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METODOS DE ESTUDIO DE
LA CELULA
PROFESOR JUAN FERNANDEZ
2011
DIAGRAMA DE UNA CELULA EUCARIOTICA
Alberts et al., 2002
RELACIONES DE MAGNITUD ENTRE
COMPONENTES VISIBLES, CELULARES Y
ATOMOS
Alberts et al., 2002
PODER DE RESOLUCION DEL OJO Y
DE DIFERENTES MICROSCOPIOS
Alberts et al, 2002
EL MICROSCOPIO OPTICO
Alberts et al., 2003
FIBROBLASTO OBSERVADO CON DIFERENTES
TIPOS DE MICROSCOPIA OPTICA
MICROSCOPIO DE CAMPO CLARO
MICROSCOPIO DIC O NOMARSKI
Alberts el al., 2002
MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES
MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO
CELULAS NERVIOSAS TEÑIDAS
Maximow y Bloom, 1957
COMPORTAMIENTO DE LA LUZ EN OBJETOS DE
AMPLITUD Y DE FASE
Objeto de amplitud
Alberts et al., 2002
Objeto de fase
INTERFERENCIA ENTRE ONDAS LUMINOSAS
Interacciones constructivas
Alberts et al., 2002
Interacciones destructivas
EFECTO DE INTERFERENCIA DE LUZ
EN BORDES
Disco de Airy
“Point spread function”
Alberts et al., 2002
RESOLUCION Y APERTURA NUMERICA
Interfase condensador/objetivo
Alberts et al., 2002
COMPONENTES DE UN PROCESADOR
DE IMAGENES
Sluder y Wolf, 1998
RESOLUCION ESPACIAL DE UNA CAMARA
DE VIDEO
Sluder y Wolf, 1998
IMAGEN DIGITAL MOSTRANDO PIXELES CON
DISTINTOS VALORES DE GRIS
Sluder y Wolf, 1998
DESCONVOLUCION DE UNA IMAGEN:
CROMOSOMAS POLITENICOS
Antes
Alberts et al., 2002
Después
MANEJO DIGITAL DEL CONTRASTE EN UN
TROZO DE MUSCULO ESTRIADO
Sluder y Wolf, 1998
PSEUDOCOLORACION (PURPURA) DE CANALES DE
TRANSPORTE EN EL
CITOPLASMA DEL ZIGOTO DEL PEZ CEBRA
Fuentes and Fernández, 2010
MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA
Alberts et al., 2002
FLUOROFOROS Y SUS ESPECTROS
DE ABSORCION Y EMISION
Alberts et al., 2002
DNA NUCLEAR TEÑIDO CON LA SONDA FLUORESCENTE
DAPI. PRONÚCLEOS DEL ZIGOTO DEL PEZ CEBRA
Fuentes y Fernández, 2010
INMUNOFLUORESCENCIA SIMPLE, DOBLE O
TRIPLE Y AMPLIFICACION DE LA SEÑAL
FLUORESCENTE
Simple
Triple
Renshaw, 2007
Doble
Amplificación
MULTIFLUORESCENCIA DE UN HUSO
MITOTICO CUYOS COMPONENTES SE HAN
REVELADO POR INMUNOCITOQUIMICA
AZUL: CROMOSOMAS
ROJO: CENTROMEROS
VERDE: MICROTUBULOS
Alberts et al., 2002
DOBLE IMMUNOFLUORESCENCIA (MICROTUBULOS
Y ACTINA) EN ZIGOTOS DE LA SANGUIJUELA
Rojo: Actina
VISTA ANIMAL
Verde: Microtúbulos
Amarillo y anaranjado:
codistribución
Proyección: sobreposición de imágenes
en el eje Z
Fernández et al., 2002
VISTA VEGETAL
TRIPLE INMUNOFLUORESCENCIA EN EL TUBO
NEURAL DE LA LARVA DEL PEZ CEBRA
Azul = núcleos
Verde = microtúbulos
Rojo = Actina
Amarillo = codistribución
Azul = núcleos
Rojo = β-catenina
Verde = microtúbulos
Amarillo/anaranjado =
codistribución
Capa matríz y manto
Cavidad central, capa matríz
y manto
Manuscrito en preparación. Laboratorio Juan Fernández
VISUALIZACION DE CALCIO LIBRE CON FURA2
EN UNA CELULA DE PURKINGE DEL CEREBELO
