Download Descargar documento

Dirección General de Epidemiología
lineamientos de laboratorio para la vigilancia
epidemiológica de la carga viral y
subpoblaciones linfocitarias en
individuos infectados por el vih
Instituto de Diagnóstico y referencia Epidemiológicos
“Dr. Manuel Martínez Báez”
LINEAMIENTOS DE LABORATORIO PARA LA VIGILANCIA
EPIDEMIOLÓGICA DE LA CARGA VIRAL Y SUBPOBLACIONES
LINFOCITARIAS EN INDIVIDUOS INFECTADOS POR EL VIH
DGE-InDRE-RNLSP
2015
Fotografía de la portada propiedad de HKS Arquitectos
Carga Viral
Versión No.01
Página 1 de 28
InDRE-RNLSP
PRIMERA EDICIÓN, 2015
CARGA VIRAL Y SUBPOBLACIONES LINFOCITARIAS–RNLSP
ESTE
DOCUMENTO FUE AVALADO POR LOS REPRESENTANTES DE LAS INSTITUCIONES QUE
CONFORMAN EL GRUPO TÉCNICO INTERINSTITUCIONAL DEL COMITÉ NACIONAL DE
VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA (CONAVE).
TODOS LOS DERECHOS RESERVADOS CONFORME A LA LEY,
© INDRE-SECRETARÍA DE SALUD
SE PERMITE LA REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL SI SE CITA LA FUENTE: “LINEAMIENTOS DE
LABORATORIO PARA LA VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA DE LA CARGA VIRAL Y
SUBPOBLACIONES LINFOCITARIAS EN INDIVIDUOS INFECTADOS POR EL VIH” VERSIÓN NO. 01.
INDRE, 2015.
COLECCIÓN PUBLICACIONES TÉCNICAS DEL INDRE:
ISBN: EN PROCESO
INSTITUTO DE DIAGNÓSTICO Y REFERENCIA EPIDEMIOLÓGICOS DR. MANUEL MARTÍNEZ
BÁEZ
FRANCISCO P MIRANDA 177, COL. LOMAS DE PLATEROS DEL. ÁLVARO OBREGÓN, C. P.
01480, MÉXICO, D. F.
TEL. (55)53-42-75-50
www.indre.salud.gob.mx
LA EDICIÓN ESTUVO A CARGO DE: DR. JOSÉ ALBERTO DÍAZ QUIÑONEZ
EL DISEÑO ESTUVO A CARGO DE: LIC. BRENDA ESCOBEDO LÓPEZ
IMPRESO EN MÉXICO. PRINTED IN MEXICO
Carga Viral
Versión No.01
Página 2 de 28
InDRE-RNLSP
SECRETARÍA DE SALUD
DRA. MERCEDES JUAN LÓPEZ
SECRETARIA DE SALUD
DR. EDUARDO GONZÁLEZ PIER
SUBSECRETARIO DE INTEGRACIÓN Y DESARROLLO DEL SECTOR SALUD
DR. PABLO ANTONIO KURI MORALES
SUBSECRETARIO DE PREVENCIÓN Y PROMOCIÓN DE LA SALUD
LIC. MARCELA GUILLERMINA VELASCO GONZÁLEZ
SUBSECRETARIA DE ADMINISTRACIÓN Y FINANZAS
DR. GABRIEL O´SHEA CUEVAS
COMISIONADO NACIONAL DE PROTECCIÓN SOCIAL EN SALUD
LIC. MIKEL ARRIOLA PEÑALOZA
COMISIONADO FEDERAL DE PROTECCIÓN CONTRA RIESGOS SANITARIOS
DR. JOSÉ MELJEM MOCTEZUMA
COMISIONADO NACIONAL DE ARBITRAJE MÉDICO
DR. GUILLERMO MIGUEL RUIZ-PALACIOS Y SANTOS
TITULAR DE LA COMISIÓN COORDINADORA DE INSTITUTOS NACIONALES DE SALUD Y
HOSPITALES DE ALTA ESPECIALIDAD
LIC. RODRIGO REINA LICEAGA
TITULAR DE LA UNIDAD COORDINADORA DE VINCULACIÓN Y PARTICIPACIÓN SOCIAL
DR. NELLY AGUILERA ABURTO
TITULAR DE LA UNIDAD DE ANÁLISIS ECONÓMICO
LIC. CARLOS SANDOVAL LEYVA
DIRECTOR GENERAL DE COMUNICACIÓN SOCIAL
DR. JESÚS FELIPE GONZÁLEZ ROLDAN
DIRECTOR GENERAL DEL CENTRO NACIONAL DE PROGRAMAS PREVENTIVOS Y CONTROL DE
ENFERMEDADES
DR. EDUARDO JARAMILLO NAVARRETE
DIRECTOR GENERAL DE PROMOCIÓN DE LA SALUD
DR. CUITLÁHUAC RUIZ MATUS
DIRECTOR GENERAL DE EPIDEMIOLOGÍA
Carga Viral
Versión No.01
Página 3 de 28
InDRE-RNLSP
LIC. JUAN CARLOS REYES OROPEZA
DIRECTOR GENERAL DE INFORMACIÓN EN SALUD
Carga Viral
Versión No.01
Página 4 de 28
InDRE-RNLSP
INSTITUTO DE DIAGNÓSTICO Y REFERENCIA EPIDEMIOLÓGICOS
DR. MANUEL MARTÍNEZ BÁEZ
DR. JOSÉ ALBERTO DÍAZ QUIÑONEZ
DIRECTOR GENERAL ADJUNTO
BIOL. IRMA LÓPEZ MARTÍNEZ
DIRECTORA DE DIAGNÓSTICO Y REFERENCIA
QFB. LUCÍA HERNÁNDEZ RIVAS
DIRECTORA DE SERVICIOS Y APOYO TÉCNICO
LIC. ADRIANA CASTRO CABRERA
SUBDIRECTORA DE OPERACIÓN
BIOL. NORMA ANGÉLICA MONTES COLIMA
JEFA DEL DEPARTAMENTO DE BACTERIOLOGÍA
QBP. IRMA HERNÁNDEZ MONROY
ASESORA TÉCNICA DE LA DIRECCIÓN
M. EN C. BELÉN TORRES LONGORIA
JEFA DEL DEPARTAMENTO DE VIROLOGÍA
QFB. ROBERTO VÁZQUEZ CAMPUZANO
JEFE DEL DEPARTAMENTO DE ENFERMEDADES EMERGENTES Y URGENCIAS
M EN C. JUAN CARLOS CARPIO PEDROZA
JEFE DEL DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGÍA
DRA. CLARA GORODEZKY LAUFERMAN
JEFA DEL DEPARTAMENTO DE INMUNOLOGÍA
M. EN C. JUDITH ESTEVEZ RAMÍREZ
JEFA DEL DEPARTAMENTO DE CONTROL DE MUESTRAS Y SERVICIOS
DR. JOSÉ ERNESTO RAMÍREZ GONZÁLEZ
JEFE DEL DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y VALIDACIÓN DE PRUEBAS
QBP. LOURDES A. CANO SANTANA
JEFA DEL LABORATORIO DE CARGA VIRAL
Carga Viral
Versión No.01
Página 5 de 28
InDRE-RNLSP
GRUPO DE TRABAJO
QBP. LOURDES A. CANO SANTANA
JEFA DEL LABORATORIO DE CARGA VIRAL
QBP. JAIME ISRAEL FALCÓN ACOSTA
ADSCRITO AL LABORATORIO DE CARGA VIRAL
BIOL. IRMA LÓPEZ MARTÍNEZ
DIRECTORA DE DIAGNÓSTICO Y REFERENCIA
DR. HUGO MARTÍNEZ ROJANO
ASESOR TÉCNICO DE LA DIRECCIÓN GENERAL ADJUNTA DEL INDRE
COORDINADOR DE MEDICINA LABORAL
DR. JOSÉ ALBERTO DÍAZ QUIÑONEZ
DIRECTOR GENERAL ADJUNTO
Carga Viral
Versión No.01
Página 6 de 28
InDRE-RNLSP
LINEAMIENTOS DE LABORATORIO
PARA LA VIGILANCIA
EPIDEMIOLÓGICA DE LA CARGA VIRAL
Y SUBPOBLACIONES LINFOCITARIAS
EN INDIVIDUOS INFECTADOS POR EL
VIH
DGE-InDRE–RNLSP
2015
Carga Viral
Versión No.01
Página 7 de 28
InDRE-RNLSP
ÍNDICE
ACRÓNIMOS Y SIGLAS .................................................................................................... 9
