Download tesis_uam/Las Lipazas como catalizador para la produccion de

MICRO BIOTECH
Ejercicio 5
Actividades Bioquímicas
En Bacterias
Objetivos
•
•
•
Entender los procesos bioquímicos de distintas reacciones enzimáticas como
son las fermentaciones e hidrólisis.
Describir el patrón de las reacciones producidas por los microorganismos.
Determinar cuales son los productos de metabolismo asociados a los
substratos y microorganismos seleccionados para este ejercicio.
Introducción
Las bacterias completan varias actividades bioquímicas usando los nutrientes que el
ambiente les ofrece. Las transformaciones bioquímicas que ocurren dentro y fuera de
la célula y son mediadas por las enzimas. En este ejercicio se observarán tales
actividades bioquímicas en bacterias y se observará la habilidad de las mismas para
degradar carbohidratos, lípidos, proteínas y aminoácidos. Una vez las bacterias
realizan estas actividades de degradación, los organismos liberan productos que
pueden ser utilizados para su caracterización o para la confección y producción de
materiales y alimentos.
Procedimiento
Fermentación de Carbohidratos
Las fermentaciones son reacciones bioquímicas que producen energía en las cuales
las moléculas orgánicas sirven como aceptadores y donadores de electrones. Los
productos de la fermentación son alcoholes, ácidos, gases y otras moléculas
orgánicas. Los medios para la realización de pruebas de fermentación de hidratos de
carbono son a menudo preparados en tubos con caldo. Cada tubo contiene un
pequeño tubo invertido llamado Durham, el cual captura cualquier gas formado
cuando el caldo es inoculado. Cada caldo contiene nutrientes esenciales como: un
hidrato de carbono y el rojo fenol para indicar el cambio en pH.
Prueba con tubos Durham
Primer Periodo
1. Rotula los tubos con tu nombre, nombre del organismo, fecha y tipo de medio de
cultivo.
2. Usando una técnica aséptica inocula cada tubo (lactosa, sucrosa y glucosa) con el
microorganismo asignado.
3. Coloca los tubos a 35°C de 24 – 48 horas.
Preparado por: Francisco J. Rivera-Figueroa
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Segundo Periodo
1. Al cabo de las 24 -48 horas examina los tubos y anota en la sección de reporte la
presencia de ácido (cambio de rojo a amarillo) o gas (burbujas atrapadas en el
tubo Durham).
Hidrólisis de Almidón
Muchas bacterias producen enzimas llamadas hidrolasas. Estas catalizan el
rompimiento de moléculas orgánicas en unas más simples en presencia de agua. El
almidón es un ejemplo de estas moléculas, donde las enzimas (α- Amilasa) actúan
en su rompimiento.
Almidon [Amilosa + Amilopectina] α
-amilasa

→ Dextrina + Maltosa + Glucosa
Primer Periodo
1. Divide una palca con Starch Agar en dos con un marcador permanente. Rotula
cada lado con las bacterias que se asignen.
2. Usando una técnica aséptica transfiere las bacterias a cada porción de las placas
dibujando una sola línea derecha.
3. Incuba la placa 24 – 48 horas a 35°C.
Segundo periodo
1. Coloca en la placa varias gotas de Yodo Gram (en cada línea de bacterias). Si
alrededor de la línea esta claro, es que el almidón se ha hidrolizado en esa
porción de la placa.
2. Anota tus resultados en la sección de reporte.
Hidrólisis de lípidos
Los lípidos son compuestos de alto peso molecular los cuales poseen grandes
cantidades de energía almacenada. Las lipazas son las encimas que hidrolizan los
lípidos en moléculas más simples como glicerol y ácidos grasos. Cuando los lípidos
son añadidos a agar solidificado los microorganismos pueden hidrolizar el mismo en
el laboratorio. La hidrólisis se puede detectar añadiendo indicadores de pH al medio
de cultivo.
Primer Periodo
1. Divide una placa con Spirit Blue Agar con un marcador permanente. . Rotula cada
lado con las bacterias que se asignen.
2. Coloca las bacterias en cada lado asignado. Inocula las mismas en forma de
punto.
3. Incuba la placa 24 – 48 horas a 35°C.
Preparado por: Francisco J. Rivera-Figueroa
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Segundo periodo
1. Examina la evidencia de hidrólisis observando la zona alrededor de la colonia. Se
forma un color azul alrededor de la colonia cuando hay hidrólisis. Si no hay
reacción el color lavanda se mantiene en la placa.
2. Mide la zona de inhibición con una regla y anota los resultados en la sección de
reporte.
Prueba Litmus Milk e hidrólisis de caseína
La caseína es una larga porción de la leche que no puede penetrara la membrana
plasmática de las bacterias y que esta presente en la leche. Las bacterias degradan
la proteína en aminoácidos utilizando enzimas proteolíticas las cuales catalizan la
hidrólisis de caseína. Litmus Milk es un medio versátil y a veces confuso porque hay
muchas reacciones que se pueden obtener de el. El indicador Litmus cambia de color
según el pH. Cuando hay presencia de ácidos cambia a color rojo y a color violeta
cuando hay bases.
Primer Periodo
1. Rotula los tubos con tu nombre, nombre del organismo, fecha y tipo de medio de
cultivo.
2. Usando una técnica aséptica inocula cada tubo de Litmus Milk con el
microorganismo asignado.
3. Coloca los tubos a 35°C de 24 – 48 horas.
Segundo Periodo
1. Al cabo de las 24 -48 horas examina los tubos y anota en la sección de reporte la
presencia de ácido, base o proteolisis entre otras reacciones.
2. Anota tus resultados en la sección de reporte.
Preparado por: Francisco J. Rivera-Figueroa
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Ejercicio de Laboratorio 5
Fermentación de Carbohidratos
1. Apariencia de los tubos. Llene los espacios vacíos con lo siguiente: (A) ácido,
(-) no reacción, (G) gas o (AG) ácido o gas.
Nombre de las bacterias
Tubo
Lactosa
Dextrosa
Sucrosa
2. Defina fermentación.
3. ¿Cuál es la función del tubo Durham en este experimento?
4. ¿Todos los organismos
fermentación?
tiene
la
misma
reacción
y
productos
en
5. ¿Cuáles son los productos metabólicos producidos por los distintos
organismos utilizados en este experimento? – busca información adicional
Hidrólisis de almidón
1. Realiza un diagrama de la presencia o ausencia de almidón en la hidrólisis.
Preparado por: Francisco J. Rivera-Figueroa
la
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2. Describa la función de las hidrolasas.
Hidrólisis de Lípidos
1. Realiza un diagrama de la presencia o ausencia de lípidos en la hidrólisis.
2. Describa la función de las lipasas.
3. ¿Cuál es la función de los lípidos en las células bacteriales?
Prueba Litmus Milk e hidrólisis de caseína
1. Realiza un diagrama de la reacción de los microorganismos en el medio de
cultivo en los tubos de ensayo.
2. Defina lo siguiente:
a. Proteína =
b. Hidrólisis =
Preparado por: Francisco J. Rivera-Figueroa
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c. Caseína =
d. Proteasa =
e. Aminoácido =
f.
Enlace polipéptido =
g. Proteolisis =
3. ¿Cuál es la función del Litmus en medio de leche?
4. ¿Por qué la leche es blanca?
Conclusión
Preparado por: Francisco J. Rivera-Figueroa