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ASSURE®/FeLV.
Kit de diagnóstico
USO VETERINARIO.
Para la detección del virus de la leucemia felina.
TIPO DE PRUEBA
ELISA.
DETECTA
Antígenos.
TIPO DE MUESTRA
Sangre entera con anticuagulante
suero, plasma o saliva.
(EDTA, heparina),
TIEMPO DE MUESTRA
10 a 15 minutos.
ALMACENAMIENTO
CONTENIDO NETO
•25 varitas recubiertas con anticuerpos Anti-FeLV.
•25 pipetas de transferencia.
•25 tubos de conjugado de anticuerpo HRP-Monoclonal
predispensado (Tubos A).
No congele.
•25 tubos de Sustrato búfer predispensado (Tubos B).
•Frasco con 3.0 mL de cromógeno C (tapa blanca).
•Frasco con 3.0 mL de D-S.E.R. (tapa azul).
Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad
siempre y cuando se almacenen correctamente.
Almacene el kit de prueba a 2° - 7° C (38° - 45° F).
INTRODUCCIÓN
El Virus de la Leucemia Felina (FeLV) es un virus RNA oncogénico contagioso que ocasiona tanto enfermedades
neoplásticas como no neoplásticas en gatos. Las enfermedades ocasionadas por FeLV incluyen linfosarcoma,
leucemia mielogena, atrofia tímica, anemia no regenerativa y enfermedad parecida a la panleucopenia.
La identificación rápida de animales infectados permite que se separen de los gatos no infectados para prevenir la
propagación de FeLV. ASSURE®/FeLV utiliza anticuerpos altamente específicos para identificar rápidamente gatos
infectados con FeLV. El antígeno especifico del grupo p27, se encuentra en niveles altos en gatos infectados y su
presencia es definitiva para el diagnóstico de infección por FeLV. ASSURE®/FeLV es una prueba de inmunoensayo
que utiliza anticuerpos que reconocen específicamente al antígeno p27 en la sangre y saliva del gato.
Después de la exposición, un gato puede dar positivo dentro de los siguientes 14 días. Las infecciones persistentes
permanecerán positivas mientras las infecciones transitorias pueden volverse negativas dentro de los siguientes 1
a 2 meses. Una prueba de saliva no será fuertemente positiva hasta que se haya replicado el virus en la médula
ósea, liberado en la circulación, y finalmente haya infectado los tejidos epiteliales. Esto podría tomar un periodo de
1 a 2 meses después de la exposición y podría indicar una infección persistente.
Ya que la infección puede ser transitoria en gatos que desarrollan inmunidad, los animales positivos a antígenos
deben ser re-examinados en 1 a 2 meses. Una segunda prueba positiva indica una infección persistente. Una prueba
negativa indica ausencia del virus.
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PRINCIPIOS DE LA PRUEBA
Los extremos bulbosos de los varitas de plástico
están recubiertos con un anticuerpo dirigido
contra un antígeno FeLV específico, p27. Un
segundo anticuerpo dirigido contra el antígeno
p27 se conjuga a la enzima peroxisada de
rábano picante. La muestra se incuba en un solo
paso con la varita recubierta de anticuerpos
dirigidos y anticuerpos marcados con la enzima.
Si el antígeno está presente, es capturado por la
varita. Los anticuerpos marcados por la enzima
son a su vez capturados por el antígeno en la
varita. El anticuerpo marcado por la enzima no
ligado se elimina por lavado y la varita se coloca
en un sustrato cromogénico. El desarrollo de un
color azul distinto en la solución indica la
presencia del antígeno FeLV. En la ausencia del
antígeno FeLV, no se desarrolla ningún color.
Cuando se utiliza una muestra de saliva,
ASSURE®/FeLV puede detectar en 15 a 20
minutos el antígeno en gatos que activamente
portan el virus. Cuando se utilizan muestras de
sangre entera, suero o plasma, ASSURE®/FeLV
puede detectar en 10 a 15 minutos el antígeno
circulante en gatos infectados.
ASSURE®/FeLV
Kit de diagnóstico
INFORMACIÓN DE LA MUESTRA
Se requiere saliva o 100 μl (0.10 ml) de sangre
entera, plasma o suero. La sangre entera y el
plasma deben contener un anticoagulante. Las
muestras de suero y plasma se deben almacenar
a 2° - 7° C (36° - 45° F) por un máximo de 7 días; 24
horas para sangre entera. Para periodos más
prolongados, el suero y el plasma (no la sangre entera)
se deben almacenar a -20 C. Las muestras se
pueden usar frías. Las muestras hemolizadas o
lipémicas se pueden utilizar, sin embargo, estas
pueden producir un color de fondo. Cuando
tenga duda, obtenga una muestra de mejor
calidad. Las muestras de saliva no se pueden
almacenar ni conservar. Los restos celulares de
saliva o abrasiones en la superficie de la varita no
afectan los resultados.
No induzca salivación químicamente.
¿CÓMO SE USA?
Para cada muestra necesitará:
•Una varita revestida de anticuerpo Anti-FeLV etiquetada con la ID del gato.
•Pipeta de transferencia (solamente para un uso) 3 gotas = 100 uL (No se requiere para muestras de saliva).
•Tubo A de conjugado de anticuerpos HRP monoclonales predispensados.
•Tubo B sustrato búfer predispensado.
•Estación de trabajo con reactivos.
•Botella con atomizador con agua destilada o desionizada o solución salina.
PROCEDIMIENTO PARA REALIZAR LA PRUEBA
Nota: Utilice muestras de SANGRE ENTERA, SUERO, PLASMA o SALIVA.
