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Obtención de Agentes de Control Biológico . Montevideo, 21 de febrero de 2003 Objetivos: • Transmitir la importancia de los procesos de búsqueda y selección de ACB como base del éxito de un programa de CB. • Analizar las diferentes vías o caminos posibles en el proceso de búsqueda y selección. •Discutir los factores que condicionan estos procesos. • Comprender como los resultados finales pueden estar condicionados por las técnicas utilizadas. •Analizar posibles estrategias de búsqueda y selección de ACB Aislamiento de ACB • Aislamiento de ACB – ¿Dónde encontrar ACB? – ¿Cómo aislar? – ¿Cualquier antagonista? – ¿Qué características deseamos encontrar? Importancia del aislamiento y selección • “El aislamiento y la selección de microorganismos antagonistas sustentan a todo Programa de Control Biológico determinando las chances de éxito”. (Bettiol 1991) •El número de microorganismos en una comunidad microbiana es inmenso. – En la rizosfera de un árbol de roble se calcula que existen 45 mil billones de m. o. (45 x 1015) Dónde encontrar ACB • En cualquier lugar puede existir algún microorganismo antagonista. •Muchos m.o. valiosos se encuentran en forma azarosa. Dónde encontrar ACB • En cualquier lugar puede existir algún microorganismo antagonista. •¿Existe algún lugar donde sea más probable hallarlo? •En aquellos sitios donde coincidiendo la presencia del patógeno, la planta huésped y el ambiente favorable al desarrollo de la enfermedad esta no ocurre, es posible que allí esté funcionando naturalmente algún tipo de biocontrol. Dónde encontrar ACB cont.. • Esto puede suceder naturalemente: – suelos supresivos • Podemos forzar la situación: – Colocamos plantas o frutos en situaciones favorables al desarrollo de la enfermedad y seleccionamos aquellos individuos que se mantuvieron sanos. •Monilinia fructicola en duraznos. • Penicillium expansum en manzana. Selección de ACB para Monilinia Aislamiento Algunos lugares • Suelos supresivos • Sobre las partes aéreas de las plantas (m.o. epifíticos, o del filoplano) • Sobre la superficie de las raíces (rizoplano) • Colonizando a patógenos • Dentro de la planta (endofitos) • Fitopatógenos (razas leves o avirulentas) ¿Por qué sobre la planta? • Porque se ha demostrado que sobre la planta viven numerosos m.o. entre los cuales existen antagonistas de los patógenos y promotores de las defensas de las plantas. ¿Por qué sobre la planta? • En el agua de lavado concentrada crecen solamente bacterias y levaduras Aislamiento de frutos ¿Por qué sobre la planta? • Porque se supone que si están allí es porque están adaptados a vivir en esas condiciones. – Si queremos controlar a un patógeno que ingresa por heridas nos interesa que nuestro antagonistas sea un buen colonizador de heridas. ¿Por qué sobre la planta? • Porque existe mayor aceptación por parte de los consumidores a admitir a los m.o. que naturalmente viven sobre la planta que a otros extraños. Colonizadores de patógenos • Se pueden encontrar antagonistas colonizando naturalmente a los patógenos de plantas. •Se pueden utilizar a los patógenos como cebo para capturar a sus antagonistas. Colonizadores de patógenos Endófitos • Para superar una de las limitantes mayores del CB. Obtener antagonistas con capacidad curativa. • Control de patógenos vasculares. Plant species Lichens Mosses Ferns Conifer needles Conifer twigs Dicots (general) Erica leaves Erica stems Rhododendron Vaccinium Minutes in NaOCL 1 1 3 5 7 3 3 5 3 3 NaOCl dilution Reference 1:5 1:5 1:5 1:2 1:2 1:5 1:5 1:5 1:5 1:5 Petrini (1986) Petrini (1986) Dreyfuss & Petrini (1984) Carroll & Carroll (1978) Carroll & Carroll (1978) Petrini (1986) Petrini (1986) Petrini (1986) Petrini (1985) Petrini (1985) Aislamiento • En medio generales • Selectivamente – Hongos – Bacterias – Capaces de digerir al patógeno Selección • In vitro – Cultivos duales • In vivo – Inoculación en plantas • Intermedios – utilizando trozos de vegetal Cultivos duales • Consiste en sembrar en una misma placa enfrentados al antagonista y al patógeno Selección “in vitro” • Fácil de realizar • Rápida • Menor costo relativo. • Solamente selecciona por algunos mecanismos de acción, descartando antagonistas que podrían funcionar sobre la planta. • Tiene baja correlación con la performance a campo. Selección “in vivo” • Consiste en inocular plantas con el patógeno y al antagonista Selección sobre frutos Selección “in vivo” • Selecciona independientemente de los mecanismos de acción antagónica. • Implica un mayor trabajo • Mayor tiempo • Mayor costo relativo. • Mayor equipamiento (Plantas, invernáculo, personal, etc) Selección combinada • Consiste en inocular tejidos vegetales en el laboratorio. Otras consideraciones • ¿A quién debe enfrentar nuestro antagonista? • ¿En qué condiciones? •Elección de la cepa más agresiva •Elección de la cepa más resistente a fungicidas Resumen final • El aislamiento y selección de antagonistas es un proceso fundamental en cualquier programa de control biológico. • Las técnicas utilizadas pueden sesgarnos los resultados. •No existe una única estrategia de trabajo. • El arte está en diseñar aquella estrategia que nos conduzca en la forma más directa hacia nuestro objetivo final.