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Revista Médica, 2004. Vol. 10 Nº 3:20-26
NORMATIZACION DE LA TOMA DE MUESTRAS PARA LA INVESTIGACIÓN
DE LA PATERNIDAD BIOLÓGICA A TRAVES DEL ANÁLISIS DE ADN
Rocabado O.
(1)
(2)
(3)
(4)
, Núñez de Arco J. , Rocabado G. , Lorente J. .
(1)
Responsable del Laboratorio de Genética Forense, Instituto de Investigaciones Forenses,
(2)
Fiscalía General de la Republica / Bolivia E-MAIL: [email protected]
Director
Nacional, Instituto de Investigaciones Forenses, Fiscalía General de la Republica de Bolivia.
(3)
(4)
Investigador Asociado, Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas.
Director del
Laboratorio de Identificación Genética, Departamento de Medicina Legal, Universidad de
Granada – España.
RESUMEN
Actualmente la tecnología del ADN ha superado con creces muchas otras técnicas en
la investigación de la paternidad biológica, sin embargo, es fundamental el conocer la
versatilidad de ésta tecnología moderna. Una de las fases fundamentales, es sin duda
alguna, la obtención del material biológico a emplearse para esta investigación, en
nuestra experiencia, hemos podido observar diversos criterios para la obtención de
muestras biológicas destinadas a este efecto, es por lo tanto el objetivo de esta
publicación, el unificar esos criterios y mostrar la muestras sobre las que se puede
realizar este estudio.
Palabras claves: Muestras, ADN, paternidad
1. INTRODUCCIÓN.Las pruebas de investigación biológica de la paternidad mediante análisis de ADN
(ácido desoxirribonucleico), es el método de identificación más preciso que existe en la
actualidad ya que los estudios de paternidad se realizan analizando un número
suficiente de marcadores genéticos con lo que la fiabilidad de la prueba es tan alta que
permite obtener probabilidades de paternidad superiores al 99.99%. (1)
Surge en la actualidad la genética molecular aplicada a la medicina forense, conocida
como genética forense, una nueva especialidad que consiste en la aplicación de la
genética a la resolución de problemas judiciales, consistentes principalmente en
pruebas de investigación biológica de paternidad, problemas de identificación de
individuos y restos óseos y análisis de vestigios biológicos de interés criminal. (2)
Un aspecto importante de considerar, es la toma de muestras para realizar este
estudio, nuestra experiencia nos ha permitido observar muchos errores en el proceso de
toma de muestras, lo que imposibilita el análisis de ADN, es por esta razón que a través
de esta publicación, proponemos un protocolo de destinado a la toma de muestras
destinadas al análisis genético para la investigación de la paternidad biológica, proceso
que puede ser encomendado a cualquier médico o personal en salud.
2. DOCUMENTACION
PATERNIDAD
EN
CASOS
DE
INVESTIGACION
BIOLOGICA
DE
Independiente al acta que se elabora para la tomas de muestras, es importante adjuntar
la siguiente documentación:(3)
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2.1.- DOCUMENTACION NECESARIA
2.1.1.- Formulario de envío de muestras. En este formulario debe
constar:
" Datos identificativos del individuo:
- Nombre y apellidos.
- C.I.
- Lugar de nacimiento.
- Fecha de nacimiento
- Lugar de residencia.
- Grupo poblacional.
" Antecedentes patológicos:
- Transfusiones de sangre recientes.
- Transplantes recientes.
- Enfermedades que puedan influir en la valoración de los
resultados de los análisis (p.e.: inestabilidad somática en
cáncer), si se conocen.
2.1.2.- Identificación de las muestras. En todos los formularios debe
aparecer un listado donde se identifiquen y describan brevemente las
muestras.
" Listado de muestras donde debe especificarse:
- Número de referencia de la muestra.
- Tipo de muestra (sangre, saliva....).
- Nombre de la persona a la que se realiza la toma o
código elegido para identificarla.
- Relación con el caso (madre, hijo....).
