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MEDIO DE CULTIVO Bacteriología General _ Catálogo 1079-P ___________________________________________________ AGAR PARA PRUEBA DE DNasa USO Para la demostración de la actividad de la enzima desoxirribonucleasa (Dnasa) de bacterias, hongos y especialmente en la identificación de Estafilococos Dnasa positivos a partir de diversas muestras. PRINCIPIO Las peptonas proporcionan los nutrientes necesarios para el desarrollo de los microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmótico. El DNA manifiesta la presencia de la enzima Dnasa, la cual depolimeriza al DNA. Cuando se incorpora azul de toluidina al 1% en toda la superficie del medio, toma un color azul donde queda DNA. Sembrar por estría la superficie del medio con cultivos puros del microorganismo en estudio. Sobre una misma placa pueden sembrarse varias cepas, hacer estrías de 2 cm de largo. Incubar 24 h a 35ºC. La temperatura y el tiempo de incubación pueden variar, según el microorganismo de ensayo. Después de obtener un buen desarrollo, cubrir cuidadosamente la superficie de las placas con ácido clorhídrico 1 N. Las colonias formadoras de Dnasa hidrolizan a su alrededor al ácido desoxirribonucleico (DNA) contenido en el medio. Al acidificar precipita el DNA observándose turbidez por lo que las colonias Dnasa–positivas presentan a su alrededor halos de aclaramiento perfectamente delimitados, contrastando con el medio turbio. Los Dnasa-negativos se observan sin formación de halo. FORMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA Agar Acido desoxirribonucleico Cloruro de sodio 15.0 2.0 5.0 Peptona de caseína Peptona de soya 15.0 5.0 pH 7.3 ± 0.2 PREPARACION Rehidratar 42 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 10 a 15 minutos. Calentar agitando frecuentemente hasta el punto de ebullición durante 1 minuto para disolverlo por completo. Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lbs de presión) por 15 minutos. Enfriar aproximadamente a 45ºC y vaciar en cajas de Petri estériles. Conservar en refrigeración de 2º a 8ºC. MICROORGANISMO Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Con azul de toluidina Serratia marcescens CONTROL DE ACTIVIDAD CEPA RESULTADO ATCC 25923 Buen crecimiento, con halo claro o rosa brillante ATCC 12228 Buen crecimiento, sin halo claro ATCC 13880 Buen crecimiento, rosa brillante alrededor BIBLIOGRAFIA Di salvo. Med. Tech Bull U. S. Armed Forces Med. J. 9 : 191. 1958 Weckman and Catlin, J. Bacteriol. 73 : 590. 1957 PRESENTACION No. Cat. 1079-P Preparado placa 90x15 mm individual No. Cat. 1079-PP DIBICO S.A. DE C.V. MEXICO, D.F. Preparado paquete con 10 placas 3