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Dra. M. L. Ortiz. Dep. de Microbiología y Parasitología. Facultad de Farmacia
Tema 11
Investigación y Recuento de Staphylococcus aureus
Staphylococcus aureus es un coco Gram+, que se divide en más de un plano, por lo que forma agrupaciones
irregulares en racimos. Son inmóviles y carecen de esporas.
En general, la presencia de un número elevado de Staphylococcus aureus en un alimento refleja higiene
defectuosa por mala manipulación. Si, además, los St. aureus aislados son cepas enterotoxigénicas, suponen un
riesgo para la salud.
Puede ocurrir que no se detecte St. aureus en un alimento o que el número detectado sea pequeño y que, sin
embargo, exista cantidad detectable suficiente de enterotoxina estafilocócica.
En este caso, los
microorganismos que originaron la toxina han ido descendiendo en número e, incluso, desapareciendo, mientras
que la toxina, por su mayor resistencia, permanece en el alimento.
Produce una toxiinfección alimentaria donde interviene una enterotoxina termoresistente, que no se inactiva
con la cocción normal o la pasteurización. El microorganismos no crece en el tubo digestivo, sino que la toxina
activa unos receptores en el intestino que generan unos impulsos que son los que excitan el centro subcortical
del vomito, no actúan como enterotoxinas clásicas sino mas bien como neurotoxinas.
La fuente principal de S.aureus se sitúa en la nariz humana, aunque está también en la piel, heridas infectadas,
quemaduras, granos, acne, etc. La mayoría de los brotes se originan por contaminación de los alimentos por
personas de la industria, generalmente después de la cocción.
El periodo de incubación es bastante corto entre 30 minutos y 8 horas siendo lo normal entre 2-4 horas.
No todas las personas que ingieren alimento caen enfermas, ni todas tienen los mismos síntomas, la gravedad
varía según la concentración de enterotoxina en el alimento, la cantidad ingerida y la susceptibilidad del
individuo. Los principales síntomas son nauseas, vómitos, dolor abodominal y diarrea, no suele haber fiebre e
incluso la temperatura puede ser inferior a la normal. La duración de los sintomas es relativamente corta y cesan
pronto, unas 24 horas.
Dra. M. L. Ortiz. Dep. de Microbiología y Parasitología. Facultad de Farmacia
Staphylococcus aureus
Acne
Phylum Firmicutes
Clase Bacilli
Order Bacillales
Familia Staphylococcaceae
Impétigo
Foliculitis
Forúnculos
Sind. shock tóxico
Sind piel escaldada
Procesos supurativos: Los microorganismos de a piel y mucosas pueden colonizar glándulas sebáceas o
folículos pilosos, originando foliculitis , o forúnculos cuando se sitúa en el tejido subcutáneo, en la base de
la pestaña ocasiona el orzuelo común. También ocasiona infecciones en heridas superficiales que pueden
ser graves en los hospitales y complicaciones en el acne.
Procesos tóxicos: Toxiinfección alimentaria: consumo de alimentos contaminados con enterotoxina
estafilococica, el período de incubación es de 1-6 horas, síntomas fiebre no muy elevada, vómitos y diarreas.
Impétigo: infección de la piel, que ocasiona ampollas, ocasionada por una toxina exfoliativa. Síndrome de
la piel escaldada: afecta a recien nacidos esta ocasionada por una toxina exfoliativa que produce ampollas
y descamación de laminas epidérmicas. Síndrome de shock tóxico: causado por una exotoxina, se
caracteriza por, fiebre alta, vómitos, diarrea, confusión y exantema cutáneo, que recuerda a las quemaduras
solares, entre 3 y 7 días después del comienzo, se observa descamación de la piel que conduce a
desprendimiento epidérmico, sobre todo en las palmas de las manos y las plantas de los pies.
Tratamiento: El 90% de las cepas son resistentes a penicilina por la producción de penicilinasa ($lactamasa), por lo que siempre es recomendable realizar antibiograma. Son sensibles a novobiocina, lo que
se emplea con carácter taxonómico.
Dra. M. L. Ortiz. Dep. de Microbiología y Parasitología. Facultad de Farmacia
Tema 11
Investigación y Recuento de Staphylococcus aureus
Caldo de Giolitti Cantoni:
Triptona
10 g
Extracto de carne
5g
Extracto de levadura
5g
Cloruro de litio
5g
Manitol
20 g
Cloruro sódico
5g
Glicina
1,20 g
Piruvato sódico
3g
Agua destilada
1.000ml
Recuento N.M.P.
Suspension madre 1:10 TW
1 ml
1 ml
10-1
1 ml
1 ml
10-2
1 ml
19 ml Gliolitti-Cantoni
Incubación 37ºC, 24-48 h
Incubación 37ºC, 18-24 h
Baird-Parker
Colonias típicas
10-3
1 ml
Las colonias típicas son
negras, brillantes, rodeadas
de un halo claro debido a la
acción de la lipasa sobre la
lipoproteína de la yema de
huevo, y una zona opaca
debido a la formación un
precipitado de sales de Ca y
Mg
Pruebas confirmativas
Coagulasa +
DNAsa +
Agar PCA
Dra. M. L. Ortiz. Dep. de Microbiología y Parasitología. Facultad de Farmacia
Tema 11
Investigación y Recuento de Staphylococcus aureus
Método de enriquecimiento en tubo
Presencia - Ausencia
Suspension madre 1:10 TW
1 ml
Caldo de Giolitti Cantoni:
Triptona
10 g
Extracto de carne
5g
Extracto de levadura
5g
Cloruro de litio
5g
Manitol
20 g
Cloruro sódico
5g
Glicina
1,20 g
Piruvato sódico
3g
Agua destilada
1.000ml
Método de recuento en placa
Suspension madre 1:10 TW
0,1 ml
Baird-Parker
Incubación 37ºC, 18-24 h.
