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Determinación de la dosis mínima por inducción de Vtg en 24 horas
en Anolis pulchellus
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Cristine Candelaria, Fabiola Fernández, Lorraine Díaz, Keishla Torres, José A. Cardé
Universidad de Puerto Rico, Recinto de Aguadilla
Objetivos
Determinación de la dosis minima por
inducción de Vtg en 24 horas en Anolis
pulchellus.
Materiales y Métodos
• Recolección de Anolis pulchellus
• Preparación del reactivo
• Inducción en Anolis pulchellus
Trasfondo
• Recolección de sangre
Anolis pulchellus mejor conocido como
lagartijo jardinero o lagartijo rayon, el mas
comun en la isla.
• Preparación de plasma
•
La vitelogenina es una proteína precursora
de la yema de huevo se expresa en las hembras
de casi todas las especies ovíparas.
• Preparación de electroforesis
•
• Preparación Biorad
Resultados
•
La presencia del gen Vtg en machos puede
ser indicador de contaminantes ambientales.
Hipótesis
•
Si la inducción con 17-β Estradiol en
machos produce el gen Vtg, entonces por medio
de la técnica SDS-PAGE se podría observar las
bandas asociadas a las proteínas del gen Vtg
que se encuentran aproximadamente a 212-116
kDa.
Discusión
La inducción con 17-β- EST sería a una
concentración de 5μg, 25μg y 50μg. En el gel de
SDS-PAGE se observó la produccion del gen Vtg
a concentraciones de 25 y 50, por lo tanto, se
tomó la decisión de aumentar las
concentraciones. Estas concentraciones no se
pudieron confirmar, ya que las muestras se
regaban en el "running buffer" o no decendían de
forma correcta dentro de la fosa.
La concentración preferida para observar la
separación correcta de las bandas de vitelogenina
es de 7% aunque la concentración en la cual se
observó mejor fue de 10%. Atribuyéndole a éstos
cambios en el voltaje, o que no se dejaba el
tiempo suficiente para que las bandas se
definieran o adquirieran más resolución . (Ver
Figura #2).
Se puedieron observar bandas (Ver Fig.#2
columna 8y 9) lo que indicaba que se indujo la
activación del gen ya que activa el receptor
estrogénico las gonódas del macho y
eventualmente la traducción para la producción
de la proteína (Cruz, 2011)
Como proyectos futuros sobre esta
investigación sería realizar una confirmación
de los datos que se obtuvieron. Además de
disminur la concentración de 17-β- EST para
saber específicamente cuanto es la cantidad
mínima del químico se necesita, para que
pueda induccir la producción de vitelogenina.
Además verificar el equipo para evitar ese tipo
de errores, estandarizar el porciento de los
geles.
Referencias
1. Cruz JC. Marzo 2011. Evaluación del Catán
(Atractosteus spatula) como especie monitora de
contaminación utilizando bioindicadores
bioquímicos [Doctoral thesis]. [Internet]. [Nuevo
León, Mx.]: Universidad Autónoma de Nuevo
León; citado [2013, Mayo 22]. Disponible en:
http://eprints.uanl.mx/2822/1/Tesis_para_bibliotec
a_Ra%C3%BAl_Rangel_Frias.pdf
2. Martínez A, Lavin S, Cuenca R. 2011.
Hematología y citología sanguínea en reptiles.
Clin.Vet.Peq.Anim.31:131-141
kDa
Figura 1. Biorad Protein Assay (Método
Bradford).
Determinación de la concentración de µg de
proteínas por cada µl de la muestra.
Proyectos futuros
3. Wikipedia Contributors. Sistema de
determinación del sexo [Internet], Wikipedia, The
Free Encyclopedia; 2013, Mayo 16, 17:23 UTC [
citado 2013, Mayo 22] Disponible
en:http://es.wikipedia.org/wiki/Sistema_de_deter
minaci%C3%B3n_de_sexo
225
150
100
50
35
25
15
10
5
5-
Marcador
Molecular
6- Macho Control
7-5 μg de 17-β-EST
8-25 μg de 17-β-EST
9- 50 μg de 17-β-EST
10- Loading Buffer
Figura 2. SDS-PAGE.
Determinación de la presencia y peso molecular del gen Vtg en las
muestras utilizando un marcador molecular (LONZA-Positive Unstain
Protein, Cat. 50547). Se observó la resolución definida de las bandas
de albúmina (50-35 kDa). Confirmamos la producción del gen debido
a la presencia de la banda del gen Vtg (212-116 kDa).