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Caracterización de células madre embrionarias de ratón
obtenidas a partir de embriones en estadio de blastocisto
Fagundez Carol1, Delcourt Stella1, Ojea Quintana Marcos1, Gogorza Sebastián2, Testa Roberto2,
Argibay Pablo1
1. Instituto de Ciencias Básicas y Medicina Experimental – Hospital Italiano de Buenos Aires
2. Servicio de Ginecología – Hospital Italiano de Buenos Aires
INTRODUCCIÓN
Las células madre embrionarias de ratón (CMEr) son células indiferenciadas que pueden autorrenovarse
durante largos periodos de tiempo conservando aún su pluripotencia. Estas células poseen una alta
relación núcleo/citoplasma y expresan ciertos genes y productos génicos asociados con la
autorrenovación y pluripotencia, tales como el factor de transcripción de unión a octámero - 4 (Oct-4),
nanog y sox 2. Además, expresan el antígeno embrionario estadio específico (SSEA-1) y muestran
actividad enzimática para fosfatasa alcalina (ALP) y telomerasa. Durante el cultivo in vitro mantienen un
cariotipo relativamente estable, y al ser crecidas en suspensión pueden originar cuerpos embrioides
(EBs) así como formar teratomas al ser inyectados en ratones inmunosuprimidos.
El objetivo de este trabajo es derivar y cultivar CMEr a partir de embriones que hayan alcanzado el
estadio de blastocisto eclosionado y proceder a su caracterización con el fin de obtener una línea celular.
MATERIALES Y MÉTODOS
Embriones en estadio de dos células fueron obtenidos de ratones hembra superovuladas de la cepa
C57BL/6 y cultivados en medio HTF hasta el estadio de blastocisto eclosionado, los cuales fueron luego
sembrados sobre una capa de fibroblastos embrionarios de ratón irradiados y crecidos en medio DMEM
knock-out suplementado con suero de reemplazo hasta la obtención de las primeras colonias. Éstas
fueron repicadas sucesivamente mediante disgregación mecánica. La verificación del estado
indiferenciado se realizó mediante la detección de la actividad ALP y la presencia de los marcadores
SSEA-1 y Oct-4 . La evaluación de la pluripotencia se hizo mediante la formación de EBs.
RESULTADOS
Hasta el momento se han podido derivar 13 colonias de CMEr, de las cuales una de ellas continúa en
proliferación y ha podido ser caracterizada. La misma ha dado resultados positivos tanto para ALP
(Fig.1B) como para la marcación con los anticuerpos anti-SSEA-1 (Fig.1C) y anti-Oct-4 (Fig.1D), además
de mostrar la morfología característica de las colonias CMEr (Fig.1A). Los EBs obtenidos han mostrado el
típico aspecto quístico y la formación de estructuras semejantes a sacos vitelinos (Fig.2 A,B). La tinción
con hematoxilina y eosina ha revelado la formación de estructuras variadas dentro de los EBs (Fig.2
C,D), mientras que las células derivadas de éstos que se adhirieron a la placa de cultivo demostraron
diferenciarse espontáneamente a derivados de endodermo, mesodermo y ectodermo (Fig.3).
CONCLUSIÓN
Ha sido posible obtener colonias de CMEr a partir de blastocistos, pudiendo conservarse su estado
indiferenciado durante varios pasajes.