INTRODUCCIÓN ............................................................................................................... 10
ANTECEDENTES DE LA RNLSP PARA LA DETERMINACIÓN DE CARGA VIRAL
Y SUBPOBLACIÓN DE LINFOCITOS. ........................................................................... 13
MARCO LEGAL ................................................................................................................ 13
DEFINICIONES OPERATIVAS ........................................................................................ 14
OBJETIVO GENERAL ...................................................................................................... 15
DETERMINACIÓN POR LABORATORIO DE LA CARGA VIRAL Y DE
SUBPOBLACIONES DE LINFOCITOS CD4, CD8 Y CD3............................................. 15
ESTÁNDARES DE CALIDAD .......................................................................................... 19
PROGRAMA DE EVALUACIÓN EXTERNA DEL DESEMPEÑO ............................... 19
CARGA VIRAL ................................................................................................................... 20
CUANTIFICACIÓN DE SUBPOBLACIÓN DE LINFOCITOS CD4, CD8 Y CD3.......................... 20
BANCO DE MATERIAL BIOLÓGICO ..................................................................................... 21
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES .............................................................................. 21
BIBLIOGRAFÍA ................................................................................................................. 22
ANEXO I: TÉCNICAS DIAGNÓSTICAS ......................................................................... 24
ANEXO II: CARACTERÍSTICAS DE EQUIPOS COMERCIALES ............................... 28
ANEXO III: PREPARACIÓN DE REACTIVOS .............................................................. 28
Carga Viral
Versión No.01
Página 8 de 28
InDRE-RNLSP
ACRÓNIMOS Y SIGLAS
ADN: Ácido Desoxirribonucleico
ARN: Ácido Ribonucleico
CONASIDA: Consejo Nacional para Prevención y Control del SIDA
CONAVE: Comité Nacional de Vigilancia Epidemiológica
CV: Carga Viral
EDTA: Ácido etilendiaminotetraacético
LESP: Laboratorio Estatal de Salud Pública
NOM: Norma Oficial Mexicana
OMS: Organización Mundial de la Salud.
PCR: Reacción en Cadena de la Polimerasa
RNLSP: Red Nacional de Laboratorios de Salud Publica
RT-PCR: Reacción en Cadena de la Polimerasa tras transcripción inversa
SINAVE: Sistema Nacional de Vigilancia Epidemiológica
SIDA: Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida
TI: Transcriptasa inversa
VAL: Virus Asociado a Linfadenopatía
VIH: Virus de la Inmunodeficiencia Humana
HTLV-III: Virus T-Linfotrófico Humano tipo III
Carga Viral
Versión No.01
Página 9 de 28
InDRE-RNLSP
INTRODUCCIÓN
El síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) fue identificado por primera vez en el
año de 1981 como un grupo de infecciones oportunistas sin precedente, que afectaba a
individuos sin predisposición conocida a deficiencias del sistema inmunitario. El SIDA
puede considerarse una enfermedad que impide la respuesta eficaz del sistema inmunitario
cuyo agente causal es conocido como virus de la inmunodeficiencia humana (VIH). Este
virus fue conocido al inicio de la epidemia como virus asociado a linfadenopatía (LAV) y
virus T-linfotrófico humano tipo III (HTLV-III), términos que prácticamente no se utilizan
en la actualidad.
El VIH puede debilitar la respuesta inmunitaria hasta tal punto que el portador es incapaz
de controlar ciertos microorganismos que un sistema inmunitario sano sí controlaría. Este
tipo de microorganismos patógenos se conocen como oportunistas debido a que pueden
expresar sus efectos patógenos solo en presencia de factores predisponentes que debilitan el
sistema inmunitario.
Existen dos tipos de VIH, el VIH-1 y el VIH-2. El VIH-1 es el más conocido y también es
el responsable de la mayoría de los casos de SIDA en el mundo. El VIH-2 fue identificado
por primera vez en 1986 en pacientes de África Oriental, en donde estuvo confinado por
varios años; sin embargo, se han reportado algunos casos de infección por VIH-2 en
Europa, América del Sur, Canadá y Estados Unidos. Existen algunas diferencias clínicas
entre la infección causada por el VIH-1 y el VIH-2; el segundo tiene menor eficiencia de
transmisión y un mayor periodo de latencia antes del desarrollo del cuadro clínico de SIDA.
El VIH pertenece a la familia de los retrovirus y a la subfamilia de los lentivirus. Estos
virus tienen una serie de características específicas que son determinantes en la compleja
patogenia de la infección por el VIH:
 Gran diversidad genética (virus ácido ribonucleico [ARN]) y genoma muy complejo
(lentivirus)
 En su ciclo vital hay dos fases: el virión infectante (ARN) y el provirus (ácido
desoxirribonucleico [ADN]). Esta fase intermedia de integración en el genoma
huésped le permite prolongados periodos asintomáticos (latencia), a pesar de una
viremia persistente.
