Download Vectores De Clonación

División de Ciencias Biológicas y de la Salud
DRA: Álvarez Cisneros Yenisey Merit
UEA: Biología Molecular
Tema: Vectores De Clonación
Integrantes:
Díaz González Sánchez Yanelli Monserrat
Hernández Ramírez Héctor Cirilo
Loyo Martínez Alondra Fernanda
Solís Arzate Alejandro.
Trabajos en : Genética, Biología celular, se materializaron en los
laboratorios de:
Antecedentes
Herbert Boyer
Paul Berg
Stanley N. Cohen
Idearon técnicas para la localización, el aislamiento, la preparación y el
estudio de pequeños segmentos de ADN procedentes de cromosomas.
Se discutió el uso de plásmidos como vectores de clonación de
segmentos de ADN individuales.
Vectores de Clonación.
Clonación.
Han hecho posible la genómica y la
proteomica: Es decir estudio de
genes y proteínas a nivel celular
Estudios han transformado la investigación en:
Ecología
Es una copia idéntica
Clon
Relación
Clonación
Separación de un gen especifico o de un
fragmento de DNA, para unirse a una
molécula pequeña , para después poderse
replicar, creando múltiples copias del DNA.
Se tiene 5 etapas principales
•Cortar el DNA en Lugares precisos.
Clonación
•Selección de una pequeña molécula de DNA capaz
de auto replicarse. ( estos DNA se denominan
Vectores de clonación )
•Unión covalente de dos fragmentos de DNA
•Traslado del DNA del tubo de ensayo a una célula
huésped.
•Selección e identificación de las células huésped que
contiene el DNA recombinante.
¿ Qué es un vector de clonación?
Es una molécula pequeña de ADN que puede replicarse de
manera autónoma en un huésped. ( célula bacteriana o de
levaduras )
Se utilizan en la clonación por que pueden
seguir su desarrollo normal a pesar de que
secuencias
adicionales
de
ADN
sean
incorporados en su material genético.
Se auto replican utilizando la maquinaria de la
célula huésped.
Plásmidos
Algunos Ejemplos de Vectores.
Bacteriófagos
Cósmidos
PLÁSMIDOS
Moléculas circulares de ADN de doble cadena
que se replican de modo extracromosómico en
bacterias
En ellos se encuentran genes que le confiere al
organismo que los posee resistencia a algunos
antibióticos.
Clonación utilizando el fago
lambda como vector.
Se extrae el DNA de una
preparación de fago lambda y se
elimina el grupo
central de genes por tratamiento
con una enzima de restricción. El
DNA a clonar se corta con la misma
enzima y se liga entre los brazos
del
cromosoma de lambda. Luego se
empaqueta el cromosoma
recombinante dentro de las
proteínas del fago para formar un
virus
recombinante. Este virus puede
infectar células bacterianas y
replicar su cromosoma, incluido el
inserto de DNA.
Bacteriófagos
Son virus que infectan a las bacterias,
constituidos según su núcleo de ADN o ARN y una
cubierta proteica.
Presentan cola y son incapaces de replicarse
autónomamente por lo que necesitan infectar a la
célula para poder hacerlo.
El más utilizado es el bacteriófago lambda por ser
eficiente para introducir sus bases pares de DNA
en la bacteria.
Puede ser usado como vector para clonar
fragmentos de DNA.
CÓSMIDOS
 Son básicamente plásmidos.
Emplean la habilidad de las partículas
infecciosas del bacteriófago lambda para
empaquetar piezas lineales de ADN e
introducirlas en las bacterias.
Son vectores que se reproducen de igual
manera que los plásmidos en las bacterias.
Cromosomas artificiales “ Levadura”.
Es un tipo de vector de clonación .
Permite clonar hebras de ADN de gran tamaño
Capaz de replicarse en el huésped (levadura común usada en
panadería ).
Cuenta con una estructura semejante a los cromosomas de levadura
normal.
Tipos de vectores de clonación utilizados en E. coli
Tipo de vector
Método de
introducción en E. coli
Método de
propagación
Tamaño del
fragmento de DNA
que se puede clonar
Plásmidos: modificados Transformación; las
por técnicas de DNA
células se vuelven
recombinante
competentes para
incorporar el plásmido
recombinante; una vez
transformadas las
células se seleccionan
mediante un marcador
seleccionable
Replicación del
plásmido tamaño del
fragmento hasta
15.000 pb
Bacteriófago
Replicación del fago
Hasta 23.000 pb
Replicación a modo de
plásmido
Hasta 45.000 pb
Infección con fagos
Cósmidos construidos a Se necesitan el
partir de plásmidos y empaquetamiento en
de genes
invitro
En conclusión

Los vectores de clonación nos ayudan a obtener
segmentos de ADN idénticos, esto se tiene que
llevar a cabo con específicas encimas utilizadas en
la tecnología del ADN recombinante, es una forma
fácil de conocer e investigar los procesos y la
molécula de ADN, ha permitido la identificación de
genes implicados en muchos procesos biológicos. En
general, el resultado es una amplificación selectiva
de un gen o fragmento de ADN particular
PALABRAS CLAVE:
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Edonucleasas de restricción
DNA ligasa
Vector de clonación
Plásmido
Bacteriófago
Cósmido
GRACIAS POR SU
ATENCIÓN