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VIII Congreso Virtual Hispanoamericano
de Anatomía Patológica — Octubre de 2006
Ana Mancha Oraá
David Guerrero Setas
Nerea Círez Irisarri
Cristina Bértolo Martín
Mª Cristina Caballero Martínez
Antonio Tarifa Castilla (*)
Enrique Balen Rivera (*)
Ruth Vera García (***)
José Mª Martínez Peñuela (**)
José Miguel Lera Tricas (*)
Centro de Investigación Biomédica
Servicio Navarro de Salud
Pamplona, Navarra, España
(*) Cirugía General y Digestiva
(**) Anatomía Patológica
(***) Oncología
Hospital de Navarra
Pamplona, Navarra, España
Correspondencia:
Dra. Ana Mancha Oraá
Centro de Investigación Biomédica
C/Irunlarrea 3. 31008 Pamplona.
Navarra, España
Telf: +34 848 422 186
Fax: +34 848 422 200
E-mail: [email protected]
http://conganat.cs.urjc.es
Patología Molecular
Metilación del gen TSLC1 en asociación con variables
anatomopatológicas y moleculares en cáncer de
colon esporádico
El silenciamiento del gen TSLC1 debido a la hipermetilación de su promotor y a pérdidas alélicas de la región 11q23.2 parece asociarse con la
metástasis en diversos tipos de cáncer. Se estudia la asociación entre la hipermetilación de TSLC1 y variables anatomopatológicas y moleculares en
pacientes con cáncer de colon esporádico, obteniéndose un porcentaje de casos metilados del 34.7 %. La alteración epigenética del gen TSLC1 aparece
de forma precoz en los estadios iniciales de la progresión tumoral y la falta
de adhesión celular no parece asociarse con la tendencia a la metástasis o las
alteraciones de genes implicados en la progresión tumoral. Esta alteración
es un fenómeno frecuente en cáncer de colon esporádico y es independiente
de variables asociadas con la agresividad tumoral.
Palabras clave: cáncer de colon; TSLC1, metilación, mutación
TSLC1 gene silencing, due to its promoter hypermethylation and loss of
heterozygosity at 11q23.2 region, seems to be associated with metastasis in
various types of cancer. We studied the association between the TSLC1 promoter hypermethylation and pathological and molecular features in pacients
with sporadic colon cancer, obtaining a percentage of methylated cases of
34.7%. The TSLC1 gene epigenetic alteration occurs in tumors in the early
stages and the lack of cellular adhesion does not seem to be associated with
metastasis or alterations in genes implicated in tumor progression. This alteration is a very common event in sporadic colon cancer and it is not related
with tumor aggressiveness.
Keywords: colon cancer; TSLC1; methylation; mutation
INTRODUCCIÓN
TSLC1/IGSF4 (tumor suppressor in lung cancer-,
IGSF4) es un gen localizado en la región 11q23.2 que
codifica para una molécula de adhesión celular de la familia de las inmunoglobulinas (IgCAM). Esta proteína
de membrana participa en la regulación de la entrada de
señales de transducción a la célula, lo cual le otorga un
papel importante en la oncogénesis como gen supresor
de tumores en cáncer (1).
La ausencia de expresión del gen TSLC1 se origina por
la hipermetilación del promotor del gen y las pérdidas
alélicas de la región 11q23.2. En el presente trabajo se
estudia la asociación entre la hipermetilación de TSLC1
y variables moleculares (mutaciones de los genes p53
y k-ras) y variables anatomopatológicas (estadio, grado
histológico, localización tumoral y metástasis a distancia) en pacientes con cáncer de colon esporádico.
PACIENTES Y MÉTODOS
Se considera una población de estudio de 98 pacientes
con cáncer de colon esporádico, sin terapia neoadyuvante. Los tumores se localizaron en colon derecho (46 %)
y en colon izquierdo (54 %). La distribución de estadios
fue 11 tumores de estadio I (11.2 %), 54 tumores de estadio II (55.1 %), 18 de estadio III (18.3 %) y 15 tumores de estadio IV (15.3 %). El 20 % de casos presentaban un contenido mucinoso superior al 20 %, y el 9.5 %,
y 90.5 % tenían grado histológico 1 y 2-3, respectivamente. Tras el diagnóstico histológico de las muestras se
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procede a la extracción de ADN para su análisis. Para el
estudio de metilación del promotor del gen de TSLC1 se
utiliza la técnica de PCR específica de metilación (Methylation specific PCR, MS-PCR) (2). El ADN se somete a una modificación química con bisulfito sódico lo
cual supone una transformación química de las citosinas
no metiladas del promotor del gen a uracilos. Una vez
preparado el ADN se realiza una PCR empleando cebadores específicos para secuencia metilada y desmetilada. Para la reacción desmetilada se utilizan los siguientes cebadores: 5’GGGGAGGGAGTGAGGTTTTTT3’
(cebador sentido) y 5’CTACCTCCAAAACCCAAACAAAC3’ (cebador antisentido); y para la reacción metilada: 5’GGGAGGGAGCGAGGTTTTTC3’ (cebador
sentido) y 5’CTACCTCCGAAACCCGAACG3’ (cebador antisentido). Las mutaciones del gen supresor p53 y
del oncogen k-ras se analizan mediante PCR-SSCP (Single Strand Conformation Polymorphism). Esta técnica se
basa en la capacidad de detectar diferentes conformaciones del ADN según su secuencia. Estas diferencias se
observan comparando las muestras tumorales con una
muestra de mucosa normal obtenida del mismo paciente.