 Se replica mediante un mecanismo inverso al habitual en los virus ARN. El papel
fundamental lo juega una enzima llamada transcriptasa inversa (TI).
 Sus células huésped son los linfocitos CD4+, macrófagos, células nerviosas de la
microglía y las células dendríticas residentes en mucosas (células de Langerhans).
El VIH se puede transmitir por tres mecanismos:
 Transmisión sexual: Exposición directa a secreciones de personas infectadas, como
el semen y el flujo vaginal.
Carga Viral
Versión No.01
Página 10 de 28
InDRE-RNLSP
 Transmisión sanguínea: Exposición a sangre o sus derivados, ya sea por
transfusiones y trasplantes o por vía parenteral debido al uso de agujas
contaminadas.
 Transmisión perinatal: Es el paso del virus de la madre infectada a su hijo, este
mecanismo es llamado también transmisión vertical. La infección del producto
puede ocurrir durante el embarazo, durante el parto o durante la lactancia.
La infección por el VIH se asocia en todas sus etapas con una intensa replicación viral,
principalmente en linfocitos y macrófagos. Al inicio, los mecanismos de defensa del
organismo permiten neutralizar a los nuevos viriones y regenerar las células inmunes que se
destruyen aceleradamente, lográndose un equilibrio entre la cantidad de virus circulante,
(carga viral), y el recuento de linfocitos CD4+ (respuesta del sistema inmunitario); de esta
manera, la persona infectada se mantiene asintomática (etapa A). Sin embargo, después de
un periodo variable se rompe este equilibrio, la carga viral comienza a aumentar y los
recuentos de linfocitos CD4+ declinan progresivamente.
La cuantificación del ARN del VIH-1 es un reflejo de la replicación viral activa y es
esencial en algunas situaciones clínicas de la infección por este virus. Las indicaciones
principales para su cuantificación son las siguientes:
1. La carga viral es un marcador predictivo del tiempo de progresión a Sida
independiente del número de linfocitos CD4+. Durante los primeros años de
conocerse el Sida se consideró el recuento de las células CD4+ como el mejor
marcador para pronosticar la progresión de la enfermedad, pero en la actualidad, se
utilizan ambos marcadores; la carga viral y el recuento de células CD4+.
2. La cuantificación de la CV del VIH-1 debe ser realizada antes de iniciar un
tratamiento con antirretrovirales, para evaluar la eficacia o respuesta al tratamiento,
y en el caso de que se sustituya o añada algún fármaco, bien por efectos adversos o
por sospecha de fracaso.
3. Hay situaciones excepcionales en las que la carga viral es muy útil para el
diagnóstico de la infección neonatal (la determinación de anticuerpos no es útil) e
incluso cuando se sospecha infección aguda (reduce el periodo ventana).
Hoy en día, la metodología utilizada en la mayoría de los servicios de laboratorio es la
reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real, que ha desbancado casi en su
totalidad a otras técnicas previas como la PCR convencional, la tecnología NASBA
(amplificación isotérmica de ácidos nucleicos), la reacción en cadena de la ligasa o las
tecnologías de amplificación de señal. Aunque la PCR en tiempo real está lejos de ser
considerada como la técnica ideal tiene ventajas importantes, como son una buena
sensibilidad analítica (<40 copias/mL), gran reproducibilidad y linealidad, rango dinámico
y, sobre todo, es capaz de determinar los diversos tipos y subtipos de VIH, no solamente el
Carga Viral
Versión No.01
Página 11 de 28
InDRE-RNLSP
VIH-1 subtipo B. Este aspecto epidemiológico es muy importante y una de las principales
preocupaciones de las compañías comerciales a la hora de desarrollar sus técnicas.
Estudios comparativos entre las diferentes plataformas de PCR en tiempo real han mostrado
resultados comparables para la detección del VIH grupo M, aunque puede haber algunas
diferencias en la detección de las formas recombinantes circulantes. En cuanto al resto de
técnicas (no-PCR en tiempo real), diversos estudios publicados demuestran que los
resultados son también comparables con escasas diferencias. En la mayoría de los estudios
comparativos realizados, la tasa de correlación entre las técnicas utilizadas para cuantificar
el ARN del VIH-1 era del 90%. A pesar de esto, en el seguimiento de los pacientes es
conveniente utilizar siempre la misma técnica a lo largo del tratamiento y, sobre todo, si se
cambia de técnica hay que asegurarse de obtener una cuantificación basal del ARN VIH-1
nueva obtenida con la técnica que se va a utilizar en el futuro.
De acuerdo a las consideraciones antes mencionadas y la importancia que implica esta
infección para la salud pública del país se efectuó el presente documento que establece los
lineamientos para la aplicación del algoritmo de diagnóstico de la carga viral y de
subpoblaciones linfocitarias del paciente infectado con el VIH.
ANTECEDENTES DE LA RED NACIONAL
Red Nacional de Laboratorios de Salud Pública
La Red Nacional de Laboratorios de Salud Pública (RNLSP) es el conjunto de laboratorios
de vigilancia epidemiológica con objetivos específicos que le han permitido unificar
métodos de diagnóstico, criterios de interpretación de resultados, transferencia tecnológica,
generación de conocimiento y formación de recursos humanos. Es el soporte técnicocientífico útil para la vigilancia epidemiológica y que genera información de calidad para la
toma oportuna de decisiones a través de la confirmación de diagnósticos mediante estudios
de laboratorio en muestras biológicas.
La RNLSP depende de la Secretaría de Salud y es el Instituto de Diagnóstico y Referencia
Epidemiológicos (InDRE) su órgano rector en el área de vigilancia epidemiológica. Tiene
fundamento legal en la Norma Oficial Mexicana NOM-017-SSA2-2012, Para la vigilancia
epidemiológica y está conformada por 31 Laboratorios Estatales de Salud Pública (LESP)
de las 31 entidades federativas del país (el Distrito Federal envía sus muestras al InDRE).
El Marco Analítico Básico de la RNLSP consta de 27 diagnósticos, distribuidos en 16 redes
de vigilancia específica.
Carga Viral
Versión No.01
Página 12 de 28
InDRE-RNLSP
ANTECEDENTES DE LA RNLSP PARA LA DETERMINACIÓN DE CARGA VIRAL
Y SUBPOBLACIÓN DE LINFOCITOS.
Red Nacional de Laboratorios para la Vigilancia de la carga viral y subpoblaciones de
linfocitos
Actualmente no se cuenta con un control de referencia biológico (material para diagnóstico
de carga viral y determinación de linfocitos CD4, CD8 y CD3) para su envío a los
diferentes Laboratorios Estatales de Salud Pública (LESP).
