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ATOLOGÍA. Avances en el estudio de las diferentes cepas de Mixomatosis en España
PATOLOGÍA
AVANCES en el
ESTUDIO de las
DIFERENTES CEPAS
de MIXOMATOSIS
en España
Reunión INTERCÚN
El pasado 21 de enero se celebró en Madrid la
reunión de seguimiento técnico de INTERCÚN en las
dependencias del INIA y bajo la dirección de Gregorio
Rodríguez. Veintidós fueron los técnicos del sector que
acudieron a la cita representando todas las zonas
geográficas de España y sectores involucrados: técnicos
de campo, de mataderos, de fábricas de pienso y de
laboratorios.
La jornada comenzó con la exposición de Francisco
Parra, de la Universidad de Oviedo, del informe de
actividades y resultados obtenidos hasta el 31 de octubre
del 2009 del impacto de la mixomatosis en la cunicultura
Española, análisis de las causas y propuesta de
actuaciones y diseño de productos inmunológicos que
permitan el control y seguimiento de esta enfermedad.
Los objetivos del estudio financiado por
INTERCUN y realizados por Francisco Parra son tres:
1. Estudio de los virus circulantes y su relación
con los virus vacunales.
2. Desarrollo de métodos de diagnóstico
diferencial entre virus campo y virus vacunales.
3. Mejora del manejo de la enfermedad,
Es evidente, y así lo recalcó en su exposición, que
son muchos los factores que influyen en la correcta
respuesta inmunitaria de los animales frente a una
enfermedad de origen vírico como la mixomatosis que
es altamente contagiosa y que se conjuga con la
susceptibilidad del hospedador —el conejo— que es
muy variable. Actualmente no existe un programa de
aplicación general en las granjas españolas, por lo que
cada productor se adapta a las circunstancias y
recomendaciones de su veterinario para su explotación.
El libro de ruta que Parra y su equipo ha ido
siguiendo se ha centrado primero en conocer el virus,
del que a pesar del tiempo que hace que lo conocemos
y de la patología que genera con sus consecuencias
económicas posteriores, es realmente un virus no
excesivamente estudiado.
Francisco Parra en un momento de su exposición sobre las
investigaciones llevadas a cabo acerca de la mixomatosis.
Las actividades que se han seguido son:
a. Organización de una red de técnicos
colaboradores para la recogida de muestras de
animales con signos de mixomatosis.
b. Elaboración de un protocolo de toma de
muestras y diseño de formulario de encuesta para
la recogida de datos en las granjas muestreadas.
c. Puesta a punto de métodos de aislamiento y
propagación del virus en el laboratorio utilizando
cultivos de células RK13.
d. Optimización de un protocolo simplificado de
purificación de virus mixomatosis.
e. Selección de genes y regiones intergénicas para
su uso en técnicas de tipificación genómica del
virus mixomatosis.
f. Puesta a punto sistemas RFLP tanto en genomas
completas del virus como en las regiones 5’ y 3’
LTR de estos virus amplificados por PCR.
Una vez estudiados los resultados y experiencias del
primer año se plantearon una serie de objetivos para
el 2009:
a. Recogida de muestras de animales en toda la
geografía española para el aislamiento de virus
mixoma y su caracterización genómica y
antigénica.
b. Análisis de los perfiles antigénicos de los
viriones purificados.
c. Utilización PCR-secuenciación y/o RFLP para la
tipificación viral e investigación de las relaciones
de parentesco entre los distintos virus aislados
de mixomatosis.
d. Selección de genes ausentes o truncados en
cepas vacunales para su expresión heteróloga.
Partiendo de las experiencias que hasta ahora se
han realizado, una de las conclusiones que se han
realizado en la metodología de trabajo es que es
extremadamente difícil observar diferencias en los
Febrero 2010
cunicultura
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ATOLOGÍA. Avances en el estudio de las diferentes cepas de Mixomatosis en España
antígenos virales de animales infectados respecto a
animales vacunados. Por tanto se ha decidido que es
preferible realizar de forma sistemática la extracción
de DNA viral para su posterior amplificación de algunos
genes con utilidad diagnóstica. En concreto las regiones
terminales repetidas (LTR) del genoma viral.