ROJO. MUCHO CALCIO
AMARILLO: MENOS CALCIO
AZUL: MUCHO MENOS CALCIO
Alberts et al., 2002
RECUPERACION DE LA FLUORESCENCIA
DESPUES DE UN FOTO BLANQUEADO (FRAP) DE
LA PROTEINA VERDE UNIDA A LA GLICOSIL
TRANSFERASA EN LA ZONA DEL GOLGI
Blanco
Testigo
Alberts et al., 2008
FOTOACTIVACION CON UNA LASER
ULTRAVIOLETA (413 nm) DE UNA VARIANTE DE
LA PROTEINA VERDE DE UNA CELULA EN
CULTIVO
Difusion de la señal
Alberts et al., 2008
HIBRIDACIÓN in situ QUE MUESTRA LA
DISTRIBUCIÓN DE DOS RNAm EN EL ZIGOTO
(bicoide) Y BLASTULA (knirps) de DROSOPHILA
RNAm de
bicoide producido
por un gen de
coordinación
P
A
RNAm de
knirps producido
por un gen gap
P
A
Publicación en preparación. Laboratorio de J. Fernández
HIBRIDACION IN SITU PARA LOCALIZAR DNA o
RNA UTILIZANDO SONDAS FLUORESCENTES
CADA CROMOSOMA HOMOLOGO
TIENE
UNA DOBLE HELICE Y POR
LO TANTO DOS GENES
DETECCION DEL
RNAm DEL GEN
DELTA C (LIGANDO)
EN LOS
SOMITOS DEL
PEZ CEBRA
Alberts et al., 2002
DETECCION DE 6 PARES DE
GENES
EN LOS CROMOSOMAS
HOMOLOGOS No5 HUMANOS
DETECCION DE
SITIOS (GENES) DE
TRANSCRIPCION
DE RNAr (BRILLANTE)
EN EL NUCLEOLO
HIBRIDACION in situ PARA DETECTAR LA
DISTRIBUCION DE CINCO RNA EN UN
EMBRION DE DROSOPHILA
Amarillo= wingless
Azul= engrailed
Rojo= short gastrulation
Verde= defecto en los neuroblastos intermedios
Púrpura= homeobox específico de músculo
Alberts et al., 2002
INTRODUCCION DE SUSTANCIAS EN UNA
CELULA
MICROINYECCION
ELECTRO SHOCK
FUSION DE EMBRANAS
BOMBARDEO CON ORO
PERMEABILIZACION
DETERGENTES
Alberts et al., 2008
SISTEMA OPTICO PARA MICROSCOPIA DIC
Sluder y Wolf, 1998
MICROFOTOGRAFIA AVEC-DIC DE UN CENTRO
NUCLEADOR DE MICROTUBULOS
Centrosoma y microtúbulos
Sluder y Wolf, 1998
Estructura
de los micotúbulos
MANIPULACION DE OBJETOS MICROSCOPICOS
(BOLITAS DE SILICIO RECUBIERTAS DE KINESINA)
CON PINZAS OPTICAS (LASER)
BOLITA DE 0,2 NM
Alberts et al., 2008
MICROTUBULOS
PREPARACION DE REPLICAS METALICAS DE
LA SUPERFICIE DE UNA MUESTRA BIOLOGICA
La muestra
Sombreado con metal
Cubierta de carbón
Disolución de la muestra
Réplica final
Alberts et al., 2008
CELULAS EN CULTIVO
FIBROBLASTO
MIOBLASTOS Y MIOTUBOS
Alberts et al, 2002
OLIGODENDROCITOS
MICROTOMIA
Alberts et al., 2002
RECONSTRUCCION DE CORTES FISICOS U
OPTICOS
Alberts et al., 2002
EL MICROSCOPIO CONFOCAL
Alberts et al., 2002
MICROSCOPIA CONVENCIONAL (A) Y CONFOCAL
(B) DE CELULAS DE LA GASTRULA DE UN INSECTO
MOSTRANDOLA DISTRIBUCION DE ACTINA
Actina
cortical
Alberts et al., 2002
INMUNOFLUORESCENCIA DOBLE DE UN
ZIGOTO DE SANGUIJUELA. CORTE OPTICO EN
EL MICROSCOPIO CONFOCAL
Actina: rojo
Microtúbulos: verde
Fernández et al., 2004
Anillo polar y
bandas meridionales
MICROSCOPIA CONFOCAL: CORTES OPTICOS
Y SECCIONES ORTOGONALES DE UN ZIGOTO
DE LA SANGUIJUELA INMUNOTEÑIDO
X----X
Y----Y
Actina: rojo
Microtúbulos: verde
Y----Y
X----X
Fernández et al., 2004