MARCO LEGAL
1. Ley General de Salud, México. Nueva Ley publicada en el Diario Oficial de la
Federación el 7 de febrero de 1984. Última reforma publicada en el DOF
07/06/2012.
2. Reglamento Interior de la Secretaria de Salud. México. Publicado en el Diario
Oficial de la Federación el 19 de enero de 2004. Última reforma publicada en el
DOF del 10 de enero de 2011.
a. Reforma aplicable: Decreto que reforma, adiciona y deroga diversas
disposiciones del Reglamento Interior de la Secretaría de Salud. DOF 2 de
febrero de 2010.
3. Norma Oficial Mexicana NOM-017-SSA2-2012, Para la vigilancia epidemiológica,
publicada en el Diario Oficial de la Federación el 19 de febrero de 2013.
http://dof.gob.mx/nota_detalle.php?codigo=5288225&fecha=19/02/2013.
4. Secretaría de Salud. Programa Sectorial de Salud 2013-2018. Diario Oficial de la
Federación DOF: 12/12/2013.
5. Plan Nacional de Desarrollo 2013-2018. Diario Oficial de la Federación, DOF:
20/05/2013, www.dof.gob.mx
6. Secretaría de Salud. Programa de Acción Específico 2013-2018. Sistema Nacional
de Vigilancia Epidemiológica, primera edición 2014.
7. Norma Oficial Mexicana NOM-010-SSA2-2010 para la Prevención y Control de la
infección por Virus de la Inmunodeficiencia Humana.
8. Norma Oficial Mexicana NOM-877-ECOL-SSA1-2002 protección ambiental- salud
ambiental- residuos peligrosos biológico-infecciosos-clasificación y especificación
del manejo.
9. Norma Oficial Mexicana NOM-007-SSA3-2011, Para la organización y
funcionamiento de los laboratorios clínicos. DOF: 27/03/2012.
10. Norma Oficial Mexicana NOM-039-SSA2-2002, Para la prevención y control de las
infecciones de trasmisión sexual, DOF: 19/09/2003.
Carga Viral
Versión No.01
Página 13 de 28
InDRE-RNLSP
11. NMX-CC-9001 IMNC-2008, Sistemas de gestión de la calidad-Requisitos. DOF:
12/12/2008, imnc.org.mx
12. Lineamientos para los Programas de Evaluación Externa del Desempeño de la Red
Nacional de Laboratorios de Salud Pública DGE-InDRE-RNLSP, 2014.
13. Manual para la toma, envío y recepción de muestras para diagnóstico. DGE-InDRERNLSP, 2014.
14. Lineamientos de la Evaluación del Desempeño “Caminando a la Excelencia”,
México, DGE-InDRE-RNLSP, 2014.
15. Lineamientos del Sistema de Reconocimiento a la Competencia Técnica de
Laboratorios que apoyan a la Vigilancia Epidemiológica. DGE-InDRE-RNLSP,
2014.
16. Lineamientos para la Gestión de Riesgo Biológico. DGE-InDRE-RNLSP, 2014.
DEFINICIONES OPERATIVAS
Sida: es la etapa final de una infección causada por un virus que tiene una duración de
varios años; por lo que en la actualidad se considera que es una infección crónica. A partir
del momento que una persona se infecta por el virus que causa el Sida, tarda en promedio
10 años para que se desarrollen las manifestaciones de la enfermedad conocida como
Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida, SIDA.
Portador asintomático del VIH: Persona que se encuentra infectada por el virus de la
inmunodeficiencia humana, pero que todavía no ha desarrollado manifestaciones de la
enfermedad.
Determinación cuantitativa de carga viral en plasma: Es el número de partículas virales
contenidas en un volumen determinado de plasma o suero. Se expresa como número de
copias del virus/mL. Existen técnicas comerciales disponibles como RT-PCR (Amplicor,
Roche), NASBA, y Nuclisens (Organon), bDNA (Quantiplex, Chiron), Digene
(Omnichen). Ha sido demostrado, que la carga viral es un marcador que pronostica el
riesgo de progresión de la enfermedad, y sirve para medir la respuesta a la terapia
antirretroviral.
Cuenta de linfocitos T CD4+: La cuenta de linfocitos T CD4+ nos permite conocer el
deterioro que ha sufrido el sistema inmune a causa del VIH, generalmente el número de
estas células disminuye conforme avanza el deterioro del sistema inmune (progresión de la
enfermedad). Los valores normales de los linfocitos T CD4+ van de 750 a 1200
células/mL, el límite superior puede variar de acuerdo al método de laboratorio utilizado.
Una cuenta igual o menor a 200 células/mL se considera como definitoria de SIDA
independientemente de la presencia de otras manifestaciones.
Las actividades de salud, y dentro de ellas los servicios del Consejo Nacional para
Prevención y Control del Sida (CONASIDA), constituyen una de las materias objeto de la
actualización normativa, la NOM-010-SSA2-2010, Para la prevención y control de la
Carga Viral
Versión No.01
Página 14 de 28
InDRE-RNLSP
infección por VIH, aglutina los puntos de vista, propuestas y resultados de investigaciones
que diversos organismos, tanto gubernamentales como no gubernamentales y privados han
efectuado en varios ámbitos para la prevención y control de la enfermedad.
Básicamente la NOM-010-SSA2-2010 enumera las definiciones y especificación de
términos, disposiciones generales, medidas de prevención y de control; asimismo, describe
una bibliografía básica y la concordancia que tiene con otras normas a nivel internacional,
para efectos de la NOM-010-SSA2-2010 se entenderá por:
OMS: Organización Mundial de la Salud.
CONASIDA: Consejo Nacional de Prevención y Control del SIDA.
VIH: Virus de la Inmunodeficiencia Humana, incluye al VIH-1 y al VIH-2.
OBJETIVO GENERAL
Establecer los procedimientos para la aplicación del algoritmo de diagnóstico por
laboratorio para la cuantificación de la carga viral y subpoblaciones linfocitarias en
individuos infectados con el VIH-1 y establecer el manejo adecuado de la información
generada por laboratorio, a través de la RNLSP, en apoyo a la Vigilancia Epidemiológica
de la infección.
DETERMINACIÓN POR LABORATORIO DE LA
SUBPOBLACIONES DE LINFOCITOS CD4, CD8 y CD3
CARGA
VIRAL Y
DE
Cuantificación de la carga viral: Las muestras de sangre para la determinación de carga
viral deberán tomarse cuando el paciente cumpla con un ayuno mínimo de 10 horas. Se
debe de utilizar un tubo con EDTA como anticoagulante, ser transportadas a una
temperatura de entre 2 y 25 °C y centrifugarse dentro de las primeras 6 horas siguientes a
su recolección.
