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Observación de bacterias
OBJETIVOS
1. Realizar una tinción simple de bacterias procedentes de distintas muestras
naturales.
2. Realizar dos tipos de fijaciones bacterianas y saber en qué casos se
recomienda una u otra.
3. Observar la morfología bacteriana y aprender a distinguir los distintos tipos
de agrupaciones que existen.
4. Practicar con el microscopio al máximo aumento y con el correcto empleo
del aceite de inmersión.
MATERIAL
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Mechero Bunsen o de alcohol
Asa de siembra o aguja
enmangada
Pinzas
Portaobjetos
Muestras bacterianas de origen
natural: yogur, vinagre, sarro
dental, suelo, etc.
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Colorantes para tinción:
a) Solución de cristal violeta al
1%
b) Solución de safranina al 0,5%
c) Azul de metileno al 1%
Microscopio y aceite de inmersión
BACTERIAS DEL YOGUR
El yogur es un producto lácteo producido por la fermentación natural de la leche. A
escala industrial se realiza la fermentación añadiendo a la leche dosis del 3-4% de una
asociación de dos cepas bacterianas: el Streptococcus termophilus, poco productor de
ácido, pero muy aromático, y el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante. En esta
preparación se podrán, por tanto, observar dos morfologías bacterianas distintas (cocos y
bacilos) y un tipo de agrupación (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Además,
el tamaño del lactobacilo (unos 30µm de longitud) facilita la observación aunque no se
tenga mucha práctica con el enfoque del microscopio.
1. Realizar el frotis disolviendo una mínima porción de yogur en una pequeña gota
de agua.
2. Fijar con metanol para eliminar parte de la grasa.
3. Teñir con un colorante cualquiera de los arriba indicados durante 1-2 minutos.
4. Observar al máximo aumento del microscopio.
BACTERIAS DEL VINAGRE
El vinagre es una solución acuosa rica en ácido acético resultante de la fermentación
espontánea del vino o de bebidas alcohólicas de baja graduación. La acetificación del
vino es producida por bacterias aeróbicas del ácido acético, principalmente Acetobacter
aceti, aunque también Gluconobacter. Se trata de bacilos rectos con flagelos polares.
1. Tomar con una aguja enmangada una pequeña porción de madre de vinagre
natural o de la telilla que se forma sobre la superficie de los vinos agriado.
2. Extender la muestra en el portaobjetos con una gota de agua y hacer el frotis.
3. Dejar secar y fijar con calor.
4. Teñir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar.
BACTERIAS DEL SARRO DENTAL
El sarro dental es un depósito consistente y adherente localizado sobre el esmalte de los
dientes. Está constituido principalmente por restos proteicos, sales minerales y bacterias
junto con sus productos metabólicos. La flora bacteriana de la cavidad bucal es muy
variable dependiendo de las condiciones que se den en el momento de hacer la
preparación, pero suelen abundar bacterias saprófitas, pudiéndose observar gran variedad
de morfologías: espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos.
1. Con una aguja enmangada tomar una pequeña porción de sarro dental y
disolverla en una gota de agua sobre el portaobjetos.
2. Dejar secar y fijar con calor.
3. Teñir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar.
BACTERIAS DEL SUELO
La variedad de bacterias que pueden aparecer en una muestra de suelo es prácticamente
infinita, muchas de ellas no cultivables en los laboratorios y algunas, incluso,
desconocidas para los microbiólogos. Para recoger la muestra y hacer el frotis basta con
dejar parcialmente enterrado en vertical un portaobjetos en la tierra de una maceta o de
un jardín. Después de varios días, las bacterias se habrán adherido al vidrio y sólo habrá
que fijarlas por calor y teñirlas con un colorante cualquiera. Previamente hay que limpiar
los bordes del portaobjetos, así como la parte que no se va a teñir.