Download Anticuerpo IgE

Universidad Nacional
Autónoma de México
Facultad de Química
Inmunología Aplicada
Hipersensibilidad Tipo I
Frausto Castorena Jarumi Fernanda
Gallardo Celis Janet
García Hernández Liliana
Hernández Carvajal Ixzel
Hipersensibilidad tipo I
 Los individuos que tiende a desarrollar
reacciones de hipersensibilidad intensas
se denominan atópicos y se dice que
sufren alergias.
 Los antígenos que desencadenan
intensas reacciones de hipersensibilidad
inmediata se llaman alérgenos.
 Atopia significa “inusual”, pero se sabe
que la alergia es bastante común.
Anticuerpo IgE
 La IgE fue la última inmunoglobulina
descubierta (año 1967). Es el isotipo de
inmunoglobulina que contiene la cadena
pesada .
 Su concentración sérica y su vida media son
las más bajas de todas las inmunoglobulinas,
normalmente presente en el plasma en una
concentración menor a 1 g/mL.
Anticuerpo IgE
 El valor de IgE sérica se expresa normalmente en
unidades internacionales (UI) por ml (1 UI = 2,4
ng de proteína).
 El nivel de IgE varía con la edad; en la sangre de
cordón de recién nacidos normales es interior a 0.5
UI/ml, y en el adulto normal es alrededor de 20
UI/ml.
 Se encuentra aumentada en diferentes condiciones
alérgicas.
Anticuerpo IgE
 La defensa contra muchas infecciones
por helmintos está mediada por
anticuerpos IgE y eosinófilos.
 Los helmintos estimulan a Th2, que
secretan IL-4 e IL-5. La IL-4 estimula la
producción de IgE, y la IL-5 estimula el
desarrollo y activación de los eosinófilos.
Anticuerpo IgE
Alergénos
 Son
glicoproteínas,
lipoproteínas
o
sustancias químicas conjugadas con
proteínas
o
haptenos
de
origen
generalmente biológico.
 Todos los epítopos alergénicos dentro de
una proteína producen una respuesta
biológica bien definida y medible en
individuos alérgicos.
Alergénos
 Los alérgenos habituales consisten en
proteínas de polen, ácaros del polvo
doméstico, capas de animales y ciertos
alimentos
 Las
proteínas
alergénicas
pueden
identificarse usando los anticuerpos IgE
contenidos en el suero en combinación con
numerosos ensayos inmunoquímicos.
Alergénos
 Extractos de alérgenos de origen natural se
consideran heterogéneos, debido a que
contienen muchas proteínas alergénicas.
 Los pacientes responden a combinaciones
de isoalergénos de forma diferente, los
cuales son casi idénticos excepto por
pequeñas diferencias en su composición de
aminoácidos.
Diagnóstico de Laboratorio
 Se basa en la historia clínica y examen físico
del paciente.
 Todos los pacientes con antecedentes de una
alergia pueden tener un resultado positivo en
la prueba de IgE específica-alérgeno.
Pruebas Cutáneas
 Se usan en el diagnóstico de las
enfermedades alérgicas inducidas por
alergenos inhalados y por alimentos.
 Pueden ser epicutáneos ("prick" o punción y
"scratch" o escarificación) o intracutáneos
(intradérmicos).
Pruebas Cutáneas
 Se produce una respuesta positiva cuando el
alergeno se une a las moléculas de IgE específicas
presentes en la superficie de las células cebadas de
la dermis causando su entrecruzamiento.
 Esta reacción Ag-Ac causa la rápida liberación (en
15 a 20 min) de mediadores químicos como la
histamina y otros, responsables de la respuesta
edematosa rodeada de un eritema.
 Formación del
habón
Pruebas Cutáneas
 Son simples de efectuar, seguros, rápidos y
económicos. Sin embargo, están sujetos a
numerosas variables relacionadas tanto con la
técnica misma como con el paciente.
 Los alergenos a usar dependen de la historia clínica,
de la edad del paciente, y de la exposición
ambiental.
Pruebas Cutáneas
(Interpretación)
 Puede registrarse el diámetro promedio del
edema, el diámetro mínimo de un edema
significativo (>2, 3, 4, o 5 mm).
 Se recomienda en general la medición de los
diámetros mayores, tanto del edema como
del eritema y sus correspondientes diámetros,
y su interpretación en relación con el control
negativo y positivo.
Pruebas Cutáneas
(Interpretación)
 Un prick test igual o mayor que el control de
histamina probablemente es de relevancia
clínica, en cambio, reacciones menores que
la causada por histamina son probablemente
irrelevantes.
Tabla 14.3. Tabla de lectura de pruebas cutáneas
Pruebas Cutáneas
Los siguientes medicamentos pueden interferir con
las pruebas cutáneas y deben evitarse:
 Antihistamínicos, tanto de acción rápida como
prolongada (el astemizol puede interferir hasta por
6 semanas).
 Antidepresivos tricíclicos como, la doxepina,
clorpromazina, hidroxicina.
 Uso prolongado de esteroides tópicos potentes en el
sitio de la prueba.
Pruebas Cutáneas
 Método de tamizado (screening) más útil en la
identificación de atopia, tanto en casos
individuales como en grupos de individuos.
 Un test posiftvo sólo identifica la presencia de
anticuerpo (Ac) IgE contra el Ag usado, lo que en
un paciente sintomático no permite suponer que
estos Ac sean los responsables de los síntomas, sin
considerar cuidadosamente la historia del paciente,
puede constituir una manifestación de alergia
actual, o ser el resultado de una, sensibilización
previa.
PRUEBAS
DIAGNÓSTICO
IgE total en suero
Triptasa de las células mastoides
IgG específica para el veneno de Hymenoptera
Medida de la cantidad de leucotrienos, así como de
la cantidad de proteínas granulares de los
eosinófilos, y óxido nítrico
Precipitinas para PH
ENSAYO RAST
Medición
de la
respuesta
Ensayo RAST de 2a.
Generación.
Mayor cantidad de alergenos y de mejor calidad
Nuevas matrices
Nuevos marcadores
Calibración que permite obtener datos de forma
cuantitativa
Son ensayos más sensibles, específicos,
cuantitativos, reproducibles y automatizados
Sin embargo se deberá tener un estricto control de
calidad.
Comparación de resultados en los
ensayos de piel y suero
Alergeno
IgE (suero) RAST
Punción
dérmica
Veneno y
fármacos
Complementaria a la Insuficiente
ID
Latex
Inadecuado
Punción
intradérmica
(ID)
Se prefiere
Innecesario
Alimentos Aceptable
Se debe
realizar
Aceptable
Polen
Aceptable
Innecesario
(Falsos +)
Aceptable
Innecesario
(Falsos +)
Ensayos de cernimiento para
multialergenos IgE
Se emplean alrededor de 15 alergénos
Permite confirmar la ausencia de
enfermedades atópicas o bien que no estén
mediadas por IgE
Reducen la necesidad de realizar múltiples
pruebas de forma in vitro o in vivo.
IgE total en suero
Única prueba regulada
Se emplea la fase estacionaria más adecuada
Se emplean los marcadores adecuados
La sensibilidad analítica del ensayo es de 0.5
a 1 g/L
Resultados reportados de acuerdo a la edad
del paciente
HABILIDAD DE LA PRUEBA PARA EL TOTAL Y
ANTICUERPOS ALERGENO ESPECIFICO DE
IgE





