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ESPAÑOL Thermo Scientific™ Richard-Allan Scientific Chromaview® – Tinción Avanzada Tinción de Gram Extensión Instrucciones de uso Análisis técnico Probable modo de acción Preparación Frotis de única capa sobre portaobjetos de vidrio limpio. Fijación Impregnación del portaobjetos con metanol absoluto o fijación por calor con llama. Control de calidad Se recomienda el uso de un portaobjeto de control con organismos Gram positivos y organismos Gram negativos conocidos. Las bacterias se pueden clasificar en dos familias según el grosor de la pared celular, compuesta de peptidoglucano. Las bacterias gram positivas tienen una pared celular gruesa de peptidoglucano. Las bacterias gram negativas tienen una pared celular delgada de peptidoglucano. Tanto las bacterias gram negativas como gram positivas se tiñen con el colorante-laca creado por la tinción violeta cristal y el mordiente de yodo. Sin embargo, durante el aclarado con la solución decolorante, el colorante-laca es eliminado completamente de la delgada bacteria gram negativa. La pared celular se contrateñirá con la solución de tinción Safrina O. La corta duración del aclarado con la solución decolorante permite que el colorante-laca permanezca dentro de la pared celular, más gruesa, de las gram positivas. Tenga cuidado al aclarar el portaobjetos con la solución decolorante. Un aclarado amplio con la solución decolorante puede hacer que el colorante-laca cristal violeta salga de la gruesa pared celular de las bacterias gram positivas así como de la de las gram negativas. Procedimiento técnico Protocolo de tinción estándar 1. Colocar el frotis en una solución de Violeta Cristal durante 1 minuto. Paso opcional: Agregar 5 gotas de una solución de Bicarbonato de Sodio al frotis para mejorar la retención del violeta cristal. 2. Enjuagar el exceso de tinción con agua desionizada durante 30 segundos. 3. Colocar el frotis en una solución de Yodo de Gram durante 1 minuto. 4. Enjuagar el exceso de tinción con agua desionizada durante 30 segundos. 5. Diferenciar el frotis con la solución decolorante. 6. Enjuagar con agua desionizada durante 30 segundos. 7. Colocar el frotis en una solución de tinción de Safranina O durante 1 minuto. 8. Enjuagar el exceso de tinción con agua desionizada durante 30 segundos. 9. Secarel portaobjetos con papel absorbente. 10. Examinar con microscopio. Referencias 1. Bancroft, J.D. y Stevens, A. Theory and Practice of Histological Techniques. Churchill Livingstone, New York, NY, 1977. 2. Volk, W.A. Essentials of Medical Microbiology. J.B. Lippincott Company, Philadelphia, PA, 1982. 3. Manual of Clinical Microbiology of the American Society for Microbiology, 30-45: 1970. 4. Hucker G.J. y Conn, H.J. Further Studies on the Methods of Gram Staining. NY Agric Exp Stain Technology Bulletin. No. 128, 1927. 5. Cutlin, B.W. 1975. Cellular Elongation Under the Influence of Antibacterial Agents: Way to Differentiate Coccobacilli from Cocci. J. Clin, Micro 1:102-105. Información para pedidos Producto Tamaño Cant.Ref. Kit de tinción de Gram (Extensión) 1 Kit 1 87101 Solución de Violeta Cristal 500 ml 1 88101 Solución de Yodo de Gram 500 ml 1 88102 Organismos Gram positivos: Azul Organismos Gram negativos: Rojo Solución de tinción de Safranina O 500 ml 1 88103 Solución decolorante 500 ml 1 88104 Análisis Solución de Bicarbonato de Sodio 8 ml 2 un 88116 Resultados Todos los reactivos de tinción deben almacenarse a temperatura ambiente. Los reactivos de tinción de Gram son solo para uso “In Vitro”. Consulte las Hojas de datos de seguridad de los materiales para conocer la Información de salud y seguridad. Todos los reactivos son estables y no deben formar precipitados de aplicarse los parámetros de almacenamiento habituales. Estas tinciones no deben diluirse; están listas para su uso. Todos los colorantes utilizados en estas formulaciones están certificados por la Biological Stain Commission. Comentarios técnicos De ocurrir una precipitación en la solución de Violeta Cristal, colóquela en una estufa (aproximadamente 35 °C) y agite. La solución de Yodo de Gram puede demostrar una disminución en la potencia con el tiempo. La muestra obtenida es estable indefinidamente. Cuando se realizan tinciones de Gram con un medio de cultivo, uno debe considerar la edad del cultivo. Esto puede afectar el grado de tinción positiva de Gram. Los tratamientos antibacterianos también pueden afectar la tinción positiva de Gram. Se debe tener cuidado porque lo más probable es que se produzca una decoloración en exceso. ©2013 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. All trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific Inc. and its subsidiaries. Anatomical Pathology IS87101ES R4/13 Richard-Allan Scientific Subsidiary of Thermo Fisher Scientific 4481 Campus Drive, Kalamazoo, MI 49008 Phone: 1 (800) 522-7270 Phone: + 1 (269) 544-5600 www.thermoscientific.com/pathology Thermo Shandon Limited Subsidiary of Thermo Fisher Scientific Tudor Road, Manor Park, Runcorn, Cheshire WA7 1TA, UK Phone: +44 (0) 1928 534 050 Fax: + 44 (0) 1928 534 049
