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12/6/2010 Curso “Bioseguridad y Biotecnología Moderna” La Molina-Lima, 6-10 de diciembre de 2010 PERÚ: CRECIMIENTO POBLACIONAL 50 45 40 Millones personas 35 30 U rb a n a 25 R u ra l To ta l 20 15 10 5 0 19 9 7 19 9 9 2 0 0 1 2 0 0 3 2 0 0 5 2 0 0 7 2 0 0 9 2 0 11 2 0 13 2 0 15 2 0 17 2 0 19 2 0 2 1 2 0 2 3 2 0 2 5 2 0 2 7 2 0 2 9 2 0 3 1 2 0 3 3 2 0 3 5 2 0 3 7 2 0 3 9 2 0 4 1 Año: 1997 Población: 24’681,045 Fuente: INEI Año: 2007 Población: 28’750,770 En el año 2020 habrá que alimentar a 7 millones más de peruanos Año: 2041 Población estimada: 45’700,000 TASA DE CRECIMIENTO ANUAL: 500,000 PERSONAS 1 12/6/2010 Disponibilidad de tierra cultivable para alimentación (Tierra cultivable en el Perú: 4’000,000 ha) Perú 0.16 0.14 0.11 0.09 Para tener en el 2020 los valores del 2007 se debe: 1.Incrementar la superficie cultivable en mas de 2 millón de hectáreas (¿de la Amazonía?); e 2.Incrementar los rendimientos agrícolas en más de 30% (¿cómo?) Fan chart de la temperatura y pronósticos 1000-2100 1.4 – 5.8º C Proliferación del uso de combustibles fósiles - petróleo, carbón y gas natural Fuente: Ⓒ Mitsubishi Corporation 2 12/6/2010 140 130 Junio 2008: El precio superó los US$130 por barril Julio 2008: El precio superó los US$ 140 por barril El 4 de enero del 2010 el precio fue de US$ 81.68 por barril La creciente presión de los biocombustibles resultante del cambio climático Bioetanol: En 2007, 13.000 millones de galones en 162 plantas, 7% de la gasolina. EEUU en 2008 utilizó ili ó ell 29% del área de maíz Biodiesel: En 2007, 2.000 millones de galones. La U. Europea en 2015 absorbería 62% de sus cosechas de oleaginosas 3 12/6/2010 1999 2005 2010 USD 549,000 M USD 158,000 M USD 21,200 M USD 2,000 M Industria Biotecnológica: Progreso y Promesa 2025 • La Biotecnología será uno de los motores clave en l próximos ó i ñ los años • En el 2010, el mercado de químicos será afectado por la biotecnología con un valor total de ~USD 158,000 millones • A mitad del presente siglo la totalidad de químicos será producida por biotecnología OECD, Bioeconomy to 2030, p. 121 Una economía basada en la biotecnología que usa materias primas renovables, particularmente biomasa y recursos p genéticos para producir alimentos, productos industriales y energía al menor costo ambiental. Implica el cambio de la unidad de comercio: de la molécula de hidrocarburo a la molécula de ADN Es decir: Del petróleo a los genes M. Gutiérrez-Correa, Perú Económico, Enero 2007, p. 27. 4 12/6/2010 Económicos Ambientales Costos reducidos, mejor control de las propiedades del p producto Nuevos productos y oportunidades de mercado Sociales Prevención de la polución, emisiones reducidas de gases y tóxicos Combustibles, químicos y materiales ‘Verdes’ Productos reusables y reciclables Miniaturización y modularidad Diversificación y crecimiento de la economía rural Potencial económico de la biodiversidad génica en el Perú Organismos Animales Plantas TOTAL Número de especies endémicas* dé i * Número total de VDP** VDC** genes US$ Billones US$ endémicos dé i Billones/año disponibles* 771 0.13 x 108 3.9 390 5,530 2.70 x 108 81.0 8,100 6 301 6,301 2 83 x 108 2.83 84 9 84.9 8 490 8,490 *Datos genómicos tomados de la ref. 1 **VDP = Valor dinámico potencial (0.01% de los genes); VDC = valor dinámico comercial GUTIERREZ-CORREA, Marcel. 2009. El Valor de los Genes: Una Visión Preliminar. Bios 2(3), 4-7. 