CLIA-88 requiere un estudio de habilidad externo.
El estudio consiste en el análisis de 5 pruebas cada 17 semanas
(3 ciclos por año), para el el total de IgE en suero y 5 para
anticuerpos IgE alergeno-especifico, y un multialergeno.
Para el suero total se informan, la media, SD, coeficiente de
variación y el valor medio, bajo y alto, para cada método.
Los laboratorios que reportan el total de IgE en suero fuera de
media +/- 3 SD, son clasificados como “fuera de control”.
Los IgE alergeno-especifico son analitos no regulados por los
estatutos de CLIA-88
RAST ENSAYO DE VENENO POR
INHIBICION COMPETITIVA



Similitud estructural entre
avispas vespid y Polistes.
REACTIVIDAD- CRUZADA
Los alergénos del veneno son
hialuronidasa, fosfolipasa
A1/B y antigeno 5.
Se usa para definir bien la
composición terapéutica
apropiada de venenos por la
picadura de insecto a pacientes
alérgicos que tienen
sensibilidad multiple a
reactividad-cruzada potencial y
son elegidos para recibir
inmunoterapia.



Esta prueba se indica para pacientes que
tiene una respuesta superficial fuerte o un
nivel alto de anticuerpos IgE en suero, al
veneno de chaqueta amarilla (YJV) y una
reactividad superficial débil o un nivel
bajo de anticuerpo IgE específico en suero
para el veneno de avispa Polistes (PWV).
El suero de un paciente que contiene
anticuerpos especificos IgE YJV y PWV
es preincubado con YJV soluble (veneno
heterologo), PWV (veneno homologo
control), o buffer (control no inhibidor).
Las mezclas son incubadas en tubos
separados con PWV allergosorbent y el
ensayo se completa normalmente con la
final adición de anticuerpo IgE
antihumano marcado.
 La cantidad de IgE anti-PWV unida al PWVallergosorbent es medida, si existe una inhibición
> 95% de ligar al anticuerpo con el YJV soluble es
considerada una completa inhibición-cruzada.
HYMENOPTERA IgG
VENENO-ESPECIFICO.

Clínicamente la
inmunoterapia exitosa se
acompaña casi siempre por
los niveles altos de IgG en
suero alergeno-específico. Sin
embargo en pacientes con
rhinitis alergica donde por
regla general se mide IgG (o
subclases) no hay correlación
con la mejora en los sintomas
clínicos de pacientes con
inmunoterapia de veneno.



