Download Virus de la Hepatitis B

Diagnóstico
Virológico
Bioq. Alejandro Kuc
Servicio de Inmunología - Hospital “Dr. Julio C. Perrando”
Cátedra de Virología - FaCENA - UNNE
Área de Inmunología - IMR - UNNE
Importancia
 Determinar una intervención terapéutica
 Definir el pronóstico en la evolución de
un paciente
 Indicar la necesidad de una vacunación
 Adoptar medidas de salud pública en una
comunidad: epidemiología.
 Tendencia: Sensibilidad y Rapidez
Métodos de Diagnóstico
 Directos: presencia de virus en muestras clínicas
 Agente infeccioso: aislamiento viral
 Partícula viral: microscopía electrónica
 Antígenos virales: inmunomarcación
 Genomas virales: biología molecular
 Indirectos:
respuesta de anticuerpos específicos
antivirales en el suero del paciente
Tipo de Muestras
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Virus respiratorios: aspirado nasofaríngeo
Lesiones Cutáneas: raspado e hisopado
Sangre: aislamiento viral
Suero: búsqueda de anticuerpos (serología)
Materia Fecal: enterovirus
Orina: aislamiento de CMV
LCR: enterovirus y parotiditis
Muestras oculares: hisopado
Tejidos: aislamiento viral o inmunohistoquímica
Transporte y conservación
 Aislamiento
 Inmediatamente (inactivación
y contaminación)
 No congelar
 Conservación
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Temp amb: horas
4ºC: 1-2 días
-20ºC: meses
-70ºC: años
Métodos
Directos
1- Aislamiento Viral
 Huevos, Animales o Células
 Tipos de cultivos celulares
 Primario: directamente del tejido humano o
animal; 1-2 subpasajes
 Diploide: derivado del tejido fetal o de RN;
20-50 subpasajes
 Hetroploide: extraídas de tejido tumoral o
tranformado; infinitos subpasajes
 Variación en susceptibilidad
 Es indispensable el Diagnóstico presuntivo
 Inoculación e incubación (ATB)
 Decontaminar muestras no estériles
 Inocular en tubos de cultivo: 200-300 µL de
muestra en medio con ATB
 1 hr a 37º para permitir la adsorción
 Añadir medio de cultivo y cambiarlo cada 23 días.
 Detección de los efectos de los virus
 Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y
cultivo
 Detección de los efectos de los virus
 Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y
cultivo
 Hemadsorción
 Detección de los efectos de los virus
 Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y
cultivo
 Hemadsorción
 Hemaglutinación
 Detección de los efectos de los virus
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
Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo
Hemadsorción
Hemaglutinación
Interferencia
 Dx presuntivo: debe confirmarse
 Identificación
 Inmunofuoresencia
 Imunoperoxidasa
 Cuantificación de virus
 Titulación de punto final
 Plaqueo bajo agarosa
2- Microscopía Electrónica
 Métodos
 Inmunoelectromicroscopía
 Coloración negativa
 Ventajas
 Rápido (pocas muestras)
 Desventajas
 Costo del ME
 Baja Sensibilidad
3- Inmunoflourescencia
 Técnica
 Directa
 Indirecta
 Ventajas




Muestra estable
Muy Sensible
Muy Específica
Rápido
 Desventajas
 Costo del MF
 Observador experimentado
IFI
IFI
IFI
IFI
IFI
IFI
4- Aglutinación
 Ventajas
 Sencillo
 Rápido
 No requiere
equipamiento
 Desventajas
 Poco especifica
5- Enzimoinmunoensayo (EIA)
 Ventajas




Muy Sensible
No se necesita observador experimentado
Gran numero de muestras simultáneamente
Automatizable
 Desventajas
 Falsos Positivos (necesita confirmación)
ELISA
Enzyme
Linked
ImmunoSorbent
Assay
Tests Rápidos en un solo
paso
5- Radioinmunoensayo (RIA)
 Fundamento idéntico a ELISA
 Ventajas
 Similar al ELISA
 Desventajas
 Reactivos Inestables
 Residuos Radiactivos
 Relativamente mas Costoso
Métodos
Indirectos
Métodos Indirectos
 Detección de IgM





Infección aguda
Infección congénita
FR: f+
↑ IgG: fIgM Captura
 Detección de IgG
 Seroconversión
 Recién Nacidos
 Avidez
Δ >4 títulos
Técnicas
 Aglutinación de
partículas
 IFI
 EIA
 ELISA
 LIA
 RIA
 Western Blott
Western Blot
 Muy especifica
 Método confirmatorio
1
2
3
4
Western Blot