Download ADN - Dr Penacino

Manejo de evidencias forenses
para análisis de ADN
Dr. Gustavo A. Penacino
Unidad de Análisis de ADN Colegio Oficial de Farm. y Bioquímicos
www.adn.ac
Sociedad Latinoamericana de Genética Forense
www.slagf.org
Fundacion INGEN – Investigaciones genéticas
www.ingen.org.ar
Obtención de las Evidencias.
Constituye el punto crítico para la resolución de
una causa judicial.
 Existen recomendaciones internacionales para la
manipulación, transporte y conservación de las
evidencias (www.slagf.org).
 Cualquier manipulación inadecuada permitirá a la
defensa invalidar los resultados del análisis.

Tratamiento de la ESCENA
DEL CRIMEN.
Sangre
Fue históricamente la fuente de ADN más
común y eficiente.
 Los criterios de conservación han
cambiado, simplificándose: pequeñas
cantidades a temperatura ambiente, en
papeles de filtro, bastan para un estudio
completo si el Laboratorio cuenta con
equipamiento de última generación.

Conservación de muestras de sangre.




Soportes adsorbentes.
Conservación a
temperatura
ambiente.
Largo tiempo de
conservación.
Permite generar un
banco de muestras.
Hisopados bucales



Hisopos comunes (no
es imprescindible
esterilidad).
A temperatura
ambiente.
Largo tiempo de
conservación.
Otras evidencias
Otras evidencias
CASO: VIOLACION
 Muestra
indubitada de sospechoso/ s.
 Evidencias: hisopados, prendas, pelos,
uñas, etc.
 Muestra indubitada de la víctima.
Prendas
SI
NO
Hisopados vaginales / anales
IMPORTANTE: El análisis previo de las
evidencias debe considerar la
disponibilidad de muestras para análisis
de ADN.
CASO: HOMICIDIO







Manchas biológicas.
Material cadavérico
Material subungueal
Pelos.
Colillas de cigarrillos / chicles.
Muestras indubitadas de sospechosos.
Muestras indubitadas de familiares de la víctima.
MATERIAL CADAVERICO
Los restos humanos como evidencia
para el análisis de ADN
Requisitos Para la Conservación de
Evidencias.


Material cadavérico fresco: congelado -20C.
Material cadavérico descompuesto: en mezcla de sales
(hasta 2 meses), congelado si el periodo es mayor.
Material Cadavérico esqueletizado: conservar a
temperatura ambiente, en sobres limpios, luego de
lavados.
Se debe evitar en todos los casos el empleo de
fijadores con formol.
Cadáveres reducidos
Tiempo de muerte aproximado: 1,5 años
Cadáveres Saponificados
Tiempo de muerte aprox 8 años
Tiempo de muerte aprox 1,5 años
Cadáveres Quemados
Cadáveres en los Primeros
Estadíos de Descomposición
Cadáver conservado

Conservado desde
su muerte en
cámara fría (8
meses).
Cadáver Momificado



Tiempo de muerte
aprox. 16 años.
Inhumado en nicho.
Proceso de
momificación
espontáneo.
Tejidos Conservados


