Download tecnicas de aislamiento y obtencion de cultivos puros material

TECNICAS DE AISLAMIENTO Y
OBTENCION DE CULTIVOS PUROS
MATERIAL NECESARIO
• Placas Petri que contengan medio TSA
• Placas Petri que contengan medio Agar MacConkey
• Asa de Platino.
TECNICA
El agar TSA es un medio general, completo, por lo que va a permitir el
crecimiento de una gran mayoría de bacterias, ya que la triptona y la
peptona de soja van a suministrar todos los nutrientes y los factores de
crecimiento requeridos por una amplia variedad de bacterias.
Este medio lo vamos a utilizar en esta práctica para aprender a sembrar en
estría y conseguir un aislamiento para poder llevar acabo una observación
de la forma, tamaño, pigmentación, etc. de las colonias bacterianas
aisladas.
La siembra en estría, se realiza con la ayuda de un asa de platino estéril,
con la cual se toma la muestra, dicha muestra a continuación es extendida
haciendo zig-zag de forma continua sobre la superficie del agar, con el
objeto de ir obteniendo una densidad bacteriana cada vez menor, hasta
llegar a zonas en la que la distancia entre células sea la suficiente para
obtener colonias separadas (aislamiento). Aunque una colonia puede
aparecer como consecuencia del crecimiento de una única célula, en
ocasiones es originada a partir de un grupo de células del mismo tipo ò de
un agregado, por lo que a la hora de referirnos al origen de una colonia se
debe de hablar de unidades formadoras de colonias (ufc) en lugar de
células.
Normalmente un cultivo descendiente de una colonia es un cultivo puro, es
decir procede de un único tipo de microorganismo, por lo que esta técnica
va a ser empleada a la hora de aislar y obtener cultivos puros; bastara tocar
9
con el asa estéril una colonia y pasarla a un tubo con un medio de cultivo
adecuado para obtener masa de ese microorganismo en estado puro.
El agar MacConkey es un medio selectivo y diferencial. Estas propiedades
se las otorga su composición. Es selectivo ya que las bacterias Gram
positivas no pueden crecer debido a la presencia del cristal violeta, el cual
es un inhibidor de bacterias Gram positivas, sin embargo las Gram
negativas no se ven afectadas por este colorante gracias a la presencia de la
membrana externa que actúa como una barrera frente a él. Y es selectivo
fundamentalmente para enterobacterias aunque también pueden crecer en
él, otras bacterias intestinales Gram negativas, el resto de las bacterias
Gram negativas no intestinales tampoco crecen en él debido a la presencia
de sales biliares.
Y es también diferencial, ya que nos permite distinguir entre las bacterias
fermentadoras y no fermentadoras de la lactosa. Como de puede apreciar
en la composición del medio, este medio contiene lactosa como fuente de
carbono y rojo neutro que actúa como indicador de pH. Si la bacteria puede
utilizar a la lactosa, la fermentara, ya que se encuentra en gran cantidad
(10g/l), y en este caso producirá ácidos que harán que el rojo neutro vire a
más rojo, por lo que las colonias de las bacterias que fermenten la lactosa
tomaran color rojo. En caso de no utilizar la lactosa, las bacterias utilizaran
como fuente de carbono y energía los aminoácidos de la peptona, en cuyo
caso se liberara amoniaco, que elevara el pH del medio, haciendo que el
rojo neutro vire a amarillo, y por tanto las colonias no aparecerán teñidas
pero el medio, si tomará una tonalidad amarillenta y fundamentalmente en
las zonas de mayor densidad celular.
La placa de agar MacConkey también se sembrará en estrías para poder
obtener colonias separadas y en caso de que existan más de un tipo de
colonias, poder diferenciar las fermentadoras y las no fermentadoras de la
lactosa.
10
!
"# $
%
&
'