El volumen de sangre solicitado es de 5.0 mL, pero en caso de enviar el plasma ya separado
el volumen mínimo será de 1.2 mL.
Una vez separado el plasma de preferencia deberá congelarse, pero puede almacenarse
máximo un día a temperatura ambiente (18 a 25 °C) o a una temperatura de entre 2 y 8 °C
por 5 días.
Carga Viral
Versión No.01
Página 15 de 28
InDRE-RNLSP
Los tubos con las muestras deberán estar perfectamente etiquetados, sellados, y sin que
exista evidencia de derrames.
La determinación por lo general se realiza en plasma, aunque puede hacerse en otros
líquidos y tejidos.
En todas las técnicas para la cuantificación de la carga viral es necesario trabajar con
moléculas de RNA viral, las cuales son muy inestables, por lo que la toma de la muestra,
las condiciones de transporte, de almacenamiento y de procesamiento son fundamentales
para la obtención de resultados confiables.
Las variaciones de la carga viral se expresan en forma de un logaritmo de base o poder 10.
Por ejemplo, si en una primera determinación se encuentra 100,000 partículas del virus/mL,
entonces la disminución de 1 log, es igual a la disminución de 90% del número de copias,
es decir, una disminución a 10,000 copias/mL. La disminución de 2 log, es igual a la
disminución de 99% del número de copias, es decir, una disminución a 1,000 copias/mL.
La disminución de 3 log es igual a la disminución de 99.9% del número de copias, es decir,
a 100 copias/mL. Cambios de más de 0.5 log son considerados como significativos.
Cuantificación de subpoblaciones de Linfocitos CD4, CD8 y CD3. Las muestras de
sangre para la determinación de subpoblaciones de linfocitos CD4, CD8 y CD3 deben de
tomarse cuando el paciente cumpla con un ayuno mínimo de 10 horas. Se debe de
recolectar en un tubo con EDTA como anticoagulante, y transportarse a una temperatura
entre 18 y 25 °C, así como no tener más de 24 horas de haberse obtenido. El volumen de
sangre solicitado es de 5 mL.
En los casos de pacientes que requieran tanto la determinación de carga viral como de
subpoblación de linfocitos CD4, CD8 y CD3 se debe de enviar dos tubos con muestra
sanguínea que cumplan las especificaciones descritas en los párrafos anteriores.
El recuento de linfocitos CD4 tiene limitaciones de orden biológico y analítico que hay que
conocer para no cometer errores en su interpretación: Entre las de orden biológico están las
variaciones debidas a la edad, grupo étnico, momento del día en que se realiza la extracción
de la sangre, la estación del año, la influencia de infecciones concomitantes o el uso de
tratamientos. Entre las de orden analítico, están las relaciones con la variabilidad de los
resultados entre los laboratorios: la temperatura de la muestra, tiempo transcurrido entre la
extracción y el análisis; tipo de anticoagulante, reactivo e instrumento utilizado. Por último,
la variabilidad del número total de leucocitos, las proporciones de linfocitos/total de
leucocitos y linfocitos CD4+/total de linfocitos, influyen sobre la cifra absoluta de
linfocitos CD4+
Carga Viral
Versión No.01
Página 16 de 28
InDRE-RNLSP
ALGORITMO DIAGNÓSTICO
Muestra de sangre total obtenida en tubo con EDTA
Centrifugar a 3500 rpm durante 15 minutos
Obtener el plasma, envasar y congelar a -70 °C
Realizar carga viral por la técnica de
RT-PCR en tiempo real
Sensibilidad del método
40–10, 000, 000 de Copias de
ARN/mL)
1.
2.
3.
4.
RESULTADO DEL TÍTULO
CARGA NO DETECTADA: el valor Ct
obtenido para HIV-1 está por arriba del
límite del ensayo o no se ha obtenido un
valor Ct para HIV-1.
< 4.00E+01copias/mL: Las copias/mL
calculadas están por debajo del límite de
detección del ensayo.
≥4.00E+1copias/mL y ≤ 1.00E+07
copias/mL: Los resultados calculados
superiores o iguales a 40 Copias/mL e
inferiores o iguales a 1.00E+07 copias/mL
se encuentran dentro del intervalo lineal
del ensayo.
>1.00E+07 copias/mL: Las copias/mL
calculadas están por encima del intervalo
del ensayo
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
1.
Reportar como copias/mL de ARN del
VIH-1 no detectado.
2.
Reportar con ARN del HIV-1 detectado,
menos de 40 copias/mL.
3.
Reportar como resultados calculados
dentro del intervalo lineal del ensayo.
4.
Reportar como más de 1.00E+07
copias/mL del ARN del HIV-1. NOTA: Si
se desea obtener un resultado
cuantitativo, debe diluirse la muestra
original con plasma humano negativo
para HIV-1 y repetirse la prueba,
multiplicar el resultado obtenido por
el factor de dilución.
Se reporta No. Copias de ARN/mL)
Figura 1. Algoritmo para la cuantificación de la carga viral del VIH
ALGORITMO PARA LA CUANTIFICACIÓN DE SUBPOBALCIÓN DE
LINFOCITOS CD4, CD8, CD3
Carga Viral
Versión No.01
Página 17 de 28
InDRE-RNLSP
Muestra de sangre total obtenida en tubo con EDTA
Agitar durante 30 minutos a temperatura ambiente
Mezclar 20 µL del anticuerpo monoclonal triple anti
CD4, antiCD8 y anti CD3 + 100 µL de sangre
Incubar durante 20 minutos a temperatura
ambiente y en la obscuridad
Preparar la muestra (lisa,
estabiliza y fija)
Leer a las muestras, el número de células
CD4, CD8, CD3 y % de cada subpoblación
en el citómetro de flujo
Reportar el número de células/µL de
CD4, CD8 y relaciones CD4/CD8,
CD4/CD3 y CD8/CD3
Figura 2. Algoritmo para la cuantificación de linfocitos CD4, CD8, CD3
Carga Viral
Versión No.01
Página 18 de 28
InDRE-RNLSP
Captura de datos y resultados
La captura de los datos se realiza en bitácoras de registro donde se concentran todos los
datos generados en el laboratorio, posteriormente los resultados se incorporan a la
plataforma “INFOLABW” y finalmente se liberan por parte del jefe de laboratorio.
ESTÁNDARES DE CALIDAD
Cuantificación de carga viral
Indicador de oportunidad
Cumplir con la emisión de los resultados de diagnóstico en 16 días en por lo menos el 90%
de las muestras recibidas = resultados de diagnósticos informados en 16 días/número de
muestras recibidas para diagnóstico X 100.
