Download Muestras para DX DE VIRUS RESPIRATORIO

MINISTERIO DE SALUD
LABORATORIO CENTRAL
Tránsito Cáceres de Allende 421 – TE: (0351) 4342452
Importante:
Todas
las
muestras
deben
conservarse
REFRIGERADAS,
NO
CONGELADAS, y deben ser derivadas inmediatamente al Laboratorio para su oportuno
procesamiento.
Los resultados de las pruebas de laboratorio deben estar en un lapso no mayor a
24hs de recibida la muestra.
Muestras clínicas:
Aspirado nasofaríngeo, hisopado nasofaríngeo, hisopado nasal combinado con hisopado
faríngeo u otras muestras respiratorias como: aspirado traqueal, lavado bronquial,
lavado bronqueo-alveolar, líquido de derrame pleural o biopsias de pulmón.
Toma de muestras:
La recolección de la muestra debiera ser realizada lo antes posible luego de la aparición
de la enfermedad.
Es muy importante realizar el manejo y transporte adecuado de la muestra en términos
de condiciones y temperatura y bajo medidas de precaución para el manejo de muestras
biológicas.
El personal de salud encargado de realizar la toma de la muestra, debe colocarse los
elementos de protección personal apropiados, antes de proceder a la toma de la misma.
1. Aspirado Nasofaríngeo: Se recomienda en niños pequeños
Aspirar las secreciones faringonasales con una sonda nasogástrica conectada a una
fuente de succión (bomba de vacío o jeringa de 20 ml). Introducir la sonda en una de las
fosas nasales, hasta la pared posterior de la faringe paralelamente al paladar. Activar el
vacío y retirar suavemente la sonda con movimiento giratorio. Repetir el procedimiento
en la otra fosa nasal (las muestras de ambas fosas nasales se obtienen con la misma
sonda).
Lavar la sonda con 2 ó 3 ml de medio de transporte para descargar su contenido en un
tubo cónico. Este procedimiento final se lleva a cabo en el laboratorio cuando el
médico envía directamente al laboratorio la sonda sellada en ambos extremos.
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2. Hisopado Nasal: Se recomienda su uso en adultos
Insertar un hisopo seco de poliéster y dacrón en uno de las fosas nasales, paralelamente
al paladar; mantenerlo inmóvil por unos segundos y retirarlo suavemente realizando un
movimiento rotatorio. Repetir el procedimiento en la otra fosa nasal (las muestras de
ambas fosas nasales se obtienen con el mismo hisopo). Inmediatamente después de
haber tomado la muestra, introducir el hisopo en el tubo que contiene el medio de
transporte (2-3 ml) y cortar el aplicador para poder tapar el tubo (los hisopos siempre
deben mantenerse húmedos). En el caso de utilizar sistemas comerciales como Virocult
(TM), colocar el hisopo dentro del tubo de manera que quede en contacto con la esponja
embebida en el medio de transporte que se encuentra en el fondo del tubo.
3. Hisopado nasal y faríngeo combinados
Frotar vigorosamente con un hisopo ambas amígdalas y la faringe posterior y, con otro
hisopo, colectar la muestra de la manera ya descripta para el procedimiento en las fosas
nasales.
Los dos hisopos deberán ser colocados en un tubo cónico de plástico que contenga de 2 a
3 ml de medio de transporte para virus. Cortar el resto de los aplicadores como en el
procedimiento anterior.
Transporte de las muestras
• Las muestras deben ser transportadas refrigeradas respetando siempre las normas de
bioseguridad.
• Todas las muestras deben ser correctamente rotuladas y deben incluir la
correspondiente ficha epidemiológica.
• IMPORTANTE:
1- Para los centros que no realizan IF, las muestras deberán remitirse
inmediatamente,
SIN
NINGUN
TRATAMIENTO
PREVIO,
al
Laboratorio
correspondiente para su oportuno diagnóstico.
2- Para los centros que realizan IF, el ANF debe re suspenderse inicialmente en 2ml
de PBS o medio de transporte viral para su posterior procesamiento. De este
volumen total de muestra, se debe separar 1ml en un eppendorf estéril (utilizar
tips estériles y colocar en recipiente estéril), y conservar a 4ºC para derivar al
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Laboratorio Central en el caso de que la muestra resultara negativa para todo el
panel respiratorio o positiva para Influenza, con su correspondiente ficha clínico
epidemiológica de Influenza. Con el mililitro restante, se realizará la IF in situ.
3- Las muestras de adultos para realizar PCR (Hisopados nasofaríngeos) enviarlas
como habitualmente lo realiza, a través de la Dirección de Epidemiología de la
provincia.
Métodos:
-
Inmunofluorescencia
Directa:
La
detección
de
antígenos
virales
por
inmunofluorescencia es un método virológico rápido que puede distinguir entre 7 virus
respiratorios: VSR, ADV, influenza A y B y parainfluienza 1, 2 y 3.
- Amplificación de ácidos nucleicos virales: La detección y subtipificación del genoma
viral de Influenza A y B se realiza mediante PCR convencional o en tiempo real a partir
de muestras respiratorias.
Estrategia vigilancia epidemiológica de Infecciones Respiratorias Agudas
La vigilancia epidemiológica de Infecciones Respiratorias Agudas incluye en su
investigación a las siguientes a patologías: Enfermedad Tipo Influenza (ETI), neumonías,
bronquiolitis en menores de 2 años, coqueluche, Infecciones Respiratorias Agudas
Graves (IRAG), Infecciones Respiratorias Agudas Graves Inusitadas (IRAGI).
