Download Aislamiento y seleccion de ACB

Obtención de Agentes de
Control Biológico .
Métodos de aislamiento y selección
Objetivos:
„ Transmitir la importancia de los procesos de búsqueda
y selección de ACB como base del éxito de un programa
de CB.
„ Analizar las diferentes vías o caminos posibles en el
proceso de búsqueda y selección.
„Discutir los factores que condicionan estos procesos.
„ Comprender como los resultados finales pueden estar
condicionados por las técnicas o métodos utilizados.
„Analizar posibles objetivos y estrategias de búsqueda y
selección de ACB
Importancia del aislamiento y
selección
„ “El aislamiento y la selección de microorganismos
antagonistas sustentan a todo Programa de Control
Biológico determinando las chances de éxito”.
(Bettiol 1991)
Aislamiento de ACB
„ Aislamiento de ACB
„
¿Dónde encontrar ACB?
¿Cómo aislar?
„ ¿Cualquier antagonista?
„ ¿Qué características deseamos encontrar?
„
Dónde encontrar ACB
„ En cualquier lugar puede existir algún
microorganismo antagonista.
„Muchos m.o. valiosos se encuentran en forma
azarosa.
„El número de microorganismos en una comunidad
microbiana es inmenso.
„ En la rizosfera de un árbol de roble se calcula que
existen 45 mil billones de m. o. (45 x 1015)
1
Dónde se puede encontrar un ACB
Penicillium rugulosum
„ En cualquier lugar puede existir algún
microorganismo antagonista pero….
„¿Existe algún lugar donde sea más probable
hallarlo?
„En aquellos sitios donde, coincidiendo la presencia
del patógeno, la planta huésped y el ambiente
favorable al desarrollo de la enfermedad ésta no
ocurre, es posible que allí esté funcionando
naturalmente algún tipo de biocontrol.
Dónde encontrar ACB cont..
Selección de ACB para Monilinia
„ Esto puede suceder naturalmente:
„
suelos supresivos
„ Podemos forzar la situación:
„ Colocamos plantas o frutos en situaciones
favorables al desarrollo de la enfermedad y
seleccionamos aquellos individuos que se
mantuvieron sanos.
„
„
Monilinia fructicola en duraznos.
Penicillium expansum en manzana.
Aislamiento
Selección de ACB para P. expansum
Algunos lugares
„ Suelos supresivos
„ Sobre las partes aéreas de las plantas (m.o. epifíticos,
o del filoplano)
„ Sobre la superficie de las raíces (rizoplano)
„ Colonizando a patógenos
„ Dentro de la planta (endofitos)
Aislamiento
„ Fitopatógenos (razas leves o avirulentas)
2
Algunos Objetivos
„ Efectividad antagónica.
„ Adaptación al lugar de acción. (hojas, frutos,
heridas)
¿Por qué sobre la planta?
„ Porque se ha demostrado que sobre la planta viven
numerosos m.o. entre los cuales existen antagonistas
de los patógenos y promotores de las defensas de las
plantas.
„ Adaptación al ambiente. (Cámara de frigorífica)
„ Espectro de acción.
„ Ausencia de producción de antibióticos
„ Resistencia a fungicidas.
¿Por qué sobre la planta?
„ En el agua de lavado concentrada crecen
solamente bacterias y levaduras
¿Por qué sobre la planta?
„ Porque se supone que si están allí es porque están
adaptados a vivir en esas condiciones.
„
Si queremos controlar a un patógeno que ingresa por
heridas nos interesa que nuestro antagonistas sea un buen
colonizador de heridas.
Chalutz, E., and Wilson, CL .1990. "Postharvest biocontrol of green and
blue mold and sour rot of citrus fruit by Debaryomyces hansenii". Plant
Disease. 74(22):134-137.
¿Por qué sobre la planta?
Aislamiento a partir de la flora epifítica
del fruto
„ Porque existe mayor aceptación por parte de los
consumidores a admitir a los m.o. que naturalmente
viven sobre la planta que a otros extraños.
3
Aislamiento a partir de la flora epifítica
del fruto
Aislamiento de colonizadores de
heridas
Aislamiento
Aislamiento de cepas adaptadas al
frío
Aislamiento de cepas adaptadas al
frío y heridas.
Aislamiento
Agar jugo de
manzana
Colonizadores de patógenos
5 ºC
Colonizadores de esclerotos
„ Se pueden encontrar antagonistas colonizando
naturalmente a los patógenos de plantas.
„ Se pueden utilizar a los patógenos como cebo para
capturar a sus antagonistas.
4
Endófitos
„ Microorganismos que habitan en el interior de los
tejidos vegetales sin causar aparentemente ningún daño
a su hospedero.
Endófitos
„ Lavado de los frutos con agua destilada estéril
Endófitos
„ Para superar una de las limitantes mayores del
CB. Obtener antagonistas con capacidad
curativa.
„ Control de patógenos vasculares.
Endófitos
„ Endófitos de frutos
„ 1 min. En alcohol 96%
„
„ Hipoclorito al 3% por 4 min.
„
„ 3 lavados con agua destilada estéril
„
Hipoclorito de Sodio al 1% + Tween 80 por 3 min.
Enjuaga con agua destilada estéril
Secado y siembra de discos de fruta en medio de cultivo.
„ Trozos se Siembran en medio Sabouraud
„
Camatti-Sartori et al. VII Reuniao de controle
biologico de fitopatogenos. 26-27 de novembro de
2001. Bento Goncalvez, RS.
Aislamiento
„ En medio generales
„ Selectivamente
„
„
„
Hongos
Bacterias
Capaces de digerir al patógeno
Selección
„ In vitro
„
Cultivos duales
„ In vivo
„
Inoculación en plantas
„ Intermedios
„
utilizando trozos de vegetal
„ Buscando alguna característica especial
5
Cultivos duales
„ Consiste en sembrar en una misma placa
enfrentados al antagonista y al patógeno
Selección “in vitro”
„ Fácil de realizar
„ Rápida
„ Menor costo relativo.
„ Solamente selecciona por algunos mecanismos de
acción, descartando antagonistas que podrían
funcionar sobre la planta.
„ Tiene baja correlación con la performance a campo.
Selección “in vivo”
Selección sobre frutos
„ Consiste en inocular plantas con el patógeno y
al antagonista
Selección “in vivo”
„ Selecciona independientemente de los mecanismos
de acción antagónica.
Selección combinada
„ Consiste en inocular tejidos vegetales en el
laboratorio.
„ Implica un mayor trabajo
„ Mayor tiempo
„ Mayor costo relativo.
„ Mayor equipamiento (Plantas, invernáculo, personal,
etc)
6
Selección de levaduras productoras
de sideróforos
Selección de cepas resistentes a
fungicidas
Selección de cepas no productoras
de antibióticos
Selección de cepas de con amplio
espectro
X
X
X
Otras consideraciones
Resumen final
„ ¿A quién debe enfrentar nuestro antagonista?
„ El aislamiento y selección de antagonistas es un
„ ¿En qué condiciones?
proceso fundamental en cualquier programa de
control biológico.
„ Las técnicas utilizadas pueden sesgarnos los
resultados.
„ No existe una única estrategia de trabajo.
„ El arte está en diseñar aquella estrategia que nos
conduzca en la forma más directa hacia nuestro
objetivo final.
„ Elección de la cepa
más agresiva
„ Elección de la cepa más
resistente a fungicidas
7