Colonias típicas
Agar PCA
19 ml Gliolitti-Cantoni
Incubación 37ºC, 18-24 h.
Baird-Parker
Incubación 37ºC, 18-24 h.
Colonias típicas
Pruebas confirmativas
Agar PCA
Coagulasa +
DNAsa +
Medio Baird Parker (B P)
Triptona
10,00 g
Extracto de carne
5,00 g
Extracto de levadura
1,00 g
Piruvato sódico
10,00 g
Glicina
12,00 g
Cloruro de litio
5,00 g
Agar
20,00 g
Agua destilada
1.000 ml
Dra. M. L. Ortiz. Dep. de Microbiología y Parasitología. Facultad de Farmacia
Tema 12
Investigación y recuento de Bacillus cereus
Bacillus cereus es una bacteria de forma bacilar, Gram +, bastante grandes, miden 1 - 1,2 x 3 - 5 μm. Esporulados,
con esporas ovaladas centrales o subterminales que no deforman al bacilo. Es normalmente móvil, por flagelos
peritricos, aunque existen variantes inmóviles. Son anaerobios facultativos; y aunque es Gram+, en cultivos viejos,
muy esporulados, la coloración de Gram puede ser variable, debido a que la espora no se tiñe con el Gram.
Catalasa+. Reduce los nitratos a nitritos. Es Voges Proskauer +. Fermenta la glucosa, la sacarosa, la salicina y el
glicerol. No fermenta el manitol ni la arabinosa. Produce lecitinasa.
Se encuentra frecuentemente en el suelo, polvo, vegetales, cereales, harinas, especias, plantas medicinales y en
algunos alimentos crudos o procesados. En condiciones normales y cuando su número es limitado, no se considera
patógeno; puede producir enfermedad en el hombre si concurren ciertas condiciones:
-Cuando el alimento está muy contaminado (cifras cercanas a 106 y superiores).
-Cuando la temperatura de conservación del alimento es adecuada para el desarrollo del microorganismo (12-45ºC).
- Cuando el tratamiento térmico al que se ha sometido el alimento para su preparación ha sido insuficiente para
destruir las esporas.
Dra. M. L. Ortiz. Dep. de Microbiología y Parasitología. Facultad de Farmacia
Investigación y recuento de Bacillus cereus
Técnica de recuento en placa
Suspension madre 1:10 TW
1 ml
10 ml
1 ml
1 ml
MYPA de Mossel
Manitol Yema de huevo Polymixina
Peptona
10 g
Extracto de carne
1 g
D-Manitol
10 g
Cloruro sódico
10 g
Rojo fenol
0,025 g
Agar
15 g
Agua destilada
1.000 ml
1 ml
10-2
10-3
10-4
0,1 ml
10-5
Pruebas confirmativas
Crecimiento en anaerobiosis +
Gram +
MYPA Mossel
Incubación 31ºC, 24 h.
Contar placas con 15-150 colonias
Añadir
10
ml
de
emulsión de yema de
huevo y 1 ml de
sulfato de Polimixina al
1 por 1000 por cada 90
ml de medio basal
Las colonias aparecen sobre un medio
de color rosado, al no utilizar el
manitol, y rodeadas de un halo de
precipitación blanco y denso por la
acción de la lecitinasa sobre la
lecitina de la yema de huevo, y una
zona de tonos violeta, alrededor, por
acumulación de productos insolubles
formados por esta degradación.
9 ml TW
10-1
Tema 12
VP +
Reducción
Nitratos +
Movilidad +
Dra. M. L. Ortiz. Dep. de Microbiología y Parasitología. Facultad de Farmacia
Investigación y recuento de Bacillus cereus
Técnica del NMP
Suspensión madre 1:10 TW
1 ml
1 ml
1 ml
10-1
1 ml
10-2
1 ml
10-3
1 ml
MYPA de Mossel
Manitol Yema de huevo Polymixina
Peptona
10 g
Extracto de carne
1 g
D-Manitol
10 g
Cloruro sódico
10 g
Rojo fenol
0,025 g
Agar
15 g
Agua destilada
1.000 ml
Mac Conkey
Incubación 31ºC, 24 h.
Añadir
10
ml
de
emulsión de yema de
huevo y 1 ml de
sulfato de Polimixina al
1 por 1000 por cada 90
ml de medio basal
Caldo tripticasa-soja-polimixina
Tripticasa
17 g
Peptona
3g
Cloruro sódico
5g
Fosfato dipotásico
2,50 g
Dextrosa
2,50 g
Agua destilada
1.000 ml
Las colonias aparecen sobre un medio de color rosado, al no utilizar el manitol,
y rodeadas de un halo de precipitación blanco y denso por la acción de la
lecitinasa sobre la lecitina de la yema de huevo, y una zona de tonos violeta,
alrededor, por acumulación de productos insolubles formados por esta
degradación.
Pruebas confirmativas
Crecimiento en anaerobiosis +
Gram +
9 ml Tripticasa Soja Polimixina
Incubación 31ºC, 24 h.
Tema 12
VP +
Reducción
Nitratos +
Movilidad +