5 12/6/2010 La biomasa es una materia prima energéticamente más eficiente Entalpía CxHy Nafta 45 GJ/ton CxHy CxHyOz Grasas y aceites CxHyN CxHzOyN Sv Proteínas y aminoácidos 20-30 GJ/ton CxHyOz(OCHz)v Lignina CxHyO CxHyOz Carbohidratos Enfoque Petroquímico Productos químicos Enfoque de Biorefinería Adapatado de:S cott et al. Appl Microbiol Biotechnol (2007) 75:751–762 Herramientas biotecnológicas en los Bioprocesos 6 12/6/2010 Biochip de DNA (eSensorTM) PCR Lab-on-a-chip Lipasa inmovilizada en nanopartículas de Fe3O4 Microbiorreactor sumergido (18 ml) de tanque agitado Biorefinerías Biomasa vegetal Agrorefinerías Sistemas enzimáticos Factorías celulares Nutrientes reciclados Pérdida de Nutrientes (minimizar) Allimentos Com mbustibles y bioproductos Buenas prácticas agrícolas (Fijación Biol. N2, Labranza cero, biochar, etc) Cultivos y biomasa S l Suelo Fertilizante (optimizar) Pesticidas (minimizar) M. Gutiérrez-Correa. Rev. Agronegocios, 2009 7 12/6/2010 Ecotipos EXPORTACION Digitalización de DNA Enzimas FructoFructooligosacáridos YACON Mejoramiento Genético Ind. Alim. Enzimas Fructosa Edulcorantes Biomasa residual Conservación ex situ e in situ YACON CON NUEVOS FRUCTANOS – reducción de azúcares Alimentos Combustibles Plásticos Materia prima agrícola convencional (Bio)químicos Biomateriales Biomasa 8 12/6/2010 Actividad Específica Enzima nativa 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0.0 35 40 45 50 55 60 65 70 75 ºC Conjunto de secuencias seleccionadas procedentes de fuentes nativas y mutantes Conjunto de nuevas secuencias seleccionadas Reensamblaje recombinativo (shuffling) Actividad Específica Tamizado 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0.0 35 40 45 50 55 60 65 70 Expresión Transformación Evaluación Clonación Enzima evolucionada 75 ºC Recolección de datos Secuencia genómica Análisis funcional de ORFs desconocidas Genómica funcional Transcriptoma Metaboloma Proteoma •Expresión diferencial de genes •Regulación global de genes •Niveles de proteína •Interacciones proteicas •Estructura/función • Parámetros cinéticos • Modelamiento de vías metabólicas Flujoma • Análisis de flujos metabólicos Bioinformática •Estadística •Análisis de bases de datos •Reconocimiento Reconocimiento de patrones •Simulaciones de célula completa Aplicaciones •Ingeniería metabólica •Nuevas drogas y sitios de acción •Optimización de bioprocesos 9 12/6/2010 Concepto de una Factoría Celular GUTIERREZ-CORREA, Marcel. 2008. Bioeconomía (Primera Parte). Revista Agronegocios 2(3), 14 – 17. Utilización de la genómica funcional en la optimización de bioprocesos Flujoma Qresp Glucosa + 2 NADPH,H CO2 %pO2 ATP Glucosa6-P Pentose P Fructosa-PNADH,H ATP + ATP glicerol GlicerolP TriosaP Sedoheptulosa7 P pH + NADH,H ATP Glicerato3P Gli t 3P Eritrosa-4P + H 0 + 4+H NADH,H 2 NAD FADH2 PEP Tiempos FAD ATP + ATP NADPH,H CO2 CO2 1/2 O2 3 H+ ATP Piruvato HS-CoA + NADH,H CO2 CO2 Acetil CoA Acetato HS-CoA ATP + ATP NADPH,H OAA Citrato ANABOLISMO Malate + NADH,H Expresión de genes (Transcriptoma) 1/2 O2 H 02 + 2+H IsoCitrato CO NADH,H + 2 Fumarato FadH2 Succinato SH-CoA aKglu + NADPH,H CO2 Suc-CoA GTP SH-CoA Expresión de proteínas (Proteoma) Expresión metabólica (Metaboloma) Incremento del rendimiento,, rendimiento concentración y productividad CO2 + NADH,H S n × Vn = b Metabolito 10 12/6/2010 “Comóditis” a partir de Materiales Agrícolas Residuos Agrícolas Etanol Acido Cítrico Almidón Acido Láctico Celulosa Hemicelulosa Acido Glucónico Sacarificación Enzimática Acido Acético Acetona Butanol Pretratamiento Enzimático Sacarificación Azúcares Conversiones Microbianas Antibióticos Carotenoides Acido Etanol Butilenglicol Fumárico Calor Química Deshidratación Enzimas Polisacáridos Vitaminas Anhidrido Maléico Aminoácidos Etileno Butadieno Proteína Unicelular Plásticos, Fibras, Jebes, Resinas, etc. Biopesticidas Biosurfactantes Estados en la conversión de biomasa a etanol Azúcares (caña, remolacha) Almidones (cereales, tubérculos, raíces) Lignocelulosa (madera, residuos agroindustriales) Extracción de jugo Hidrólisis enzimática Pretratamiento e hidrólisis Estado I: FERMENTACIÓN Conversión de los azúcares a etanol Estado II: RECUPERACIÓN DEL ETANOL Destilación Deshidratación ETANOL ANHIDRO 11 12/6/2010 M. Gutiérrez-Correa. BIOTECNOLOGIA, BIODIVERSIDAD Y BIOECONOMIA EN EL PERÚ. 2006 Comparación de la producción de etanol entre la caña y el maíz Estado de la Producción Caña de Azucar Maíz Rendimiento del cultivo (T ha-11) Rendimiento de etanol max (L ha-1) Rendimiento de etanol prom (L ha-1) Eficiencia promedio de Ferment.