Indicador de confiabilidad
Cumplir con el 90% o más del Programa de Evaluación Externa del Desempeño (PEED)
para este diagnóstico = paneles aprobados con el 90% o más/paneles recibidos X 100.
Cuantificación de linfocitos
Indicador de oportunidad
Cumplir con las emisión de los resultados de diagnóstico en tres días en por lo menos el
90% de las muestras recibidas = resultados de diagnósticos informados en 3 días/número de
muestras recibidas para diagnóstico X 100.
Indicador de confiabilidad
Cumplir con el 90% o más del PEED para este diagnóstico = paneles aprobados con el 90%
o más/paneles recibidos X 100.
PROGRAMA DE EVALUACIÓN EXTERNA DEL DESEMPEÑO
El PEED como tal no aplica para la Red Nacional de Laboratorios Estatales de Salud
Pública. Sin embargo, actualmente se cuenta con un programa de evaluación externa en el
cual participa el laboratorio de carga viral del InDRE y el laboratorio de referencia
internacional “CARPERMOR” para la cuantificación de subpoblación de linfocitos CD4,
CD8 y CD3; y un programa de evaluación externa en el cual participa el laboratorio de
carga viral del InDRE y el laboratorio de genética molecular para la cuantificación de la
carga viral de VIH.
El programa consiste en enviar un panel de 5 muestras de sangre total con EDTA como
anticoagulante cada 4 meses (cuatrimestral). El InDRE realiza el primer y tercer envío de
los paneles al laboratorio de referencia internacional “CARPERMOR” y genética
Carga Viral
Versión No.01
Página 19 de 28
InDRE-RNLSP
molecular, mientras que estos últimos proporcionan las muestras de los paneles segundo y
cuarto que se envían al InDRE.
Posterior al análisis de las muestras, se realiza el análisis estadístico en el cual se debe dar
cumplimiento al indicador de confiabilidad que es del 90%.
Criterios para la liberación del diagnóstico
Carga viral
En cada corrida de muestras se debe incluir un control negativo, un control positivo bajo
para VIH-1 y un control positivo alto para VIH-1. La corrida de muestras es válida y se
elabora el informe de resultados si no aparece alguna notificación que invalide los
controles.
1. Control negativo
El control negativo (-) debe dar un resultado “Target not detected” lo que se
interpreta como carga viral no detectable o que la carga está por debajo del límite de
detección del método. Si el resultado obtenido para el control negativo lleva
asociado el aviso “Invalid” (no válido), toda la corrida es inválida y debe de
repetirse.
2. Controles positivos
El intervalo asignado tanto para el control positivo bajo como para el control
positivo alto es específico para cada lote de reactivo; está incluido en los códigos de
barras de los casetes de reactivo para la prueba.
Los valores de copias del ARN del HIV-1/mL obtenido para los controles positivos
deben estar dentro de los respectivos intervalos asignados. Si uno o ambas controles
positivos tienen el aviso de no válido, toda la corrida es inválida y debe de repetirse.
Cuantificación de subpoblación de linfocitos CD4, CD8 Y CD3
1. Se utiliza el FLOW CHECK para determinar el buen funcionamiento del equipo con
respecto al sistema hidráulico y óptico ya que permite ajustar el canal de lectura y
determinar si los voltajes son los adecuados.
2. Se utiliza el INMUNO-TROL como un control interno que valida el ensayo. Es una
muestra de sangre total con valores conocidos, de manera que se toma como
referencia de las poblaciones linfocitarias CD4, CD8 y CD3 por lo que cualquier
desviación de los datos reportados en la técnica del INMUNOTROL se toma como
un desajuste del equipo.
Carga Viral
Versión No.01
Página 20 de 28
InDRE-RNLSP
Obtener valores de las poblaciones linfocitarias CD4, CD8 y CD3 dentro del rango
estipulado en la técnica del INMUNO-TROL, brinda la certeza de que los valores
obtenidos en el análisis de las muestras son reales.
Banco de material biológico
Con el objetivo de mantener el banco de material biológico, que sirva para la realización de
los paneles de eficiencia, así como la obtención de controles de referencia, o para estudios
que permitan la implementación de nuevas técnicas de diagnóstico, actualmente se cuenta
en el laboratorio de carga viral del InDRE con el banco de muestras que son conservadas en
congelación, y que provienen de los diferentes LESP y de instituciones públicas y privadas
del país.
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
El laboratorio de carga viral participa en el curso anual de Bases y fundamentos de los
métodos de diagnóstico por el laboratorio para infecciones de transmisión sexual.
Cronograma de actividades
Actividad
Ene Feb Mar
Abr May Jun
Jul Ago
Sep
Oct
Nov
Dic
XX
Curso teórico-práctico
Envío del primer panel a los
XX
laboratorios CARPERMOR
y genética molecular
Recepción de resultados del
XX
panel en el INDRE
Envío de resultados a los
XX
laboratorios CARPERMOR
y genética molecular
Envío del segundo panel a
los laboratorios
XX
CARPERMOR y genética
molecular
Recepción de resultados del
XX
panel en el InDRE
Envío de resultados a los
XX
laboratorios CARPERMOR
y genética molecular
Nota: Si alguna de las fechas corresponde a un día no laborable, la actividad se realizará el
siguiente día hábil.
Carga Viral
Versión No.01
Página 21 de 28
InDRE-RNLSP
BIBLIOGRAFÍA
1. Palmer S, Wiegand AP, Maldarelli F, Bazmi H, et al. new real-time reverse
transcriptase-initiated PCR assay with single-copy sensitivity for human
immunodeficiency virus type 1 RNA in plasma J Clin Microbiol. 2003; 41:45314536.
2. Kuritzkes DR. Quantification of human immunodeficiency virus type 1 by reverse
transcriptase-coupled polymerase chain reaction. J Infect Dis. 2004; 190:2047-2054.
3. Ju Lin H, Haywood M, and Hollinger FB. Application of a commercial kit for
detection of PCR products to quantification of human immunodeficiency virus type
1 RNA and proviral DNA. J Clin Microbiol. 1996; 34:329-333.
4. Mulder J, McKinney N, Christopherson C, Sninsky J, Greenfield L, and Kwok S.
Rapid and simple PCR assay for quantitation of human immunodeficiency virus
type 1 RNA in plasma: application to acute retroviral infection. J Clin Microbiol.
1994; 32:292-300.
5. O’Brien WA, Hartigan PM, Martin D, Esinhart J, Hill A, et al. Changes in plasma
HIV-1 RNA and CD4+ lymphocyte counts and the risk of progression to AIDS. N
Engl J Med 1996; 334:426-431.
6. Ley General de Salud, México. Nueva Ley publicada en el Diario Oficial de la
Federación el 7 de febrero de 1984. Última reforma publicada DOF 07/06/2012.
