Download Sensibilidad A Antibióticos Y Productos Cúpricos De Bacterias
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Fotos: Farfán, 2009 Asohofrucol LINA FARFÁN I.A. Ph.D LILLIANA HOYOS Mic. Agrícola y veterinaria PUJ Universidad Nacional de Colombia Profesora Asistente Universidad Nacional de Colombia Universidad Nacional de Colombia Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural Presente en cultivos de Maracuyá y Gulupa. Causada por un complejo de bacterias: Xanthomonas spp. Enfermedad muy limitante en gulupa: - Erradicación de cultivos. - de ganancias. - Costos de producción : Aplicaciones químicas. Xanthomonadales Enterobacteriales Pseudomonadales Burkholderiales Xanthomonas Erwinia y Pantoea Pseudomonas, Burkholderia, Stenotrophomonas. (Agrios, 2005) Resistencia Estreptomicina (Quezado et al., 2003) Validamicina (Ishikawa et al., 2004) Oxitetraciclina (Mac Manus et al., 2002) Productos cúpricos (Spotts & Cervantes, 1995) (Benítez et al, 2009) Aplicación de productos químicos. Antibióticos Cultivo Maracuyá Productos Cúpricos Estreptomicina Kasugamicina Validamicina Oxitetraciclina Oxicloruro de Cobre Sulfato de Cobre Resistencia Natural Plásmido pEa34 Adquirida Genes cop. Evaluar la sensibilidad de cepas bacterianas asociadas a bacteriosis en gulupa, a algunos antibióticos y productos cúpricos de uso agrícola. • Establecer la sensibilidad de las bacterias asociadas a bacteriosis en cultivos gulupa, frente a seis antibióticos: Ampicilina, Cloranfenicol, Kasugamicina, Oxitetraciclina, Sulfato de estreptomicina, Sulfato de Kanamicina y Validamicina. • Establecer la sensibilidad de las bacterias asociadas a bacteriosis en cultivos gulupa, frente a dos productos cúpricos de uso agrícola: Sulfato de cobre y Oxicloruro de cobre. Siembra M. Biológico Material Biológico (Shenge et al., 2006) Preparación suspensiones bacterianas 119 cepas bacterianas Antioquia - Cundinamarca Boyacá -Caldas Cauca - Huila Meta - Risaralda Santander - Valle del Cauca Xanthomonas spp. Erwinia spp. Pantoea spp. Burkholderia spp. Stenophomonas spp. 1 X 10 8 UFC/mL Siembra de 3 gotas 10µl en superficie del medios suplementados. Control: AN Incubación 28ºC/ 48 ‘72h. Evaluación de sensibilidad P. Cúpricos Método Incorporación en Agar (Quezado et al., 2003; Loper et al.,1991) Sul. Estr., Oxitetrac. y Kanam.= 25ppm Cloran. y Ampi.= 50ppm Kasug. y Valid.= 250ppm Sul. y Oxic. de cobre=750ppm Siembra suspensiones bacterianas Sensible: No crecimiento No. de cepas sensibles y tolerantes a c/producto. Antibióticos Tolerante: Crecimiento Sensibilidad de las cepas, de acuerdo al número de antibióticos evaluados. No. cepas tolerantes por departamentos. A. B. C. Aislamientos sensibles (A) Aislamientos Resistentes o insensibles (B) Determinación de antibiotipo aislamientos (Damaso, 1990). Resistencia: Mecanismos Bioquímicos (Castro, 1995). Control (C) Antibiótico Evaluado Concentración Evaluada No. Cepas Sensibles Géneros Bacterianos Sensibles No. Cepas Resistentes Géneros Bacterianos Resistentes Sulfato de Kanamicina Sulfato de Estreptomicina Cloranfenicol 25ppm 4 Bk, 40 Er, 9 Pt, 5 Ps, 13 Xs, 10 NI. 50ppm Kasugamicina 200ppm Validamicina 200ppm 30 (27%) 24 (21%) 19 (17%) 105 (87%) 58 (50,5%) 114 (95,5%) 1 Bk, 14 Er, 3 Pt, 2 Ps, 6 Xs, 4 NI. Ampicilina 89 (73%) 95 (79%) 100 (83%) 14 (13%) 61 (49,5%) 5 (4,5%) 18 (70%) 3Bk, 2Er, 2Pt, 3Ps, 8Xs. 8 (30%) 2Bk, 3Er, 1Pt, 2Xs. Oxitetraciclina 25ppm 50ppm 25ppm (22 cepas) 5 Bk, 44 Er, 10 Pt, 5 Ps, Xs, 10 NI. 4 Bk, 45 Er, 11 Pt, 7 Ps, 16 Xs, 9 NI. 1 Bk, 7 Er, 3 Pt, 1 Ps, 2 Xs. 4 Bk, 25 Er, 6 Pt, 5 Ps, 8 Xs, 7 NI. 1 Er, 1 Pt, 1 Ps, 2 NI. 10 