Ciertos tejidos se
conservan debido a
condiciones
ambientales durante
periodos prolongados.
Material muscular con
más de 10 meses
entre escombros de
una explosión.
Huesos quemados con más de 10 Años
Recibidos
En proceso
Identificación Molecular de Restos
Fragmentados
1992
Atentado a la
Embajada de Israel
Toma de muestras del atentado
1994
Atentado a la mutual
israelita AMIA
Atentado a la AMIA
Vista general
Atentado a la AMIA.
Muestras
PRECAUCIONES DURANTE LA RECOLECCION Y ENVIO
DE MUESTRAS
1. Protección del personal
 Las muestras biológicas potencialmente pueden
contener agentes patógenos (VIH, hepatitis, meningitis…)
 Evitar contacto con la muestra mediante uso de
guantes, mascarilla y bata
 Emplear material desechable
 Prohibir comer, beber o fumar durante el proceso
de recolección
 Recomendar la vacunación al personal que trabaje
con este tipo de muestras
2. Protección de la muestra
2.1 Contaminación por material biológico humano
 Contaminación anterior o previa
Se debe a la aparición de la material biológico en el lugar donde luego
aparecerán los indicios.
INEVITABLE
 Contaminación coetánea o paralela
El material genético de un indicio se mezcla con ADN de otro origen en el
momento de los hechos
INEVITABLE, VALORABLE y UTIL
 Contaminación posterior
Debido al depósito de material genético de diversos orígenes en el indicio
con posterioridad al momento de los hechos
EVITABLE
2. Protección de la muestra
2.2 Transferencia de indicios biológicos
Traslado accidental de los indicios de un lugar a otro, ocasionando contaminación o
pérdida de la muestra (pej. pelos)
2. Protección de la muestra
2.3 Contaminación biológica no humana
Producida por microorganismos que acaban degradando el ADN por acción,
fundamentalmente de exonucleasas. (humedad y altas temperaturas)
• Puede ocurrir “a priori” a la recolección de indicios (muestras expuestas a
condiciones que favorecen la proliferación bacteriana)
• Tras la recolección del indicio si el empaquetado y conservación no es el
adecuado
DEGRADACION DEL ADN
2. Protección de la muestra
2.4 Contaminación química
Producida cuando las muestras se preservan (formol) o se tratan con
determinados productos químicos (p ej: algunos reactivos para el
estudio de huellas dactilares)
¿ QUE PRECAUCIONES ADOPTAR?
 Aislar y proteger, lo más rápidamente posible la escena del delito
 Recoger, si es posible, en primer lugar los indicios biológicos
 Usar guantes limpios que deben cambiarse con frecuencia
 No hablar o estornudar sobre las muestras. Usar mascarilla
 Usar bata u otro tipo de ropa protectora
 Utilizar material desechable
 No añadir conservantes a las muestras
 Dejar secar a TA previamente a ser empaquetadas
 Empaquetar por separado las muestras
 Empaquetar en bolsas de papel o cartón, NO USAR bolsas de
plástico
 Eliminar todo el material desechable empleado en la recolección de
muestras
TOMA DE MUESTRAS DE REFERENCIA (INDUBITADAS)
1. Personas vivas
• Siempre con consentimiento informado
• Debe existir un documento firmado con la autorización expresa para realizar
el análisis
En PERSONAS TRANSFUNDIDAS evitar la toma de sangre, podría
detectarse el ADN procedente de la sangre transfundida al menos en un
corto periodo de tiempo después a la transfusión y si la misma es masiva.
SANGRE
• Punción dactilar (gotas depositadas en
papel secante y se dejan secar a TA)
HISOPADOS BUCALES
• 2 Hisopos de ambas mejillas (colocar
en sobres de PAPEL para evitar la
proliferación bacteriana)
PELOS CON BULBO
•
10-15 pelos con bulbo
TOMA DE MUESTRAS DE REFERENCIA (INDUBITADAS)
2. Cadáveres en buen estado de conservación
SANGRE post-mortem
1 ml (anticoagulante tipo EDTA)
MUSCULO ESQUELETICO
Aprox 1 gr. Se almacena en un recipiente
plástico y tapón de rosca.
PIEZAS DENTALES
2 (molares). Dejar en reserva para
evitar la exhumación.
TOMA DE MUESTRAS DE REFERENCIA (INDUBITADAS)
3. Cadáveres en avanzado estado de putrefacción o esqueletizados
HUESO LARGO
Fémur, húmero
PIEZAS DENTALES
2 (molares). No dañados externamente ni
sometidos a endodoncias.
TOMA DE MUESTRAS DE REFERENCIA (INDUBITADAS)
4. Cadáveres carbonizados
•
Cuando la carbonización no es total es posible analizar MÚSCULO
ESQUELÉTICO de zonas profundas.
•
Cuando la carbonización es total recomendable contactar con el
laboratorio
TOMA DE MUESTRAS DE REFERENCIA (INDUBITADAS)
5. Otras muestras de referencia de personas fallecidas
• En hospitales: muestras de sangre, biopsias en parafina, preparaciones
histológicas
No utilizar tejidos fijados en formol !
•
Ámbito familiar: peines, maquinillas de afeitar, saliva en estampillas o
sobres
TOMA DE INDICIOS BIOLOGICOS en el lugar de los
hechos
1. Manchas secas
• En soportes pequeños y de fácil transporte
Colillas, armas blancas, monedas, llaves, piedras, ramas, papeles
Recolectadas por separado e introducidas en bolsas de papel o cajas
TOMA DE INDICIOS BIOLOGICOS en el lugar de los
hechos
1. Manchas secas
• En soportes grandes no transportables
A) Soporte no absorbente (cristal, metal…)