7. Reglamento Interior de la Secretaria de Salud. México. Publicado en el Diario
Oficial de la Federación el 19 de enero de 2004. Última reforma publicada en el
DOF del 10 de enero de 2011
a. Reforma aplicable: decreto que reforma, adiciona y deroga diversas
disposiciones del Reglamento Interior de la Secretaría de Salud. DOF 2 de
febrero de 2010.
8. Proyecto de Norma Oficial Mexicana PROY-NOM-017-SSA2-2012 para la
vigilancia epidemiológica.
9. Norma Oficial Mexicana NOM-010-SSA2-2010 para la Prevención y Control de la
infección por Virus de la Inmunodeficiencia Humana.
10. Norma Oficial Mexicana NOM-087-ECOL-SSA1-2002 protección ambiental-salud
ambiental-residuos peligrosos biológico-infecciosos-clasificación y especificación
de manejo.
11. Norma Oficial Mexicana NOM-007-SSA3-2011 para la organización y
funcionamiento de los laboratorios clínicos.
12. Norma Oficial Mexicana NOM-039-SSA2-2002 para la prevención y control de las
infecciones de trasmisión sexual.
13. Norma Mexicana IMNC: NMX-CC-9001-IMNC-2008, “Sistemas de gestión de
calidad-requisitos”. http://www.imnc.org.mx
14. GECA-P-01/2. Control de los Documentos y de los Registros.
15. GECA-G-01/0 Guía para la elaboración de la documentación del SGC.
Carga Viral
Versión No.01
Página 22 de 28
InDRE-RNLSP
16. Manual para la toma, envío y recepción de muestras para diagnóstico. Versión No.
01, InDRE, 2014.
17. CARV-P-01/1. Procedimiento para la recepción, registro, distribución,
almacenamiento y custodia de muestras en el Laboratorio de Carga Viral.
18. Miller MJ, et al. Guidelines for safe work practices in human and animal medical
diagnostic laboratories. MMWR Surveill Summ. 6; 61:1-102; 2012.
19. Guidelines for Biosafety Laboratory Competency. MMWR. Supplement/Vol. 60;
2011.
20. World Health Organization. Guidance on regulations for the Transport of Infectious
Substances 2013-2014; Geneva: WHO Press; 2012.
21. Chosewood C & Wilson DE. Biosafety in Microbiological and Biomedical
Laboratories–5th ed. CDC-NIH; 2009.
22. European Committee for Standardization. CWA 15793:2011 Laboratory biorisk
management standard. Brussels: CEN; 2011.
23. World Health Organization. Laboratory Biosafety Manual–3rd ed. Geneva: WHO
Press; 2004.
Carga Viral
Versión No.01
Página 23 de 28
InDRE-RNLSP
Anexo I: TÉCNICAS DIAGNÓSTICAS
Método para la determinación de linfocitos CD4, CD8 y CD3.
1. Realizar la recepción de la muestra de acuerdo con la ficha de proceso de
subpoblaciones linfocitarias CD4/CD8/CD3 para individuos infectados con el VIH.
2. Llevar a temperatura ambiente todos los reactivos necesarios para la realización de
la prueba.
3. Colocar los tubos de muestra e Inmuno-trol en el agitador de tubos durante 30
minutos.
4. Llenar el formato para la determinación de linfocitos CD4, CD8 y CD3.
5. Rotular todos los tubos de plástico necesarios para el análisis; los Inmuno-trol y
todas las muestras.
6. Adicionar 20 µL del anticuerpo OptiClone Monoclonal Antibodies CD4FITC/CD8-PE/CD3-PC5 a cada tubo y 100 µL de cada muestra o Inmuno-trol,
mezclar. Incubar durante 20 minutos a temperatura ambiente y en la obscuridad;
regresar a refrigeración (2-8 °C) el tubo del Inmuno-trol y el frasco del anticuerpo.
Nota: Durante esta incubación se recomienda encender el equipo Q-Prep y realizar la purga
de los tres reactivos: A, B y C.
7. Registrar la hora de inicio en la bitácora de uso del equipo Q-Prep.
8. Preparar la muestra de acuerdo con el instructivo para el manejo del Q-Prep.
9. Registrar la hora de término en la bitácora de uso del equipo Q-Prep.
10. Encender el citómetro de flujo Beckman Coulter Epics XL-MCL y esperar a que se
optimice el sistema, esto puede tardar aproximadamente 30 minutos, registrar la
hora de inicio en la bitácora de uso del citómetro de flujo Beckman Coulter Epics
XL-MCL.
11. Una vez listo el citómetro, llevar a cabo el mantenimiento con el panel “Cleaning
Panel”, como lo indica el instructivo para el manejo del citómetro de flujo Marca
Beckman Coulter Epics XL-MCL.
12. Agitar de 4 a 5 veces por inversión el frasco del Flow Check y adicionar
aproximadamente 20 gotas a un tubo de plástico limpio y rotulado. Posteriormente,
realizar el Protocolo “Qxzy Flow Check, ajustando los voltajes si es necesario.
Nota: Se recomienda que los coeficientes de variación de los histogramas no sean mayores
a 2.
13. Imprimir los histogramas correspondientes al corrimiento del Flow Check.
14. Agitar vigorosamente en el vórtex las perlas FLOW-COUNT Fluorospheres y
adicionar 100 µL al tubo del Inmuno-trol (utilizar la misma pipeta con la que se
Carga Viral
Versión No.01
Página 24 de 28
InDRE-RNLSP
colocó la muestra); y correr el Panel Inmuno-trol, ajustando los valores de los
voltajes y compensación en caso de que sea necesario.
15. Guardar el archivo con las siglas CN y la hora del día, imprimir el archivo generado
y revisar que los valores y los porcentajes de las células CD4, CD8 y CD3 estén
dentro de los rangos estipulados de acuerdo con la técnica del lote del kit. En caso
de que no se cumplan estos valores, preparar de nuevo el Inmuno-trol, como se
indicó anteriormente.
Nota: Estos rangos de valores son específicos para cada lote de kit, por lo que deberán
cambiar cada que se trabaje con un lote nuevo del kit FLOW-COUNT Fluorospheres.
16. Adicionar 100 µL de las perlas FLOW-COUNT Fluorospheres a cada tubo de
muestra (utilizar la misma pipeta con la que se colocó la muestra) y correr el panel
de subpoblaciones, ajustando los valores de los voltajes y compensación en caso de
que sea necesario.
17. Guardar el archivo con el número de identificación de la muestra, así como la fecha
y hora del día en que se procesó.
Nota: Durante el análisis del Inmuno-trol y muestras se pueden realizar purgas al equipo si
así se requiere
18. Registrar la hora de término en la bitácora de uso del citómetro de flujo Beckman
Coulter Epics XL-MCL.