Las comparaciones en las distribuciones de las variables se realizaron mediante el test γ 2 o el test exacto
de Fisher, mediante el programa estadístico SPSS (versión 16.0, Inc., Chicago, USA), considerando un nivel
de confianza del 95 %.
dicho gen está inactivado debido a la hipermetilación del
promotor del gen en porcentajes variables. Este silenciamiento se ha descrito en un porcentaje del 44 % de casos con cáncer de pulmón de célula no pequeña (3,4),
33 % en cáncer de mama (5), 65 % en líneas celulares
de cáncer de cérvix (6), 34.2 % en líneas celulares de
carcinoma nasofaríngeo (NPCs) (7), 16 % en tumor gástrico primario (8), entre otros. Se han publicado también
resultados del 27 % de casos metilados en cáncer pancreático (9), 29 % en carcinomas hepatocelulares (3) y
32 % en cáncer de próstata (10).
Su silenciamiento parece asociarse con la agresividad de
los tumores, incluyendo invasión y metástasis en diversos tipos de cáncer, como el de pulmón (3).
En este trabajo se ha demostrado que la hipermetilación
del gen TSLC1 es un fenómeno frecuente en cáncer de
colon esporádico (34.7 %). Asimismo la alteración epigenética del gen TSLC1 aparece de forma precoz en los
estadios iniciales de la progresión tumoral, tal y como
ocurre con el gen CHFR en cáncer esofágico y pancreático (11). La falta de adhesión celular no parece asociarse con la tendencia a la metástasis o las alteraciones de
genes implicados en la progresión tumoral. Por tanto esta alteración es un fenómeno frecuente en cáncer de colon esporádico y es independiente de variables asociadas
con la agresividad tumoral.
REFERENCIAS
RESULTADOS
La hipermetilación del gen TSLC1 es un fenómeno frecuente en cáncer de colon (34.7 %), e independiente de
la edad de los pacientes (p=0.34). Se detecta igualmente en colon derecho e izquierdo (P=0.54), en todos los
estadios (P=0.373), grado histológico (P=0.76) y no se
asocia con las mutaciones de p53 (P= 0.94) y k-ras (P=
0.51), presentes en el 34.3 % y 36,4 % de los pacientes,
respectivamente. Es más frecuente en los pacientes sin
metástasis hepática (37.8 % de casos metilados), frente
a los pacientes con metástasis (18.8 % de casos metilados), aunque sin valor significativo de probabilidad asociada.
DISCUSIÓN
TSLC1/IGSF4 es un gen supresor de tumores que se expresa en la mayoría de tejidos a excepción de los linfocitos de sangre periférica (1). En varios tipos de cáncer
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1. Murakami Y. Involvement of a cell adhesion molecule,
TSLC1/IGSF4, in human oncogenesis. Cancer Sci 2005;
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2. Esteller M, Hamilton SR, Burger PC et al. Inactivation of
the DNA repair gene O6-methylguanine-DNA methyltransferase by promoter hypermethylation is a common event in
primary human neoplasia. Cancer Res 1999; 59:793-7.
3. Fukami T, Fukuhara H, Kuramochi M, et al. Promoter methylation of the TSLC1 gene in advanced lung tumors and
various cancer cell lines. Int J Cancer 2003; 107: 53-9.
4. Kikuchi S, Yamada D, Fukami, T et al. Hypermethylation
of the TSLC1/IGSF4 promoter is associated with tobacco
smoking and a poor prognosis in primary nonsmall cell lung
carcinoma. Cancer 2006; 106:8.
5. Allinen M, Peri L, Kujala S et al. Analysis of 11q21-24 loss
of heterozygosity candidate target genes in breast cancer: indications of TSLC1 promoter hypermethylation. Genes Chromosomes Cancer 2002; 34:384-9.
6. Li J, Zhang Z, Bidder M et al. IGSF4 promoter methylation
and expression silencing in human cervical cancer. Gynecol
Oncol 2005; 96:150-158.
7. Hui AB, Lo KW, Kwong J et al. Epigenetic inactivation of
TSLC1 gene in nasopharyngeal carcinoma. Mol Carcinog
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2003; 38:170-8.
8. Honda T, Tamura G, Waki T et al. Hypermethylation of the
TSLC1 gene promoter in primary gastric cancers and gastric
cancer cell lines. Jpn J Cancer Res 2002; 93(8): 857-60.
9. Murakami Y. Functional cloning of a tumor suppressor gene, TSLC1, in human non-small cell lung cancer. Oncogene
2002; 21: 6936-48
10. Fukuhara H, Kuramochi M, Fukami T et al. Promoter methylation of the TSLC1 and tumor suppression by its gene
product in human prostate cancer. Jpn J Cancer Res 2002;
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11. Morioka Y, Hibi K, Sakai M et al. Aberrant methylation
of the CHFR gene in digestive tract cancer. Anticancer Res
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ICONOGRAFÍA
1.1
1.2
1.3
Figura 1.- Ejemplos de carcinomas de colon bien (Fig. 1.1), medianamente (Fig. 1.2.) y poco diferenciado (Fig. 1.3.)
(H&E, 200x) .
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Figura 2.- Estudio de mutaciones de p53: El caso 5 presenta una mutación y el caso 11 es normal (N: Mucosa
normal; T: Tumor).
Figura 3.- Ejemplo de inmunohistoquímica de p53, en el que se observa acumulación nuclear de proteína (200x).
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Figura 4.- Caso con mutación del codón 12 del oncogen K-ras: (cambio aminoacídico Glicina-Arginina) (N: Mucosa
normal; T: Tumor).
Figura 5.- Imagen de metilación de TSLC1: caso 1 y 3 no metilados y caso 2 metilado.
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