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MEDIO DE CULTIVO Bacteriología General Catálogo 1305 _ ___________________________________________________ AGAR ECD (Escherichia coli directo) USO Medio de cultivo selectivo para aislamiento de enterobacterias y en especial para la detección rápida de Escherichia coli por fluorescencia con lámpara de luz ultravioleta y su confirmación con la prueba del indol, a partir de diversas muestras. PRINCIPIO La peptona de caseína proporciona los nutrientes necesarios para el crecimiento. El cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmótico y los fosfatos ayudan a controlar el pH. Las sales biliares inhiben la flora Gram positiva. Escherichia coli tiene la capacidad de utilizar el triptofano, formando como producto final el indol y su detección es una prueba adicional. El sustrato 4-metilumbeliferil-β-Dglucorónido (MUG), es separado por la enzima β-D-glucuronidasa de Escherichia coli dando lugar a la formación de 4metilumbeliferona, que se caracteriza por ser fluorescente al irradiar con lámpara de luz UV de 366 de 366 nm. Las cepas de Escherichia coli tienen como característica específica producir la enzima Beta-D-glucuronidasa, contrariamente a esto, Escherichia coli O157 : H7 no puede formar esta enzima y al iluminar con una lámpara de luz UV de 366 nm, lo que permite su identificación con facilidad. Sembrar la muestra en estudio en la superficie del medio de cultivo por estría cruzada. Incubar 18 - 24 h a 35ºC. De las colonias desarrolladas, las de Escherichia coli se detectan por la fluorescencia azul claro que se produce al iluminarlas con una lámpara de luz ultravioleta de 366 nm. Para confirmar realizar la prueba del indol, agregando sobre las colonias 1 o 2 gotas de reactivo de Kovacs, una coloración roja del reactivo después de 2 a 10 segundos se interpreta como reacción positiva. FORMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA Agar Cloruro de sodio Fosfato dipotásico Fosfato monopotásico Lactosa 15.0 5.0 4.0 1.5 5.0 pH 7.0 ± 4-Metilumbeliferil-β-D-glucorónido Peptona de caseína Sales biliares Triptofano 0.1 20.0 1.5 1.0 0.2 PREPARACION Rehidratar 53.1 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 10 a 15 minutos. Calentar agitando frecuentemente hasta el punto de ebullición durante 1 minuto para disolverlo por completo. Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lbs de presión) durante 15 minutos. Enfriar aproximadamente a 45ºC. Vaciar en cajas de Petri estériles. Conservar en refrigeración de 2º a 8ºC. CONTROL DE ACTIVIDAD MICROORGANISMO Escherichia coli Escherichia coli O157 : H7 Enterobacter cloacae Proteus vulgaris Staphylococcus aureus CEPA ATCC ATCC ATCC ATCC ATCC 25922 35150 23335 13315 25923 CRECIMIENTO INDOL Bueno, colonias fluorescentes al iluminar con luz UV de 366 nm Bueno, colonias no fluorescentes Bueno, colonias no fluorescentes Bueno, colonias no fluorescentes Inhibido + + + BIBLIOGRAFIA Joseph Md State. Dept. Health. Procedures, 1960 Quality Assurance for Commercially prepared microbiological culture media-second edition; approved Standard. NCCLS M-22 A2 Vol. 16 No. 16 pp 8; 1996 Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos. Sexta Edición pp 192; 1994 PRESENTACION No. Cat. 1305 1305-E 1305-A Deshidratado 1000 g Deshidratado 500 g Deshidratado 450 g No. Cat. 1305-P 1305-PP 1305-PR Preparado placa 90x15 mm individual Preparado paquete con 10 placas Preparado paquete con 20 placas DIBIcont-S DIBICO S.A. DE C.V. MEXICO, D.F. 3