La vigilancia epidemiológica de Infecciones Respiratorias Agudas es esencial para la
planificación de las actividades de prevención y control, la detección de situaciones
epidémicas o de brotes, la determinación de la frecuencia y distribución de los distintos
agentes etiológicos virales y bacterianos (con el apoyo del laboratorio) y para la
evaluación antigénica y genética de nuevas cepas. Además, permite detectar brotes de
enfermedades respiratorias virales inusuales o inesperadas, calcular la carga de la
enfermedad en pacientes ambulatorios y hospitalizados, los costos relacionados con la
enfermedad, describir la magnitud de las enfermedades respiratorias y la distribución
de casos por grupos de edad, tiempo y lugar geográfico, con el objetivo de orientar las
políticas para la prevención y control entre ellas la composición de la vacuna de
influenza y los grupos prioritarios a vacunar.
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La vigilancia epidemiológica frente a los brotes estacionales de Infecciones Respiratorias
Bajas (IRB), nos permite tomar decisiones con respecto a la organización de los servicio
(tanto ambulatorios, como de internación).
Las infecciones respiratorias agudas (incluyen Enfermedad Tipo Influenza, bronquiolitis
en menores de 2 años, coqueluche y neumonías), son eventos de declaración obligatoria,
y deben ser notificados por todos los servicios de salud de los diferentes niveles, con los
procedimientos de notificación establecidos: para los servicios de atención médica a
través del módulo C2 y para los laboratorios a través del módulo SIVILA del Sistema
Nacional de Vigilancia de la Salud.
Para establecer la vigilancia tanto en los servicios de atención médica de salud, en los
laboratorios, como en las unidades centinela, se utilizan definiciones operacionales, que
corresponden a la definición de caso. Para las patologías incluidas en la vigilancia de las
Infecciones Respiratorias Agudas dichas definiciones se detallan a continuación.
Definiciones operacionales:
ETI (Enfermedad tipo influenza): Aparición súbita de fiebre superior a 38°C, más tos o
dolor de garganta y ausencia de otras causas. Puede acompañarse de mialgias y/o
postración.
Bronquiolitis en menores de 2 años: Todo niño menor de 2 años, con primer o
segundo episodio de sibilancias, asociado a evidencia clínica de infección viral con
síntomas de obstrucción bronquial periférica, taquipnea, tiraje, o espiración prolongada,
con o sin fiebre.
Neumonía: Enfermedad respiratoria aguda febril (> 38°) con tos, dificultad respiratoria
y taquipnea.
IRAG (Infección respiratoria aguda grave) (Para individuos de cinco y más años):
todo paciente con infección respiratoria aguda que requiere internación. Comprende
diferentes cuadros de enfermedad respiratorias entre los que se encuentra la
Enfermedad Tipo Influenza y la Neumonía.
IRAGI (Infección respiratoria aguda grave inusitada) todo paciente entre los 5 y 64
años, previamente sano, sin factores de riesgo, con infección respiratoria aguda grave.
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La vigilancia epidemiológica de Infecciones Respiratorias Agudas en Unidades
Centinela
Las Unidades Centinela están integradas por tres componentes: epidemiológico, clínico y
de laboratorio, que cumplen funciones específicas en relación con la recolección, el
análisis y la difusión de información.
La vigilancia centinela se realiza a través de la notificación por médicos centinelas (MC)
y Hospitales Centinela, quienes informan incidencia de Enfermedad Tipo Influenza
(ETI), neumonías, entre los pacientes y toman muestras para diagnóstico de virus
influenza
y
otros
virus
respiratorios,
gérmenes
comunes,
M.
pneumoniae,
Chlamydophila spp. que son analizadas por el laboratorio de la unidad centinela y el
Laboratorio Nacional de Referencia (LNR).
La información recolectada y procesada por los médicos y hospitales centinela y el LNR,
es incorporada al módulo UC de Influenza del SNVS.
El sistema de vigilancia centinela, mejora el sistema de vigilancia mediante la obtención
más rápida de los datos y el agrupamiento, la interpretación y la difusión de datos más
específicos y completos. Además, permite la confirmación de laboratorio de un número
determinado de casos elegidos sistemáticamente.
Criterio de Inclusión: Todo paciente atendido de forma ambulatoria que cumpla con la
definición de caso clínico de ETI con menos de 72 horas de iniciado los primeros
síntomas.
Tamaño de la muestra: Se debe seleccionar un número de Casos de ETI previamente
fijado para cada Centro Centinela por semana epidemiológica acorde con los recursos
existentes, entre los que se destacan:
• Insumos y/o reactivos limitados y/o equipamiento
• Recursos para bioseguridad para el MC y para el traslado de las muestras
• Existencia de condiciones para guardar muestras el fin de semana, etc.
• Horarios con RRHH con capacidad para tomar, recibir y procesar las muestras
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Tipo de Muestreo: Se recomienda el muestreo sistemático por cuotas, el cual
dependerá, en primer lugar de las capacidades del laboratorio utilizado por la Centro
Centinela y del análisis de la situación epidemiológica, como puede ser el alza estacional
en el invierno o la presencia y circulación de una nueva cepa potencialmente pandémica.
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