3. PRUEBAS BIOLÓGICAS DE PATERNIDAD MEDIANTE ANÁLISIS DE ADN
En Bolivia las disputas de paternidad son muy
frecuentes, debido fundamentalmente a las
conductas sexuales adoptadas por la sociedad,
dando origen así a situaciones de conflicto de
paternidades.
El ADN por lo tanto, es muy útil para la determinación de la paternidad biológica,
sabiendo que en cualquier persona la mitad del genoma procede del padre y la otra
mitad de la madre, en el supuesto de que haya dos individuos sospechosos de ser el
padre de una criatura, bastará comparar las bandas halladas en las huellas genéticas
del hijo, de la madre y de los sospechosos. Las bandas correspondientes a la madre se
eliminan y quedan las del verdadero padre. Se comparan éstas con las del sospechoso
o sospechosos y aparecerá con claridad si es alguno de ellos por la coincidencia visible
que se produce en el espesor y situación de estas bandas. De esta manera se resuelve
este conflicto. (4)
Las pruebas de investigación biológica de la paternidad mediante análisis de ADN están
aceptadas por los tribunales de todo el mundo como el método de identificación más
preciso que existe en la actualidad ya que permite obtener probabilidades de paternidad
superiores al 99.99% (la mayoría de los u
j zgados del mundo aceptan 99.0% como
prueba válida). (5)
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Aplicando estas técnicas es posible incluso determinar las paternidad de personas
fallecidas realizando un análisis genético a partir de los restos cadavéricos del padre,
obtenidos a través de una exhumación, o a partir de sus familiares cercanos. De igual
modo las técnicas genéticas se aplican en la investigación biológica de la maternidad.
(6)
4. TOMA DE MUESTRAS .4.1.- Personal encargado de la toma de muestras.- En Bolivia, el personal encargado
de la toma de muestras es generalmente el médico forense, quien lo hace a
requerimiento fiscal u orden judicial, aunque en algunas oportunidades lo puede hacer
otro personal de salud que sea instruido por las mismas autoridades. Cuando la
demanda de paternidad corresponde al ámbito civil, no es necesario la participación de
un fiscal, las partes interesadas, pueden acudir a un determinado laboratorio para
someterse a la prueba y es en este recinto donde existirá el personal entrenado para la
toma de muestras destinadas al análisis de ADN. Así también se pueden remitir las
muestras a través de un courrier hasta el laboratorio, cuando no existe un laboratorio
local. (Fig.1)
4.2.- PRECAUCIONES DURANTE EL PROCESO DE TOMA DE MUESTRAS Y ENVIO
AL LABORATORIO
4.2.1.- Protección del personal.
?? Prevenir, en todo momento, el contacto directo del operario con la muestra
mediante el uso de guantes, mascarilla, bata u otro tipo de ropa protectora. (3)
?? Prohibir el consumo de comidas y bebidas, así como de tabaco. (7)
?? Extremar las condiciones de asepsia y siempre que sea posible utilizar material
desechable. Una vez terminada la recogida de muestras, tirar todo el material
desechable utilizado en contenedores para residuos biológicos, para eliminarlos
posteriormente. (8)
?? Cuando la recogida de muestras se realiza a partir de una exhumación, estas
precauciones deben extremarse al máximo. (3)
4.2.2.- Protección de las muestras. Son numerosos los procesos que pueden
afectar a la integridad de una muestra y por tanto a la posible obtención de perfiles
genéticos, estos procesos son: (3) (9)
?? Contaminación por material biológico humano. Se debe al depósito de
material biológico humano sobre las muestras, con posterioridad a la toma de las
mismas.
?? Contaminación microbiológica. Este tipo de contaminación tiene lugar por el
desarrollo de microorganismos y suele estar favorecida por la humedad y las
altas temperaturas.
?? Contaminación química. Se debe a la presencia de productos químicos que
van a dificultar algunos de los procesos del análisis genético, fundamentalmente
la amplificación y extracción de ADN. Se produce cuando las muestras se
envían inmersas en productos conservantes como el formol, que pueden
comprometer el análisis de ADN.