Antes de utilizar, permita que los componentes lleguen a temperatura ambiente (21° a 25° C).
A. RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA:
1A. PROCEDIMIENTO DE SANGRE ENTERA/SUERO/PLASMA
•Pipetee 3 gotas de la muestra a un Tubo A.
•Tape para mezclar.
1B. PROCEDIMIENTO DE SALIVA
•Agregue 3 gotas de la Botella D (Tapa Azul) al Tubo A
•Tape para mezclar
•Colóquelo en la estación de trabajo.
•Recolección de muestra:
-Tome una varita etiquetada.
-Coloque el extremo bulboso de la varita entre la mejilla y la encía en la parte posterior de la boca.
-Gire suavemente durante 5 a 10 segundos.
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ASSURE®/FeLV
Kit de diagnóstico
B. INCUBACIÓN DE CONJUGADO:
•Coloque el extremo bulboso de la varita etiquetada en el Tubo A.
•Gire de 1 a 3 segundos para mezclar.
•ESPERE 5 MINUTOS para muestrasde sangre.
•ESPERE 10 MINUTOS para muestras de saliva.
*O hasta 20 minutos.
C. PREPARAR EL TUBO B:
Durante el periodo de espera
•Retire el tapón del Tubo B.
•Agregue 3 gotas de la Botella C (Tapa Blanca) al Tubo B.
•Tape para mezclar.
•Ponga a un lado para utilizarse en el Paso E.
D. PASO DE LAVADO:
LA SOLUCIÓN SALINA NORMAL DEBE UTILIZARSE CON MUESTRAS DE SANGRE ENTERA
Se puede utilizar agua destilada/desionizada o solución salina normal con muestras de suero o plasma o saliva.
•Retire la varita del Tubo A.
•Lave la punta y el extremo bulboso utilizando el MÉTODO I o II.
I. MÉTODO CON PISETA
•Dirija un chorro fuerte del agente de lavado adecuado contra el extremo bulboso y la punta de la varita y
trabajar hasta el mango.
•Agite para eliminar el exceso de agua.
•Repita 5 a 7 veces totalizando aprox. 8 onzas del agente de lavado apropiado.
II. MÉTODO DE TAZA
•Realice el enjuague inicial de la varita con un chorro fuerte del agente de lavado apropiado.
•Gire/agite vigorosamente en 100 ml del agente de lavado apropiado durante un mínimo de 30 segundos.
•Agite para eliminar el exceso de líquido.
•Reponga el líquido entre Varitas.
E. DESARROLLO DE COLOR:
•Coloque la varita lavada en el Tubo B.
•Gire 1 - 3 segundos para mezclar.
•ESPERE 5 MINUTOS (Se deben verificar los positivos débiles esperando hasta 10 minutos).
•Retire la varita.
•Lea los resultados.
F. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
•Observe la solución contra la ventana de la estación de trabajo o un fondo blanco para distinguir un color azul.
NOTA: La intensidad del color puede variar con el nivel del antígeno FeLV presente.
CONTROL DE PROCEDIMIENTO OPCIONAL:
Para verificar la técnica y el desempeño del kit cuando se obtiene un resultado negativo / claro.
•Coloque la varita otra vez en el Tubo A.
•Gire para mezclar durante 1 a 3 seg.
•Retire la varita.
•No lave.
•Coloque otra vez en el Tubo B.
Se desarrollará el color azul dentro de 1 minuto indicando que se agregaron correctamente los reactivos y
que el kit está funcionando adecuadamente. Si no se desarrolla el color, repita la prueba.
Éste es un procedimiento y una verificación de reactivo solamente. (El antígeno FeLV no está presente).
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RESULTADOS
ASSURE®/FeLV
Kit de diagnóstico
•Las muestras de sangre entera y plasma deben contener anticoagulante.
•Se pueden utilizar muestras hemolizadas o lipémicas, sin embargo, se debe utilizar la solución salina normal
en lugar de agua destilada o desionizada en el paso D. Las muestras severamente hemolizadas y lipémicas
pueden producir un color de fondo. Cuando tenga dudas obtenga una muestra de mejor calidad.
•Lavar es el paso más importante. Las varitas no se pueden sobre lavar. El lavado muy suave resultará en un
desarrollo de color azul no específico en el Tubo B.
•La incubación prolongada durante más de 10 minutos en el paso E puede resultar en un desarrollo de color
azul no específico, Lea los resultados a los 5 minutos. Si no se ve ningún color a los 5 minutos, la muestra es
negativa. Los positivos débiles o sospechosos a los 5 minutos pueden verificarse esperando hasta 10 minutos.
•No utilice el kit de prueba después de la fecha de caducidad y no entremezcle los componentes de diferentes números de serie.
•Almacene el kit a 2° a 7° C (36° a 45° F). Permita que el kit llegue a temperatura ambiente antes de utilizarlo.
PRECAUCIONES
Permita que el Kit alcance a la temperatura ambiente (21°-25°C; 70°-78°F) antes de usarlo.
Aproximadamente una hora.
No exponga el Kit a la luz directa del sol.
No use reactivos caducos ni mezcle con diferentes series de kit.
Mantenga los frascos de reactivo verticalmente para obtener el volumen de goteo adecuado.
Deseche de forma adecuada las muestras postencialmente infectadas.
Conservar fuera de alcance de los niños y animales domésticos.
Consulte al Médico Veterinario. Sólo para Uso Veterinario.
ASSURE®/FeLV es marca registrada de ZOETIS MÉXICO, S. DE R.L. DE C.V.
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