En los diferentes estudios que se han realizado
para observar la composición de proteínas del virus
los resultados no han sido fáciles porque hay muchísima
contaminación de restos celulares que dificultan su
caracterización.
Trabajando en los perfiles antigénicos sí que se
observan diferencias entre Virus Lausanne (es la cepa
de referencia del virus de mixomatosis), virus vacunales
y virus campo, aunque muy pequeñas, y además, sujetas
a gran variabilidad entre los resultados obtenidos en
animales infectados por el mismo tipo de virus. También
se observa una gran variabilidad en perfiles antigénicos
con sueros de campo, siendo difícil de reconocerlos en
una preparación antigénica.
La línea de investigación más esperanzadora es el
análisis de genes ausentes o truncados en las cepas
vacunales respecto el virus campo. Esta línea de
investigación pretende identificar alteraciones en las
cepas que permitan utilizarlos en técnicas de diagnóstico
diferencial posteriores. Es conocido que las regionales
terminales repetidas de los virus (LTR) son muy
susceptibles a grandes cambios, y aquí es donde se
dedican esfuerzos laboratoriales.
En los resultados se observa que en dos de las
cepas vacunales hay una fuerte pérdida de material
genético en la región terminal izquierda, mientras que
la otra cepa vacunal existente se encuentra en la región
terminal derecha. Estas diferencias génicas junto con
otras que se están estudiando —en estos momentos
han secuenciado el 10 % del genoma del virus— podrían
establecer el primer paso para separar mediante análisis
fiables las cepas vacunales de las cepas campo y también
poder diferencias las diferentes cepas campo que
pudieran haber.
Francisco Parra expuso a continuación el plan de
trabajo propuesto para seguir investigando acerca de
la mixomatosis.
• Clonar y expresar en E. coli genes con potencial
de antígenos diagnósticos.
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• Obtención de una colección de sueros específicos
de virus vacunales y silvestres.
• Puesta a punto de ensayos ELISA sencillos para
diagnóstico de mixomatosis tanto a nivel general
como diferencial.
• Realizar un estudio epidemiológico molecular
de virus de mixomatosis.
• Ampliar las muestras de virus campo con la
adición de virus procedentes de animales
domésticos y sobretodo de animales silvestres,
posibles portadores de los virus.
• Investigación de haplotipos de los virus
circulantes.
Parra recalcó que en estos momentos ya es posible
empezar a diferenciar virus campo respecto a virus
vacunales, aunque el procedimiento aún no está
estandarizado. Éste es uno de los objetivos primordiales
de este año, aproximar el sistema diagnóstico para
diferenciar fácilmente las cepas campo de las cepas
vacunales.
La jornada continuó abordando la temática de la
información de la cadena alimentaria que se ha puesto
en marcha el uno de enero de este año. Se resaltó la
normalidad que ha funcionado todo sin haber habido
incidencias dignas de ser nombradas. Se recalcó que
siempre se trata de un documento privado entre el
matadero que sacrifica los conejos y la granja que los
suministra. Se debatió las diferentes soluciones que se
han ido dando para solucionar la problemática de registros
de medicamentos para cunicultura así como la situación
de diversas moléculas en fase de aprobación.
Posteriormente se explicó el funcionamiento de
la lonja ibérica detalladamente y como la plantilla
concreta el precio estimado de la semana próxima. Se
discutió brevemente la potencia del diseño y su
validación como medio de estimación del precio de lonja
sin tener ventaja ninguno de los sectores implicados y
poder tener una representación amplia ambos sectores
por igual. Lógicamente se abordó la unificación de
lonjas a nivel de España, pero se constató que las
diferencias eran aún demasiado grandes para que en un
futuro muy cercano pudiera darse la situación de
unificación, aunque evidentemente se dio por sentado
que ese es el objetivo a medio plazo para poder unificar
la lonja ibérica. ◆