Se realizó un estudio utilizando el suero de 109 pacientes veneno
alergicos. Con el proposito de examinar si los niveles de IgG pudieran
predecir el riesgo de una reacción sistémica después de la picadura en
los pacientes que reciben inmunoterapia.
De 211 picaduras realizadas en este grupo en un período de 4 años,
los síntomas sistémicos ocurrieron en 16% de aquellos con un nivel
de anticuerpos IgG veneno específico <3 ug/mL y en sólo 1.6% de
aquellos con un nivel de anticuerpos IgG veneno específico > 3
ug/mL. La proporción más alta de reacciones alérgicas (26%) ocurrió
entre pacientes que tenían ambos; un nivel de anticuerpo IgG veneno
específico <3 ug/mL y <4 años de inmunoterapia de veneno.
El estudio concluyó que la cantidad de anticuerpo IgG venenoespecífico puede ser de valor para individualizar la dosis y frecuencia
de inyecciones mientras aumentan al máximo los efectos protectores.
Esta es la utilidad clínica de medir el anticuerpo IgG venenoespecífico, sin embargo, parece ser restringida a los primeros 4 años
de inmunoterapia de veneno.
ANTICUERPO IgG
PRECIPITADO
 HP, también llamada alveolitis alérgica extrínseca, es una
reacción inflamatoria en la parte intersticial del pulmón y la
parte terminal del bronquiolo que resultan de la exposición
crónica a antígenos orgánicos.
 La histología de la lesión pulmonar indica una patología
mediada por células; la mayoría de los pacientes con HP
desarrolan niveles altos de IgG vs. el antigeno orgánico en
la sangre.
 En el laboratorio clínico todavía se realiza la difusión doble
clásica (ouchterlony).

Triptasa de Células Mast
 Serin esterasa de 4
subunidades cada una
con un sitio
enzimáticamente
activo.
Triptasa de Células Mast
-protriptasa (número de mastocitos)
-triptasa (activación de mastocitos)
-protriptasa = triptasa total - -triptasa
Ensayo BHT
Basophil Histamine Release
 Determinar la potencia de extractos
alergenos
 Detectar la presencia de IgE alergenoespecífica en la superficie de basófilos
Prueba Directa (Direct Challenge)
Sensibilización Pasiva
Ensayo BHT
Basophil Histamine Release
DC
Leucocitos
Incubar con diferentes
concentraciones del
extracto alergeno
Antígeno
SP
Basófilos
Incubar con suero que
contiene anticuerpos
IgE
Liberación de
Histamina
Cuantificación de histamina
en el sobrenadante por
técnicas enzimáticas,
radiométricas o
espectrofluorométricas
CDR del ensayo BHT
100
% Liberación
de Histamina
50
0
Sensibilidad
Relativa
[alergeno]
Pruebas in vivo
(Diagnóstico)
 Broncoprovocación:
Identificar la relación entre una sustancia inhalada y el
cambio en la fisiología bronquial del paciente.
Útil en el diagnóstico de casos difíciles de asma.
Se lleva a cabo administrando metacolina o histamina y
además un alergeno en dosis crecientes.
Se toma como respuesta positiva a la concentración del
agonista en una gota de volumen de expiración 1 segundo o
más después
de el tiempo de preprovocación.
Pruebas in vivo
 Provocación Nasal
Administración de un buffer y de un alergeno a diferentes
concentraciones.
Se evalúan los síntomas posteriores a la concentración
correspondiente administrada (número de estornudos
inducidos y/o la concentración de mediadores liberados por
mastocitos o la albúmina liberada en el fluido nasal).
Pruebas in vivo
 DBPCFC (Double-blind, placebo-controlled food challenge).
Ingestión controlada de alimentos frecuentemente consumidos y
contienen potentes alergenos.
Leche de vaca (caseína, -lactoglobulina, -lactoalbúmina)
Huevo (ovoalbúmina, ovotransferrina)
Cereales (trigo, centeno, cebada, avena)
Legumbres (cacahuates, soya)
Pescado y mariscos (camarón, langosta, cangrejo)
que
Pruebas in vivo
Se elimina la ingesta de las comidas sospechosas entre
7 y 14 días antes de la prueba.
Se administran diferentes cantidades de comida
liofilizada o en cápsulas.
Se excluyen una reactividad de importancia clínica si se
toleran 10 g de el liofilizado o la comida en cápsulas.
Pruebas de aeroalergenos en
interiores
 Se colecta el polvo en una determinada área.
 Se extraen alergenos solubles
 Se cuantifican por anticuerpos monoclonales
basados en ensayos inmunoenzimáticos
Principales aeroalergenos
(interiores)
Der p1 / Der f 1
Dermatophagoides
Fel d 1
Gato
Can f 1
Perro
Bla g 1 / Bla g 2
Cucaracha
Mus m 1
Ratón
Pruebas de aeroalergenos en
interiores
 Se utiliza una placa rotatoria que se expone
al medio ambiente
 Las partículas suspendidas en el aire se
“pegan” a esta placa.
 Generalmente se reportan niveles de polen
(granos por m3) y moho (esporas por m3).