* (%) Tiempo típico de fermentación (h) 80-100 80 100 9000 7750 92 6-10 12 4400 2750 89 40 Bagazo seco producido (T ha-1) Azúcares fermentables en bagazo (T ha-1))** Rendimiento de etanol de bagazo (L ha-1) Eficiencia promedio de ferment.* (%) 26.4 21 0 21.0 13,200 95 6.6 48 4.8 3,080 95 *Basado en una producción teórica máxima de 511 g Etanol (Kg glucosa)-1 **Considerando 72 % de carbohidratos (celulosa y hemicelulosa) 12 12/6/2010 Hidrólisis Enzimática de la Celulosa Regiones Amorfas Regiones Cristalinas Celulosa Endo-β-glucanasa Celobiohidrolasa EG/CBH β-glucosidasa n Glucosa Biomasa celulósica Bordes del proceso Pretratamiento Calor y electricidad Pasos Biológicos: Producción de celulasas hidrólisis fermentación Electricidad exportada Servicios Recuperación de Etanol Liberación de azúcares y exposición de la biomasa a las enzimas Formar enzima, romper la celulosa a glucosa y fermentar los azúcares Etano l Procesam. de residuos Efluentes 13 12/6/2010 Factoría Celular para etanol celulósico Glucosa Lignocelulasas Pentosas Xilosa Escherichia coli ATP ADP Glucosa-6-P Gluconolactona-6-P Xilulosa 6-P-Gluconato Xilulosa Quinasa Xil-5-P Glucosa Vía de la pentosa introducida de Xilosa isomerasa ATP ADP 2-Ceto-3-deoxi-6-P-gluconato Ribl-5-P Ribosa-5-P Transcetolasa Sedoheptul-7-P 1,3-P-Glicerato Gliceraldehído-3-P Transaldolasa Frut-6-P Frut-6-P Erit-4-P Gliceraldehído-3-P Glicerald-3-P Trancetolasa ATP ADP 3-P-Glicerato 2-P-Glicerato ADP ATP Fosfoenolpiruvato Vía Entner-Doudoroff de Zimomonas mobilis Piruvato ETANOL Sacarificación y Fermentación • Hidrólisis enzimática de celulose a glucosa • Fermentación de azúcares a etanol por Z. mobilis • Tiempo de residencia de 2 días a 37ºC y 20% de sólidos Rendimientos: Glucosa a Etanol 92% Xilosa a Etanol 85% Arabinosa to Etanol 85% Pérdida por Contaminación 5% 14 12/6/2010 Biodiesel contaminante Triglicéridos Petróleo NaOH/KaOH Triglicéridos + Metanol Petróleo Metil-ésteres Biocombustible Biodiesel + Metanol Glicerol contaminante Metil-ésteres Biocombustible Biodiesel Glicerol Lipasas 1,3 Propanodiol; Dihidroxiacetona; Ac. Succínico; Ac. Propiónico; Ac. Cítrico; Etanol; Astaxantina; Polihidroxi alcanoato; Biocombustible Microdiesel Factoría Celular para biodiesel Lignocelulasas Pentosa Glucosa Zymomonas mobilis KDPG ETANOL = O Acinetobacter baylyi Ac. GRASOS CH3CH2OCR Wax ESTER SINTASA 15 12/6/2010 Factoría celular de S.. elongatus Synechococcus elongatus para biocombustible rbcLS Bacillus subtilis Escherichia coli Lactococcus lactis Isobutiraldehído (Alcali) Enzimas Agua Pretratamiento Biomasa Sacarificación Levadura o Bacteria Recuperación Alcohol Fermentación Destilación Etanol Butanol Tanque de pasta Molienda Celulasa Xilanasa Isobutanol Pegamentos Plásticos Lignina DDGS Alimento Animal Vapor Electricidad Acido Cítrico Acido Láctico Recuperación de agua 16 12/6/2010 Factoría Celular para plásticos Metabolismo de E. coli (factoría) Glucosa E. coli G-3-P DHAP TCA Pyr Gly-3-P Gly 3HPA Propanodiol Vía del glicerol de Extensión metabólica levaduras de Klebsiella Polipropilen tereftalato [ O O ] O O Factoría celular para la producción de plástico poliláctico poliláctico.. Lactato Lactato PCT Glucosa = O O = Lactil-CoA Biomasa Láctido Catalizador metálico Enzima polimerizante de AL Factoría celular Poliéster Poliláctico Sustitución Poliéster Poliláctico 17 12/6/2010 Glucosa Piruvato LDH Lactato Acetil CoA LDH = lactato deshidrogenasa PCT = propionil-CoA transferasa PhaA PCT PhaA= β-cetotiolasa Lactil Co A PhaB= acetoacetil-CoA reductasa NADPH-dependiente AcetoAcetil CoA PhaB PhaC= PHA sintasa (R)-3-Hidroxibutiril-CoA De Pseudomonas sp. 61-3, modificada por evolución dirigida PhaC PLA P(LA--co P(LA co--3HB) Industria Textil Biopelícula Celulasas xilanasas Factoría celular (produce celulasa) Genes de celulasas xilanasas Optimización de procesos Biomasa Factoría celular (produce celulasas y etanol) ETANOL 18 12/6/2010 19