, más gruesa, de las gram positivas. Tenga cuidado al aclarar el portaobjetos con la solución decolorante. Un aclarado amplio con la solución decolorante puede hacer que el colorante-laca cristal violeta salga de la gruesa pared celular de las bacterias gram positivas así como de la de las gram negativas. Los elementos tisulares se contratiñen con un colorante amarillo, tartracina. Procedimiento técnico Protocolo de coloración estándar 1. Desparafinar e hidratar secciones con agua desionizada. 2. Teñir las secciones en Solución de Violeta Genciana durante 1 minuto. 3. Enjuagar las secciones en agua corriente durante 1 minuto. 4. Colocar las secciones en Solución de Yodo de Gram durante 5 minutos. 5. Enjuagar las secciones en agua corriente durante 30 segundos. 6. Diferenciar las secciones en solución descolorante. 7. Enjuagar las secciones en agua corriente durante 30 segundos. 8. Enjuagar las secciones en Solución colorante de Safranina O durante 30 segundos. 9. Enjuagar las secciones en agua corriente durante 30 segundos. 10. Colorear las secciones en Solución colorante de Tartrazina durante 20 segundos. 11. Deshidratar los cortes con dos cambios de alcohol absoluto durante 1 minuto cada uno. 12. Aclarar los cortes con tres cambios de reactivo aclarante durante 1 minuto cada uno y proceder al montaje. Referencias 1. Bancroft, J.D. y Stevens, A. Theory and Practice of Histological Techniques. Churchill Livingstone, Nueva York, NY, 1977. 2. Sheehan, D.C. y Hrapchak, B.B. Theory and Practice of Histotechnology, 2a Edición. Mosby, St. Louis, MO, 1980. 3. Thompson, C.C. Selected Histochemical and Histopathological Methods. Springfield, IL, 1966. 4. Lillie, R.D. H.J. Conn’s Biological Stains. Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 1972. Resultados Información para pedidos Fibras elásticas – Negro Organismos Gram positivos – Azul Organismos Gram negativos – Rojo Fondo – Amarillo Producto Tamaño Cant.REF. Kit de tinción de Gram - Tejido 1 Kit 1 87018 Solución colorante de Tartrazina 500ml 1 88012 Solución de Violeta Gensiana 500ml 1 88101 Solución de Yodo de Gram 500ml 1 88102 Solución colorante Safranina O 500ml 1 88103 Solución descolorante 500ml 1 88104 Análisis Todos los reactivos de tinción se deben almacenar a temperatura ambiente. Los reactivos de tinción Gram son para uso “in vitro” solamente. Para información sobre salud y seguridad, consulte la Hoja de datos de seguridad de materiales. Todos los reactivos son estables y no deberían formar precipitantes con parámetros de almacenamiento normales. Se recomienda desechar la Solución de Yodo de Gram y la Solución de descoloración después del uso. La Solución de Violeta Genciana, la Solución colorante de Safranina O y la Solución colorante de Tartrazina se pueden filtrar y volver a usar si se lo desea. Los colorantes no se deben diluir ya que están listos para el uso. Todos los colorantes usados en estas formulaciones han sido certificados por la Biological Stain Commission. ©2013 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. All trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific Inc. and its subsidiaries. Anatomical Pathology IS87018ES R4/13 Richard-Allan Scientific Subsidiary of Thermo Fisher Scientific 4481 Campus Drive, Kalamazoo, MI 49008 Phone: 1 (800) 522-7270 Phone: + 1 (269) 544-5600 www.thermoscientific.com/pathology Thermo Shandon Limited Subsidiary of Thermo Fisher Scientific Tudor Road, Manor Park, Runcorn, Cheshire WA7 1TA, UK Phone: +44 (0) 1928 534 050 Fax: + 44 (0) 1928 534 049