Er, 2 Pt, 2 Ps, 5 Xs, 4 NI. 1 Bk, 9 Er, 1 Pt, 3 Xs, 5 NI. 4 Bk, 47 Er, 9 Pt, 6 Ps, 17 Xs, 14 NI. 1 Bk, 29 Er, 6 Pt, 2 Ps, 11 Xs, 7 NI. 5 Bk, 53 Er, 11 Pt, 6 Ps, 19 Xs, 12 NI Bk: Burkholderia sp.; Er: cf Erwinia sp.; Pt: Pantoea sp.; Ps: Pseudomonas sp.; Xs: Xanthomonas sp.; NI: No identificados. Kasugamicina Resist. Cromosómica o extracromosómica. Concentraciones (Sales et al., 2005) (Damaso, 1990) Resistencia en bacterias epifitas. Resistencia desde 60s (Macmanus et al., 2002) Sul. Estreptomicina (Sobiczewski et al., 1991) Xanthomonas sp. Pseudomonas sp. E. amylovora. (Misavage et al., 1990; Spotts & Cervantes, 1995; Russo et al., 2008) Cloranfenicol Impermeabilidad de membrana (Remo, 1993). Factor R (Remo, 1993). Ampicilina Validamicina Resis. Natural β- lactamasas (Linares, 2002) (Damaso, 1990) Resist. Natural X. campestris pv. campestris Ralstonia solanacearum (Ishikawa et al., 2004) 120 No. de aislamientos 100 80 Sensibles 60 Resistentes 40 20 0 Sulfato de Cobre Oxicloruro de cobre Producto evaluado [] denaturación de proteínas (Agrios, 2005) Sulfato de cobre Resistencia de Xanthomonas sp. a [ ] de 1-50ppm. P. syringae resistente 160ppm (Spotts & Cervantes, 1995) (Quezado et al., 2003; Maneguim et al., 2007) Aplicaciones constantes (Ministerio de Agricultura, 2007) Iones de cobre libres. (Lee et al., 1993) Oxicloruro de cobre Propagación de genes de resistencia: saprófitos y patógenos. (Quezado et al., 2003) Genes cop (Cooksey, 1993; Llacer, 2000) 40 35 No. de Cepas 30 25 20 15 10 5 0 6 Antibioticos 5 antibioticos 4 antibioticos 3 antibioticos 2 antibioticos No. de Antibióticos Resistencia cruzada (Remo, 1993). Factores R heterogénicos (Dámaso, 1990). 1 antibiotico 0 antibioticos No. de Departamento aislamientos No. Aislamientos Tolerantes SK SE CL AM KA VA OX Antioquia 2 0 0 0 2 1 2 0 Boyacá 11 2 1 2 11 5 9 0 Caldas Cundinamarca 4 70 0 10 0 8 1 11 2 52 2 26 4 59 0 16 Huila 5 1 0 2 5 3 5 0 Meta 2 2 2 1 2 2 2 0 Risaralda 3 2 0 1 3 3 3 0 Tolima Valle del Cauca 9 5 4 1 9 6 9 1 13 8 8 0 11 8 13 1 Total 119 30 23 19 97 56 106 18 SK: Sulfato de kanamicina; SE: Sulfato de estreptomicina; CL: Cloranfenicol; AM: Ampicilina; KA: Kasugamicina; VA: Validamicina; OX; Oxitetraciclina Valle del Cauca Control X. campestris pv. passiflorae en plantas de maracuyá. Sul. estreptomicina e hidr. Cobre. (1000-3000 ppm) (Castillo & Granada, 1995) (Castillo & Granada, 1995) Kasugamicina Más empleados en plantaciones gulupa. (Angulo, 2009) Prod. cobre Sul. estreptomicina Aplicaciones Resistencia: cultivos de manzano. (Cooksey, 1990) Antioquia, Caldas, Huila y Risaralda = Resistencia Fotos: Farfán, 2009 Con base en las menores concentraciones empleadas, Sulfato de estreptomicina presento el mayor porcentaje de control de aislamientos bacterianos. Se encontró, que los mayores índices de tolerancia a antibioticos se presentaron en las evaluaciones con ampicilina y validamicina. Se obtuvo aislamientos tolerantes a oxitetraciclina, pertenecientes a los géneros de Burkholderia spp., Erwinia spp., Pantoea spp. y Xanthomonas spp. Se encontró, que Sulfato de cobre ejerció control sobre la totalidad de la población evaluada. Fotos: Farfán, 2009 El mayor número de aislamientos sensibles se obtuvo a cuatro de los siete antibióticos evaluados. Cundinamarca fue el departamento con los mayores índices de tolerancia para cada uno de los antibióticos evaluados. Las bacterias fitopatógenas asociadas a bacteriosis en gulupa (Passiflora edulis Sims.), son tolerantes oxicloruro de cobre y a los antibióticos evaluados. Los antibióticos no son efectivos para el control de bacteriosis en gulupa.