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Los procesos descritos podrían evitarse o minimizarse si se mantienen algunas
precauciones básicas como son: (3) (10) (11)
?? Usar guantes limpios que deben cambiarse con frecuencia, un par de guantes
nuevos para cada muestra tomada.
?? Evitar hablar o estornudar sobre las muestras. Usar mascarilla.
?? Usar bata u otro tipo de ropa protectora.
?? No añadir conservantes a las muestras.
?? Dejar las muestras secar a temperatura ambiente, en un lugar protegido, antes
de empaquetarlas para su envío definitivo al laboratorio.
?? Empaquetar cada muestra por separado.
?? Siempre que sea posible, empaquetar las muestras en bolsas de papel o cajas
de cartón evitando utilizar plástico.
?? Una vez terminada la recogida de muestras, tirar todo el material desechable
utilizado (guantes, pipetas, papeles....) en bolsas de basura o contenedores para
residuos biológicos, para eliminarlo posteriormente.
4.3.- QUIENES PARTICIPAN DEL ANÁLISIS?
Aunque es aconsejable, no es preciso que la madre esté presente para un estudio de
paternidad biológica. Así también, se puede determinar la paternidad sin la presencia
del presunto padre, a partir de parientes próximos, restos óseos o muestras de
autopsias, en este tipo de situaciones se ha demostrado la gran utilidad de la aplicaci[on
del polimorfismo presente en el cromosoma Y, el cual es heredado de forma integra a
través de la línea paterna, es decir que pasa de padres a hijos varones de forma intacta.
(12). Los análisis de ADN, se realizan generalmente a partir de muestras de sangre o
de mucosa bucal. Este último método es indoloro y no invasivo por lo que
recomendamos emplearlo en el caso de niños muy pequeños. No existe una edad
mínima para realizar la prueba e incluso es posible hacerla prenatalmente previo
acuerdo con una clínica especializada. (13)
4.4.- Toma de muestras
4.4.1 Toma de muestras indubitadas en personas vivas.a. Sangre: es la muestra indubitada clásica utilizada para la obtención de ADN,
y se puede obtener por: (3) (13) (14)
?? Punción venosa. Muestra de unos 5 ml de sangre que deben introducirse en
un tubo que contenga un anticoagulante tipo EDTA. Es importante que esta
muestra una ves tomada se almacenada y transportada a 4 °C.
?? Punción dactilar. Con una aguja o lanceta quirúrgica se pincha la cara
anterior de algún dedo de la mano y 3 a 4 gotas de sangre se depositan
sobre un papel secante. En la actualidad existen kits estandarizados para
este tipo de tomas. (Fig. 2)
b. Células epiteliales bucales (Saliva).
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Obtenidas frotando la parte interna de los carrillos con hisopos de estériles en
seco. Se realizan dos tomas: Con un hisopo se frota la cara interna del carrillo
derecho y con el otro, la cara interna del carrillo izquierdo. Los hisopos,
correctamente identificados, deben dejarse secar a temperatura ambiente en un
lugar protegido. Es fundamental no introducirlos en las fundas hasta que no
estén totalmente secos, ya que en la saliva hay bacterias que proliferan
rápidamente con la humedad, produciendo la degradación del ADN. (15)
5.4.2 Toma de muestras indubitadas en cadáveres en buen estado de
conservación.a. Sangre postmortem: se recoge una muestra de unos 10 ml de sangre que
debe introducirse en un tubo que contenga un anticoagulante tipo EDTA.