19. Registrar en la bitácora de resultados los valores obtenidos de CD4, CD8 y CD3.
20. Archivar las hojas impresas en la carpeta de Inmuno-trol y Flow-Check.
21. Realizar el cálculo de las relaciones CD4/CD8, CD4/CD3 y CD8/CD3.
22. Reportar los resultados en el sistema INFOLAB.
23. Imprimir la hoja de resultados del sistema.
24. Llenar el formato de entrega de resultados e imprimir dos copias.
25. Llevar al área de recepción de muestras los resultados y entregar la hoja generada
por el sistema INFOLAB y una copia del formato.
26. Solicitar la firma del personal de recepción de muestras en la otra copia del formato.
Método para la cuantificación de carga viral; cuantificación del ARN del Virus de la
Inmunodeficiencia Humana tipo 1 (VIH-1)
1. Realizar la recepción de la muestra de acuerdo con la ficha de proceso de carga viral
para personas infectadas con el VIH.
2. Centrifugar las muestras a 3,500 rpm durante 15 minutos de acuerdo con el
instructivo para el manejo de centrifuga refrigerada marca: HERMLE Z300K.
Carga Viral
Versión No.01
Página 25 de 28
InDRE-RNLSP
3. Rotular tubos de polipropileno de 2 mL con los números de identificación de cada
muestra.
4. Separar el plasma y colocarlo en los tubos de polipropileno de 2 mL, se deben hacer
alícuotas de 1,100 a 1,200 µL.
Nota: Si la muestra no se procesara en ese momento, se debe congelar a -70 °C hasta la
realización de la prueba.
5. Sanitizar el gabinete de bioseguridad de acuerdo con el instructivo para el manejo
del gabinete de bioseguridad.
6. Llevar a cabo el mantenimiento del equipo Cobas AmpliPrep de acuerdo con el
instructivo para el manejo del mismo.
7. Llevar a temperatura ambiente todas las muestras y reactivos necesarios para la
realización de la prueba, los cassettes contenidos en el kit Cobas/AmpliPrep/Cobas
TaqMan HIV-1 Test se deben introducir al equipo Cobas AmpliPrep para
atemperar.
8. Llenar el formato para la cuantificación de carga viral.
9. Utilizar guantes, para poner los clips de los controles y muestras en la gradilla para
muestras, cuidar que los códigos de barras de los clips queden del mismo lado del
código de barras de la gradilla.
10. La posición correcta de los clips es: Clip CN (azul), clip CPL (amarillo), clip CPH
(rojo) y clips de muestras (blancos).
11. Colocar la cantidad de tubos S necesarios para todas las muestras sobre la gradilla
de muestras.
12. Rotular los clips con el número de identificación de cada muestra.
13. Envasar en los tubos S un volumen de 1,100 µL de cada muestra.
Nota: Se debe homogeneizar perfectamente cada muestra con la ayuda de un agitador tipo
vórtex, ya cargadas las muestras, aflojar un poco las tapas de los tubos para que el equipo
pueda retirarlas bien tapas.
14. Cargar reactivos y consumibles de acuerdo al instructivo para el manejo del Cobas
AmpliPrep.
15. En la pestaña “Orders” realizar una orden de trabajo en la que registre la
identificación de cada muestra y control; seleccionar el protocolo HIMCAP48, al
finalizar dar click en la pestaña “Save”.
16. Colocar los tubos K junto a cada muestra y control en la gradilla de muestras.
17. Inspeccionar que asienten bien los clips de código de barras así como los tubos S y
los K.
Carga Viral
Versión No.01
Página 26 de 28
InDRE-RNLSP
18. Cargar la gradilla de muestras de acuerdo con el instructivo para el manejo del
Cobas AmpliPrep.
19. Leer los códigos de barras de la gradilla para K-carrier y del K-carrier en un
intervalo menor a 5 segundos.
20. Inserte la gradilla del K-carrier de acuerdo con el instructivo para el manejo del
Cobas AmpliPrep.
21. Finalmente inspeccione por última vez el estado del sistema.
22. Presione Start
Nota: Se debe tomar en cuenta la hora de finalización del proceso en el equipo Cobas
AmpliPrep.
23. Encender el equipo Cobas TaqMan 48 de acuerdo con el instructivo para el manejo
del mismo.
24. Remover el K-carrier preparado por el equipo Cobas AmpliPrep con ayuda del
trasportador de K-carrier e introducirlo al equipo Cobas taqman48, este paso se
debe hacer antes de las 2 horas próximas de haber terminado la extracción.
25. En la pantalla de la computadora, seleccionar la pestaña del equipo Cobas TaqMan
48 y dar click en “Start”.
26. Retirar los cassettes de reactivos del Cobas AmpliPrep y almacenar de 4-8 °C.
27. Encender la luz ultravioleta “UV” de acuerdo al instructivo para el manejo del
Cobas AmpliPrep, elimine los desechos en la bolsa roja de recolección de RPBI y
apagué el equipo.
28. Al finalizar la amplificación y detección, sacar el K-carrier de equipo Cobas
TaqMan 48, desechar los tubos en la bolsa roja y anotar la hora de término en la
bitácora de uso del equipo Cobas AmpliPrep y Cobas TaqMan 48.
29. Aceptar e imprimir los resultados del software Amplilink.
30. Registrar en la Bitácora de Resultados de Carga Viral, los resultados obtenidos.
31. Reportar los resultados en el sistema INFOLAB.
32. Imprimir el informe de resultados del sistema.
33. Llenar el formato de entrega de resultados e imprimir dos copias.
34. Llevar al área de recepción de muestras los resultados y entregar la hoja generada
del sistema INFOLAB, una copia del formato Entrega de resultados y la historia
clínica del paciente.
35. Solicitar la firma del personal de Recepción de muestras en la otra copia del formato
Entrega de resultados y archivarla.
Carga Viral
Versión No.01
Página 27 de 28
InDRE-RNLSP
Anexo II: CARACTERÍSTICAS DE EQUIPOS COMERCIALES
Los miembros de la RNLSP deberán utilizar solo los reactivos que ha sido evaluados y
aprobados por el Laboratorio de Carga Viral del InDRE mismos que se informan de manera
anual a los representantes de cada uno de los laboratorios de la red, que acuden a las
reuniones regionales y nacionales.
Anexo III: PREPARACIÓN DE REACTIVOS
Los reactivos que se utilizan en las determinaciones de carga viral y subpoblaciones de
linfocitos CD4, CD8 y CD3 son comerciales y se reciben listos para su utilización.
Carga Viral
Versión No.01
Página 28 de 28
InDRE-RNLSP