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Bio Optica Milano S.p.A. • via San Faustino 58 • I-20134 Milano Tel. +39 02.21.27.13.1 • Fax Acquisti/Export +39 02.21.54.155 Fax Assistenza/Contabilità +39 02.26.41.74.48 • Fax Vendite +39 02.21.53.000 GRAM Para bactérias Ref: 04-100802 - Número mínimo de test realizables ................................... 100 Tiempo de ejecución ........................................................ 40 minutos Caducidad del producto .................................................... 2 años Temperatura de almacenamiento ...................................... 15 - 25 ºC Equipo complementario.................................................... Cubeta Coplin, filtros, estufa APLICACIÓN Método de empleado para diferenciar bacterias Gram positivas de Gram negativas en secciones de tejidos y frotis PRINCIPIO La tinción de Gram es el método más importante para diferenciar especies de bacterias. Se utilizan dos reactivos de tinción, uno después de otro: cristal de violeta y fucsina. La solución de cristal de violeta precipita a través de la oxidación con una solución de yodo. El complejo resultante se une a la pared bacteriana con uniones de diferente naturaleza e intensidad. La solución de diferenciación extrae el complejo cristal de violeta / yodo de las paredes de algunas bacterias pero no de otras. Estas retienen el marcador primario y se denominan Gram-positivas. Las bacterias decoloradas se vuelven a teñir con un marcador rojo, son las llamadas Gram negativas. La capacidad de las bacterias Gram positivas de retener el complejo violeta/yodo se asocia habitualmente a la unión desarrollada entre el complejo y una molécula solo presente en la bacterias Gram positivas, llamada magnesium ribonucleato REACTIVOS A- Solución Phloxina B ....................................................... 100 ml B- Solución cristal de violeta ............................................... 30 ml C- Solución Ioduro de Gram ............................................... 30 ml D- Acetona – Limonene ...................................................... 100 ml E- Acetona – Limonene ...................................................... 100 ml MÉTODO 1- Llevar los cortes a agua destilada 2- Verter el contenido de la botella A en una cubeta Coplin, introducir la muestra e incubar a 5658ºC durante 15 minutos. Volver a verter el reactivo de la cubeta Coplin en la botella A, a través de un papel de filtro 3- Lavar en agua destilada 4- Verter sobre la muestra 10 gotas del reactivo B y dejar actuar durante 3 minutos. 5- Escurrir el porta sin lavar y verter sobre la muestra 10 gotas del reactivo C, dejar actuar durante 3 minutos. 6- Lavar con agua destilada y dejar secar al aire sobre papel de filtro durante 10 minutos 7- Verter el contenido de la botella D en una cubeta Coplin, introducir el porta y agitar durante 1 minuto. Retirar la solución a la botella D a través de un papel de filtro. 8- Repetir el paso 7 con el reactivo E 9- Limpieza en xileno y montar Partita IVA - VAT Number: IT06754140157 Tribunale di Milano REA n. 1118800 – c.c.i.a.a. di Milano Bio Optica Milano S.p.A. • via San Faustino 58 • I-20134 Milano Tel. +39 02.21.27.13.1 • Fax Acquisti/Export +39 02.21.54.155 Fax Assistenza/Contabilità +39 02.26.41.74.48 • Fax Vendite +39 02.21.53.000 RESULTADOS Bacterias Gram-positivas ......................................................................................azul Bacterias Gram-negativas..................................................................................... rojo Núcleos .............................................................................................................. rojo Revisión: octubre 2009 Partita IVA - VAT Number: IT06754140157 Tribunale di Milano REA n. 1118800 – c.c.i.a.a. di Milano