Recolectadas con un hisopo mojado en agua destilada (dejar secar antes
de guardar) o raspar con bisturí y guardar en bolsa de papel
B) Soporte absorbente (telas, tapicerias…)
Recortar la mancha y guardar en bolsa de papel
TOMA DE INDICIOS BIOLOGICOS en el lugar de los
hechos
2. Indicios húmedos
1. Ropas, tapicerías,
toallas…
2. Introducir por
separado en bolsas
de papel madera
5. Envolver en papel (por
separado) y guardar en
bolsas de papel
3. Traslado rápido a
instalaciones
adecuadas
4. Dejar secar en
lugar
protegido
y
sobre una superficie
limpia
TOMA DE INDICIOS BIOLOGICOS en el lugar de los
hechos
3. Indicios líquidos
• Sangre
- En gran cantidad: recoger con pipeta de plástico y
depositarla en un tubo con EDTA
- En pequeña cantidad: recoger con hisopo y dejar secar
- Coagulada: recoger con una cucharita e introducir en tubo
o frasco de plástico
TOMA DE INDICIOS BIOLOGICOS en el lugar de los
hechos
3. Indicios líquidos
• Semen
• Liq amniótico
• Orina
- Preservativos:
tomar hisopados EXTERNOS E
INTERNOS y dejar secar
- En
escasa cantidad: recoger con hisopo y dejar secar
- 10
ml que se introducen en un tubo
- Recoger
con pipeta de plástico desechable y
depositarla en un tubo o frasco. Enviar al laboratorio
inmediatamente
TOMA DE INDICIOS BIOLOGICOS en el lugar de los
hechos
4. Pelos
Cada pelo recolectado con pinzas (desechables o bien limpias) y guardados
adheridos sobre una hoja de papel
5. Restos cadavéricos
Buen estado de conservación: Tejido muscular sin líquido fijador, en
frasco de boca ancha y tapón de rosca, sumergido en sal.
Carbonizados: Músculo esquelético de zonas menos afectadas, sin líquido
fijador y en frasco de boca ancha y tapón de rosca
Avanzado estado de putrefacción / esqueletizados: Hueso largo y dientes
(2 molares)
TOMA DE INDICIOS BIOLOGICOS en el cuerpo de la
víctima
1. Manchas de sangre, semen u otros fluidos biológicos
Recoger con un hisopo húmedo (agua destilada) la mancha en
cuestión, dejar secar a TA y guardar el hisopo en sobre de papel
2. Saliva en marcas de mordedura
Recoger con un hisopo húmedo (agua destilada) la mancha en
cuestión, dejar secar a TA y guardar el hisopo en sobre de papel
TOMA DE INDICIOS BIOLOGICOS en el cuerpo de la
víctima
3. Uñas
Recoger con una pinza posibles pelos o fibras. Posteriormente
cortar el borde superior de las uñas para búsqueda de sangre o
piel. Recoger en bolsas de papel por separado.
4. Pelos dubitados
Recoger cada pelo con unas pinzas y colocar en un papel que será
doblado e introducido en una bolsa de papel.
TOMA DE INDICIOS BIOLOGICOS en casos de agresión
sexual
1. Dos tomas bucales, mediante hisopos pasando por debajo de la lengua,
encías y dientes
2. Búsqueda de manchas de semen, saliva o mordeduras
3. Dos tomas cervicales, dos tomas vaginales y una de genitales externos, con
hisopos estériles limpiando cuello uterino, cavidad vaginal y la región vulvar
4. Dos tomas anales, con hisopos estériles limpiando el conducto ano-rectal y el
margen anal
5. Ropas que portaba la víctima, colocadas en bolsas de papel por separado
TOMA DE INDICIOS BIOLOGICOS en casos de
investigación biológica de la paternidad
1. Si presunto padre, madre e hijo están vivos
Descrito anteriormente
2. Si el presunto padre está fallecido
a) Restos óseos o piezas dentales procedentes de la exhumación del cadáver
b) Análisis de muestras biológicas del fallecido existentes en hospitales o en el ámbito
familiar
c) Análisis de muestras biológicas procedentes de familiares del fallecido
3. A partir de restos fetales
Recogerlos con unas pinzas en un frasco de boca ancha y con tapón de rosca (sin
líquido fijador). Congelar inmediatamente o enviar al laboratorio.
SISTEMAS DE EMPAQUETAMIENTO Y PRESERVACIÓN DE
MUESTRAS
Tejidos blandos y órganos
Indicios líquidos
Muestras húmedas (no secas)
1
MANTENER Y ENVIAR REFRIGERADAS y POR UN MEDIO DE
Indicios secos no enviar refrigerado
TRANSPORTE RAPIDO
Tipo de muestra
Pertenencia y/o procedencia
Nº de referencia
de la muestra
IDENTIFICACION DE LA MUESTRA
Identificación y firma de la
persona que recoge la muestra
Fecha y hora de recolección
CUSTODIA DE LA MUESTRA
2
3
EMPAQUETADO
2. Evitar emplear frascos de cristal
1. Evitar el uso de bolsas de plástico
3. Emplear cajas de cartón o sobre de papel
4. Cada muestra en un recipiente y precintado
4
RECEPCION DE MUESTRAS EN EL LABORATORIO
1º Rellenar la hoja de custodia
Nombre de la persona que entrega las muestras
Nombre de la persona que recibe las muestras
Fecha y hora de entrega
Empresa que realiza el transporte
2º Chequear número de referencia de cada muestra y contrastar con el
formulario enviado
3º Comprobar la integridad de los precintos
4º Al abrir los recipientes comprobar que identificación y descripción son
correctas
5º Fotografiar las muestras
Anotar posibles discrepancias
Establecer acciones correctoras
GRACIAS!
• Laboratorio: www.adn.ac
• Sociedad Latinoamericana de
Genética Forense: www.slagf.org
• Fundacion INGEN – Investigaciones
genéticas:
www.ingen.org.ar