Trasnportar en cadena de frío a 4 °C. Si se requiere sangre para la realización
de otro tipo de análisis, deberán recogerse muestras adicionales. (3) (10)
b. Músculo esquelético: Se seleccionan dos fragmentos de músculo
esquelético de la zona mejor conservada, de unos 10 g de peso
(aproximadamente de 2 cm de lado) que se introducen en un recipiente de
plástico con boca ancha y tampón de rosca. Si existen dudas sobre la
conservación del cadáver, conviene extraer 4 piezas dentales, si es posible
molares, y reservarlas, para evitar la posible exhumación del cadáver. (3)
5.4.2 Toma de muestras indubitadas en cadáveres en avanzado estado de
putrefacción o esqueletizados
a. Huesos: Se limpiarán de restos de putrílago y siempre que sea posible se
seleccionará un hueso largo, preferiblemente un fémur. Si no es posible
disponer de esta muestra, lo recomendable es ponerse en contacto con el
Laboratorio para valorar, en función de las muestras disponibles y de su estado,
cuales son las más adecuadas para el análisis. (16)
b. Dientes: Se seleccionan al menos 4 piezas dentales, si es posible molares,
que no estén externamente dañados ni hayan sido sometidos a endodoncias. (3)
Referencias Bibliográficas.1. Ma. Begoña Martínez Jarreta LA PRUEBA DEL ADN EN MEDICINA FORENSE, , Masson S.A. Ed. Barcelona, España. 1999.
2. Lorente, JA y Lorente, M.: Recogida y envío de muestras al laboratorio. En “El ADN y la identificación
en la investigación criminal y en la paternidad biológica”. Ed. Comares. (1995) pp:127-172Brenner C.H. and
3. Recomendaciones para la recogida y envio de muestras con fines de identificación genética. Grupo
Español y Portugues de la ISFG. Madeira 2 de Junio de 2002.
4. Lorente M, Lorente JA. “EL ADN Y LA IDENTIFICACIÓN HUMANA EN LA INVESTIGACIÓN CRIMINAL
Y EN LA PATERNIDAD BIOLÓGICA”.. Granada: Comares, 1995
5. Guisbert Calabuig. MEDICINA LEGAL Y TOXICOLOGIA” (Sexta edición). Ed. Masson S.A. Barcelona.
2003.
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6. Identifying DNA Evidence. National Commission on the Future of DNA Evidence. National Institute of
Justice. USA. 1999.
7. Operaciones fundamentales de Criminalística. Unidad de Policía Científica. Departamento de Interior del
Gobierno Vasco. 1999
8. Revollo S., Rocabado O., Gomes S. La biología Aplicada a la Identificación Humana y Forénsica 2002.
9. Guía para la recolección y manejo de Vestigios Biológicos susceptibles de Análisis Genéticos.
Laboratorio de DNA. Grupo de Biología Forense. Dirección Regional Bogotá. 1998
10. Evidence Colletion Guidelines. California Commission on Peace Officer Standards and Training´s
workbook for the "Forensic Technology for Law Enforcement", 1998
11. Deedrick, D.W.: Hairs, Fibers, Crime and Evidence. Part 3: Crime and Evidence. Forensic Science
Communications (2000)
12. Jobling M.A., Pandya A., Tayler-Smith C. (1997). The Y chromosome in forensic and paternity testing.
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13. Informe del Grupo de Trabajo Europeo de Interpol sobre el Análisis de ADN. El Cairo, 1998.
14. Collection, packaging, storage and shipment of evidence foe DNA tests at cellmark diagnostics.
Cellmark diagnostics,1999
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16. Normas para la preparación y remisión de muestras objeto de análisis por el Instituto de Toxicología.
Orden de 8 de Noviembre de 1996. BOE nº 308 de 23-12-1996.
17. Emili Huguet, Angel Cariacedo INTRODUCCION A LA INVESTIGACION BIOLOGICA DE LA
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18. Huguet E., Carracedo A. Investigación biológica de la paternidad. En: Gisbert Calabuig JA, ed.
Medicina Legal y Toxicología, 5ª ed. Barcelona: Masson, 1998: 1167-1176
1
5
2
3
6
4
7
(Fig.1) Esquema para la obtención de muestras biológicas para el
envío a un laboratorio para estudio de ADN
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(Fig. 2)Diversos tipos de material para tomar pequeñas
cantidades de sangre, como hisopo de algodón o papel
FTA (Whatman), junto con aguja y lanceta para realizar
una punción mínima
(Fig.3) Obtención de muestra de
hisopado bucal
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